Name: תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-31T21:32:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: למד תיוג תאי גזע אנושיים עם חלקיקי תחמוצת ברזל לצורך מעקב לא פולשני בחיות מודל באמצעות דימות תהודה מגנטית. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של טיפולי תאי גזע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקט זה מומן על ידי מענק ג&#39;יי טל! SEED ליאון ממכון קליפורניה עבור רפואה רגנרטיבית. טוביאס הנינג המחקר מומן על ידי מענק מן האגודה הגרמנית למחקר (DFG, HE 4578/1-2). אנחנו רוצים להכיר תודה Meneses חואניטו את עצתו על תרבות בתאי גזע עובריים אנושיים.

תיוג של hMSC עם Ferucarbotran זוהי טכניקה תיוג אדם בתאי גזע mesenchymal עם Ferucarbotran, תחמוצת ברזל סוכן מבוסס בניגוד עבור MR הדמיה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל, צלחת התאים 18-24 שעות לפני ההליך תיוג ב T75 צלוחיות בנקודת המפגש של 80%. אם אתה משתמש צלחת תרבות שונה, זה שווה כ - 10,000 תאים לכל 2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להתחיל עם הכנת התקשורת תיוג על ידי הוספת 30 μl של Resovist עד 8 מ&quot;ל של התקשורת החופשית בסרום. זה בתווית הבקבוק T75 80% confluency, המתאים בריכוז של מדיה 100 Fe / מ&quot;ל ​​מיקרוגרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוריד את המדיה תרבות לשטוף את התאים פעם עם PBS או סרום ללא התקשורת. הדבר נעשה כדי להיפטר חלבונים בסרום שיורית ומרכיבים אחרים של התקשורת שיכול לקשור את חומר ניגוד וסימון יעילות להשפיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את התקשורת תיוג כדי הבקבוק והחזיר את הבקבוק בחממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 2 שעות, להוסיף 2ml של FCS כך ריכוז סופי של FCS 20% מושגת. הדבר נעשה על מנת להבטיח כי התאים אינם מקבלים גירוי להבדיל, אך במקום לגדול בסביבה המוכרת שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים על פני 18 שעות. זה נעשה הכי טוב הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, לשטוף את התאים עם PBS, אז trypsinize אותם כרגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinized פעם, על השעיית התא צריך להיות שטף 3 פעמים כדי להיפטר סוכן, שיורית בניגוד חינם בתקשורת. זה נעשה עם PBS centrifuging התאים ב RCF 400 במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התא גלולה הסופי ניתן resuspended ומוכן ניסויים נוספים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים עכשיו, כמה שאולי אבדו במהלך השלבים כביסה הקודם. כמו כן, לבצע בדיקות כדאיות בשלב זה באמצעות assay Trypan הדרה כחול לקחת כמה דוגמאות לניתוח spectrometric כדי למדוד את יעילות תיוג. </li></ol> תיוג של בתאי גזע עובריים אנושיים עם Ferumoxides <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל, הצלחת hESC בצלחות 10 ס&quot;מ, כרגיל. מאכלים אלה מראש מצופה ג&#39;לטין יש תאים מזין מוקרן עליהם. ניתן להשתמש בפרוטוקול עבור מזין ללא התרבויות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו hESC לצרף ולגדול כ 3-4 ימים, כך הם יוצרים מושבות בגודל בינוני. במהלך תקופה זו, להבטיח כי המושבות אינם גדלים גדולים, כמו במושבות גדולות יותר קשה לשבור מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים רמות יכול לזהם אלה תרבויות, כך בהתאם ניקיון של המושבות, ייתכן שיהיה עליך להיפטר תרבויות מובחן על ידי לנתיחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את התקשורת תיוג שמורכבת Ferumoxides בריכוז של התקשורת hESC 100μg/ml ומלא. לשם כך, אנו לערבב 89μl Ferumoxides ו 10 מ&quot;ל של התקשורת צמיחה מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את צלחת אחת עם התקשורת מלאה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מ&quot;ל של תיוג מדיה לכל צלחת ו דגירה התאים במשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, תיוג תושלם. בשלב הבא, יש לשטוף את התאים לקבל השעיה תא יחיד לשימוש נוסף. לשם כך, ראשית יש לשטוף את המנה עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, להחליף את PBS עם 5 מ&quot;ל של טריפסין 0.25% ו דגירה בחממה במשך 5 דקות, או עד התאים לנתק. זה עוזר לנצל את המנה לעתים קרובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאים יש מנותקת עכשיו. זכור כי אם המנה הכילה מושבות גדולות יותר ייתכן שיש כמה גושים שמאל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להיפטר גושים אלה, אפשר לערבב את ההשעיה כל פעם בעזרת פיפטה סרולוגיות, אז תן לו לשבת עוד 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנחנו לא משתמשים פיפטה Eppendorf, מוצץ חזר כמו של התאים דרך קצה דק יכול לשבור את קרום התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם גושים שיורית נוכחים, ניתן להריץ את ההשעיה התא דרך מסננת תא 40μm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הכל עובד כראוי, השעיה תא בודד עכשיו קיים כי הוא מעורב עם הרבה פסולת, שמקורם ציפוי ג&#39;לטין, ESC-matrix תאים מתים. כדי להיפטר זה, לשטוף את התאים פעמיים ספינינג אותם למטה אל RCF 400 במשך 5 דקות ו resuspend אותם בתקשורת מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו, ESC צריך להיות מבודד מתאי מזין מוקרן. ניתן לעשות זאת ביעילות על ידי ציפוי ההשעיה תא ג&#39;לטין על צלחת מצופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם המנה לא מניפולציה, כל התאים יהיו משקעים כלפי מטה, אלא ניזונים יהיה לצרף מהר יותר ESC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכן, אם supernatant הוא המריא אחרי 45 דקות, הוא אמור להכיל בעיקר ESC, בעוד ניזונים בעיקר צריכים להיות מחוברים המנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדרך זו, השעיה תא בודד של תאים אנושיים שכותרתו מגנטית גזע עובריים שיכולים לשמש עבור ניסויים נוספים מתקבל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו בפרוטוקול הקודם, בשלב זה, אתה צריך לספור את התאים לקחת דגימות להערכת הכדאיות ומדידה של יעילות תיוג. </li></ol>

<ol><li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+Hematopoietic+Progenitor+Cells+with+MR+Contrast+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents.</a> 228, 760-767 (2003).</li>
<li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+of+iron+oxide+labeled+human+hematopoietic+progenitor+cells+in+a+xenotransplant+model%3A+in+vivo+monitoring+using+clinical+magnetic+resonance+imaging+equipment%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Migration of iron oxide labeled human hematopoietic progenitor cells in a xenotransplant model: in vivo monitoring using clinical magnetic resonance imaging equipment.</a> Radiology. 234, 197-205 (2005).</li>
<li>Henning, T. D., Saborowski, O., Golovko, D., Boddington, S., Bauer, J. S., Fu, Y., Meier, R., Pietsch, H., Sennino, B., McDonald, D. M., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+with+the+positive+MR+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Gadofluorine+M.+Eur+Radiol%22%5BJournal%5D)">Cell labeling with the positive MR contrast agent.</a> Gadofluorine M. Eur Radiol. 17, 1226-1234 (2007).</li>
</ol>

תיאור פולשני בתאי גזע חיוני לניטור כמעט כל תא גזע טיפול מבוסס. הבנה טובה יותר של קינטיקה ב vivo בתאי גזע שכותרתו, כמו דמיינו על תמונות MR, יכול להוביל את הדרך רציונלי ושימוש יעיל יותר של תא טיפולים מבוססי גזע. מאז אנו משתמשים סוכנים בניגוד החלים קלינית שיטות הדמיה, פרוטוקולים שהוצגו שלנו צריכה להיות לתרגום בקלות יישומים בחולים. יישומים קליניים אפשריים של השיטות שלנו כוללות חקירות השוואתי של תהליך engraftment שונים של תאים תת גזע או בתאי גזע מהונדסים גנטית, כמו גם, את ההערכה של השפעות הטיפול על תוצאות ...

<table><tbody><tr><td>D-MEM High Glucose</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td>דלל ג'לטין ב-PBS לריכוז סופי של 0.1 %</td></tr><tr><td>PBS (ללא Ca++ Mg++)</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.05%</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.25%</td><td>ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>25200-114</td><td></td></tr><tr><td>FBS מאופיין</td><td>ריאגנט</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>מסנן תאים (40 &amp;mu;m Nylon)</td><td>כלי</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Knockout DMEM</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Knockout Serum Replacer</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828028</td><td></td></tr><tr><td>b-Mercapt&amp;#8211;thanol</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7522</td><td></td></tr><tr><td>חומצות אמינו שאינן חיוניות</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>ריאגנט</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>גלוטמין</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Ferumoxides (Endorem)</td><td>ריאגנט</td><td>Guerbet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ferucarbotran (Resovist&amp;#174;)</td><td>ריאגנט</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

תיוג hescs ו hmscs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם mr imaging

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

בשנים האחרונות, מחקר בתאי גזע הוביל להבנה טובה יותר של הביולוגיה ההתפתחותית, מחלות שונות וההשפעה הפוטנציאלית על רפואה רגנרטיבית. שיטה לא פולשנית כדי לפקח על בתאי גזע המושתלים שוב ושוב in vivo היה מאוד לשפר את היכולת שלנו להבין את מנגנוני הבקרה תא גזע מוות לזהות גורמים trophic ועל מסלולי איתות כי לשפר תא גזע engraftment. MR הדמיה הוכח להיות כלי יעיל עבור בתיאור vivo בתאי גזע עם רזולוציה ליד אנטומי מיקרוסקופיים. על מנת לזהות בתאי גזע עם MR, התאים צריכים להיות מתויג עם תא ספציפי סוכנים בניגוד MR. לענין זה, חלקיקים תחמוצת ברזל, כגון ברזל פאראמגנטי חלקיקי תחמוצת (SPIO), מוחלים, בגלל רגישות גבוהה שלהם לאיתור התא biocompatibility מעולה שלהם. SPIO חלקיקים מורכבים הליבה תחמוצת ברזל ומעיל dextran, carboxydextran או עמילן, ותפקוד על ידי יצירת שדה inhomogeneities המקומי, הגורמות אות ירד ב T2 משוקלל תמונות MR. מצגת זו תדגים טכניקות תיוג בתאי גזע עם החלים קלינית סוכני MR בניגוד עבור שלאחר מכן לא פולשנית של מעקב vivo של תאים שכותרתו עם MR הדמיה.

להערכת טיפולים בתאי גזע חדש חשוב הלא פולשני המסלול התאים מוזרקים in vivo. סרט הווידאו הזה יראה לכם כיצד לתייג אדם בתאי גזע mesenchymal ו עובריים עם סוכני תחמוצת ברזל מבוסס בניגוד in vivo עבור הבאים MR הדמיה in vivo.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

בשנים האחרונות, מחקר תאי גזע הוביל להבנה טובה יותר של ביולוגיה התפתחותית, מחלות שונות והשפעתו הפוטנציאלית על רפואה רגנרטיבית...

ברוכים הבאים למעבדתו של ד"ר Haiku Dal Link. ברצוננו להודות למכון קליפורניה לרפואה רגנרטיבית על מימון פרויקט זה להערכת טיפולים חדשים בתאי גזע. חשוב לעקוב באופן לא פולשני אחר התאים המוזרקים in vivo.דבר זה אפשרי באמצעות סימון התאים in vitro באמצעות חומרי ניגוד ספציפיים או רב-תכליתיים עבור דימות MR או דימות אופטי. סרטון זה יראה לכם כיצד לסמן תאי גזע מזנכימליים אנושיים ותאי גזע עובריים אנושיים לצורך דימות in vivo בהמשך. שלום, אני טוביאס הנינג מקבוצת המחקר של חומרי ניגוד במרכז לדימות מולקולרי ופונקציונלי במחלקה לרדיולוגיה באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו.היום אדגים לכם פרוטוקולים לסימון in vitro של תאי גזע מזנכימליים אנושיים עם peric, carone, ושל תאי גזע עובריים אנושיים עם phem oxides. טכניקה זו שימושית לצורך מיקום של תאים שהוזרקו in vivo או להשגת מידע על מצבם התפקודי. הפרוטוקולים לסימון תאים באמצעות חומר ניגוד ל-MRI משתנים עבור תאי גזע עובריים ומזנכימליים, אך שתי הטכניקות כוללות את השלבים הבאים: הכנת תרבית התאים הכוללת זריעת תאים כתרביות נצמדות, הכנת מדיום הסימון, סימון התאים באמצעות אינקובציה פשוטה, טיפול בטריפסין של תאי הגזע ושטיפה של חומר הניגוד החופשי, והערכת יעילות הסימון וחיוניות התאים.אם כן, נתחיל ונסמן כמה תאים. נתחיל כעת בסימון תאי גזע מזנכימליים באמצעות Theo Carbatrol. ראשית

labeling-hescs-hmscs-with-iron-oxide-nanoparticles-for-non-invasive

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מציג טכניקות תיוג של אדם בתאי גזע עובריים ותאי גזע mesenchymal עם צבעי ניאון. טכניקה זו יכולה לשמש in vivo מעקב בתאי גזע המושתלים עם הדמיה אופטית עבור מתאמים histopathological עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

תיוג בתאי גזע עם צבעי ניאון על איתור פולשני עם דימות אופטי

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) מנגן עם כלוריד...

ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית

המטרה של המצגת היא להדגים שיטה לשחזור מאוד ליצור מטריצה ​​תא הקשורים שתלים גזע פגמים הסחוס, אשר יכול להיות דמיינו עם MR הדמיה. בתאי גזע מסומנים עם ה-FDA Ferumoxides, מעורבב עם agarose, מושתלים לתוך פגמים סחוס צילמו עם סורק 7T MR.

השרשה של Ferumoxides תווית אדם בתאי גזע mesenchymal ב פגמים סחוס

שיטות bioimaging להערכת biodistribution התא של חלקיקים המתאימים ניטור טיפולית אבחון של תרכובות nanoformulated. השיטות שתוארו לעיל הם רגיש וספציפי כאשר העריכו ידי coregistration היסטולוגית. מתודולוגיות לספק מסלול translational מ מכרסם ליישומים האדם.

Bioimaging רשום של ננו לניטור האבחון והטיפול

אנו מתארים טכניקה תיוג ומעקב בתאי גזע עם ה-FDA, תחמוצת ברזל פאראמגנטי (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). זו טכניקת דימות הסלולר אשר מנצל מגנטית (MR) תהודה להדמיה, הוא נגיש לניטור ארוך טווח האבחנה של להצליח או להיכשל engraftments תא גזע לחולים.

תיוג בתאי גזע עם Ferumoxytol, ה-FDA אוקסיד Nanoparticle ברזל

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

מעקב של תאים באמצעות MRI זכה לתשומת לב ראויה לציון בשנים האחרונות. פרוטוקול זה מתאר את התיוג של תאים דנדריטים עם פלואור...

נדידת תאים דנדריטים ניטור באמצעות<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H דימות תהודה מגנטית

פרטי פרוטוקול ניתנים לתאים במבחנה תיוג גזע עובריים אנושיים עם חלקיקים ליצירת הרמוניים שני. מתודולוגיות לחקירת hESC ידי מיקרוסקופית רב פוטון והבידול שלהם בצבירי לב גם מוצגות.

הרמוני חלקיקים למחקר הרגנרציה

5 חלבוני ניאון קומבינטורית סימון של תאי גזע ואבות היווצרות הדם מאפשר במעקב משובט vivo באמצעות confocal ושני פוטונים במיקרוסקופ, מתן תובנות ארכיטקטורת hematopoietic מח העצם במהלך רגנרציה. שיטה זו מאפשרת מיפוי גורל לא פולשנית של תאים נגזרים HSPCs ספקטרלי מקודדים ברקמות שלמות לתקופות נרחבות של זמן לאחר השתלה.

במשובט מעקב vivo של גזע hematopoietic ובתאים המסומנים על ידי חמישה חלבונים ניאון באמצעות Confocal וmultiphoton מיקרוסקופית

אספקת תאים ממוקדת שימושית במגוון יישומים ביו-רפואיים.  מטרת פרוטוקול זה היא להשתמש בננו-חלקיקי תחמוצת ברזל סופר-פרמגנטיים (SPION) כדי לתייג תאים ובכך לאפשר גישות מיקוד לתאים מגנטיים לרמה גבוהה של שליטה על העברת התאים ולוקליזציה.

תיוג תא ומיקוד עם פאראמגנטי תחמוצת ברזל חלקיקים

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור משלוח של תאי גזע mesenchymal לא פולשנית (MSC) ומעקב במודל העכבר של פציעה מוחית טראומטית. ברזל פאראמגנטי תחמוצת הברזל מועסקים כהדמיה תהודה מגנטית (MRI) בדיקה עבור התיוג MSC ו פולשני ב vivo מעקב אחר משלוח intranasal באמצעות MRI בזמן אמת.

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

למד תיוג תאי גזע אנושיים עם חלקיקי תחמוצת ברזל לצורך מעקב לא פולשני בחיות מודל באמצעות דימות תהודה מגנטית. שיטה זו מאפשרת הערכה מדויקת של טיפולי תאי גזע.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

גלה סרטונים נוספים