Name: מערכת קו-תרבית מותאמת להבנת אינטראקציות בין תאי גרנולוזה-תקה בשחלת הבקר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: חקור מודל קו-תרבית של תאי תקה וגרנולוזה בבקר לניתוח אינטראקציות פרקריניות ותובנות לפיזיולוגיה שחלתית. שיטה זו מאפשרת חקירת דינמיקה זקיקית ותקשורת תאית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li>
<li>Forde, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oestrous+cycles+in+Bos+taurus+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Oestrous cycles in Bos taurus cattle.</a> Anim Reprod Sci. 124 (3-4), 163-169 (2011).</li>
<li>Hennet, M. L., Combelles, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antral+follicle%3A+A+microenvironment+for+oocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The antral follicle: A microenvironment for oocyte differentiation.</a> Int J Dev Biol. 56 (10-12), 819-831 (2012).</li>
<li>Christenson, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Preovulatory+LH+surge+effects+on+follicular+theca+and+granulosa+transcriptomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Preovulatory LH surge effects on follicular theca and granulosa transcriptomes.</a> Mol Endocrinol. 27 (7), 1153-1171 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+cell+plating+density+mimics+an+early+post-LH+stage+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells.</a> Cell Tissue Res. 354, 869-880 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tissue+culture+model+of+estrogen-producing+primary+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Tissue culture model of estrogen-producing primary bovine granulosa cells.</a> J Vis Exp. (139), e58208(2018).</li>
<li>Gutierrez, C. G., Campbell, B. K., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+long-term+bovine+granulosa+cell+culture+system%3A+Induction+and+maintenance+of+estradiol+production%2C+response+to+follicle-+stimulating+hormone%2C+and+morphological+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: Induction and maintenance of estradiol production, response to follicle- stimulating hormone, and morphological characteristics.</a> Biol Reprod. 56 (3), 608-616 (1997).</li>
<li>Hamel, M., Vanselow, J., Nicola, E. S., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androstenedione+increases+cytochrome+P450+aromatase+messenger+ribonucleic+acid+transcripts+in+non-luteinizing+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Androstenedione increases cytochrome P450 aromatase messenger ribonucleic acid transcripts in non-luteinizing bovine granulosa cells.</a> Mol Reprod Dev. 70, 175-183 (2005).</li>
<li>Chandrasekher, Y. A., Fortune, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxytocin+on+steroidogenesis+by+bovine+theca+and+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxytocin on steroidogenesis by bovine theca and granulosa cells.</a> Endocrinology. 127 (2), 926-933 (1990).</li>
<li>Silva, J. M., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+follicle-stimulating+hormone+on+steroid+secretion+and+messenger+ribonucleic+acids+encoding+cytochromes+P450+aromatase+and+cholesterol+side-chain+cleavage+in+bovine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of follicle-stimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol side-chain cleavage in bovine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 62 (1), 186-191 (2000).</li>
<li>Gong, J. G., McBride, D., Bramley, T. A., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+recombinant+bovine+somatotrophin%2C+insulin-like+growth+factor-I+and+insulin+on+bovine+granulosa+cell+steroidogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of recombinant bovine somatotrophin, insulin-like growth factor-I and insulin on bovine granulosa cell steroidogenesis in vitro.</a> J Endocrinol. 143 (1), 157-164 (1994).</li>
<li>Baufeld, A., Koczan, D., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-lactate+induces+specific+genome-wide+alterations+of+gene+expression+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">L-lactate induces specific genome-wide alterations of gene expression in cultured bovine granulosa cells.</a> BMC Genomics. 20 (1), 273(2019).</li>
<li>Baddela, V. S., Sharma, A., Plinski, C., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitic+acid+protects+granulosa+cells+from+oleic+acid+induced+steatosis+and+rescues+progesterone+production+via+cAMP+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Biol+Lipids%22%5BJournal%5D)">Palmitic acid protects granulosa cells from oleic acid induced steatosis and rescues progesterone production via cAMP dependent mechanism.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1867 (8), 159159(2022).</li>
<li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+free+fatty+acids+affect+bovine+granulosa+cell+function%3A+a+molecular+cue+for+compromised+reproduction+during+negative+energy+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Elevated free fatty acids affect bovine granulosa cell function: a molecular cue for compromised reproduction during negative energy balance.</a> Endocr Connect. 8 (5), 493-505 (2019).</li>
<li>Hillier, S. G., Whitelaw, P. F., Smyth, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+oestrogen+synthesis+-+The+two-cell%2C+two-+gonadotrophin+model+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Follicular oestrogen synthesis - The two-cell, two- gonadotrophin model revisited.</a> Mol Cell Endocrinol. 100, 51-54 (1994).</li>
<li>Campen, K. A., Lavallee, M., Combelles, C. M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+bisphenol+S+on+bovine+granulosa+and+theca+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Domest+Anim%22%5BJournal%5D)">The impact of bisphenol S on bovine granulosa and theca cells.</a> Reprod Domest Anim. 53 (2), 450-457 (2018).</li>
<li>Glister, C., Richards, S. L., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+%28BMP%29+-4%2C+-6%2C+and+-7+potently+suppress+basal+and+luteinizing+hormone-induced+androgen+production+by+bovine+theca+interna+cells+in+primary+culture%3A+could+ovarian+hyperandrogenic+dysfunction+be+caused+by+a+defect+in+thecal+BMP+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins (BMP) -4, -6, and -7 potently suppress basal and luteinizing hormone-induced androgen production by bovine theca interna cells in primary culture: could ovarian hyperandrogenic dysfunction be caused by a defect in thecal BMP signaling.</a> Endocrinology. 146 (4), 1883-1892 (2005).</li>
<li>Wrathall, J. H., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inhibin-related+peptides+and+oestradiol+on+androstenedione+and+progesterone+secretion+by+bovine+theca+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of inhibin-related peptides and oestradiol on androstenedione and progesterone secretion by bovine theca cells in vitro.</a> J Endocrinol. 145 (3), 491-500 (1995).</li>
<li>Shores, E. M., Picton, H. M., Hunter, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+pig+theca+cell+steroidogenesis+by+LH%2C+insulin-like+growth+factor+I+and+granulosa+cells+in+serum-free+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of pig theca cell steroidogenesis by LH, insulin-like growth factor I and granulosa cells in serum-free culture.</a> J Reprod Fertil. 118 (2), 211-219 (2000).</li>
<li>Gregoraszczuk, E. L., Ptak, A., Karniewska, M., Ropstad, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+defined+mixtures+of+PCBs%2C+p%2Cp%27-DDT+and+its+metabolite+p%2Cp%27-DDE%2C+on+co-culture+of+porcine+theca+and+granulosa+cells%3A+steroid+secretion%2C+cell+proliferation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Action of defined mixtures of PCBs, p,p'-DDT and its metabolite p,p'-DDE, on co-culture of porcine theca and granulosa cells: steroid secretion, cell proliferation and apoptosis.</a> Reprod Toxicol. 26 (2), 170-174 (2008).</li>
<li>Rak, A., Drwal, E., Wróbel, A., Gregoraszczuk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistin+is+a+survival+factor+for+porcine+ovarian+follicular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Resistin is a survival factor for porcine ovarian follicular cells.</a> Reproduction. 150 (4), 343-355 (2015).</li>
<li>Kotsuji, F., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">The role of granulosa and theca cell interactions in ovarian structure and function.</a> Microsc Res Tech. 27 (2), 97-107 (1994).</li>
<li>Orisaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+granulosa+cell+differentiation+during+gonadotropin-independent+follicular+growth+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on granulosa cell differentiation during gonadotropin-independent follicular growth in cattle.</a> Mol Reprod Dev. 73 (6), 737-744 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Role of granulosa and theca cell interactions in ovarian follicular maturation.</a> Microsc Res Tech. 69 (6), 450-458 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+apoptosis+and+proliferation+of+granulosa+cells%3A+changes+during+bovine+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on apoptosis and proliferation of granulosa cells: changes during bovine follicular maturation.</a> Biol Reprod. 66 (6), 1635-1639 (2002).</li>
<li>Allegrucci, C., Hunter, M. G., Webb, R., Luck, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bovine+granulosa+and+theca+cells+in+a+novel+serum-free+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Interaction of bovine granulosa and theca cells in a novel serum-free co-culture system.</a> Reproduction. 126 (4), 527-538 (2003).</li>
<li>Santaguida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+by+side+comparison+between+dynamic+versus+static+models+of+blood-brain+barrier+in+vitro%3A+A+permeability+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Side by side comparison between dynamic versus static models of blood-brain barrier in vitro: A permeability study.</a> Brain Res. 1109 (1), 1-13 (2006).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Isolated+Brain+Microvessel%3A+A+Versatile+Experimental+Model+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Isolated Brain Microvessel: A Versatile Experimental Model of the Blood-Brain Barrier.</a> Front Physiol. 11, 398(2020).</li>
<li>Schneider, F., Brüssow, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+preovulatory+administered+depot+gonadotrophin-releasing+hormone+agonist+on+reproductive+hormone+levels+and+pregnancy+outcome+in+gilts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Fertil+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of a preovulatory administered depot gonadotrophin-releasing hormone agonist on reproductive hormone levels and pregnancy outcome in gilts.</a> Reprod Fertil Dev. 18 (8), 857-866 (2006).</li>
<li>Nimz, M., Spitschak, M., Schneider, F., Fürbass, R., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+genes+encoding+steroidogenic+enzymes+and+hormone+receptors+in+late+preovulatory+follicles+of+the+cow+coincides+with+an+accumulation+of+intrafollicular+steroids%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of genes encoding steroidogenic enzymes and hormone receptors in late preovulatory follicles of the cow coincides with an accumulation of intrafollicular steroids.</a> Domest Anim Endocrinol. 37, 45-54 (2009).</li>
<li>Amsterdam, A., May, J. V., Schomberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+insulin+and+follicle-stimulating+hormone+on+biochemical+and+morphological+differentiation+of+porcine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of insulin and follicle-stimulating hormone on biochemical and morphological differentiation of porcine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 39 (2), 379-390 (1988).</li>
<li>Monga, R., Sharma, I., Datta, T. K., Singh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+serum-free+buffalo+granulosa+cell+culture+and+analysis+of+genes+involved+in+terminal+differentiation+from+FSH-+to+LH-responsive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Characterization of serum-free buffalo granulosa cell culture and analysis of genes involved in terminal differentiation from FSH- to LH-responsive phenotype.</a> Domest Anim Endocrinol. 41 (4), 195-206 (2011).</li>
<li>Bao, B., Garverick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+steroidogenic+enzyme+and+gonadotropin+receptor+genes+in+bovine+follicles+during+ovarian+follicular+waves%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of steroidogenic enzyme and gonadotropin receptor genes in bovine follicles during ovarian follicular waves: A review.</a> J Anim Sci. 76 (7), 1903-1921 (1998).</li>
<li>Bao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+messenger+ribonucleic+acid+encoding+luteinizing+hormone+receptor%2C+cytochrome+P450+side+chain+cleavage%2C+and+aromatase+are+associated+with+recruitment+and+selection+of+bovine+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in messenger ribonucleic acid encoding luteinizing hormone receptor, cytochrome P450 side chain cleavage, and aromatase are associated with recruitment and selection of bovine ovarian follicles.</a> Biol Reprod. 56 (5), 1158-1168 (1997).</li>
<li>Orisaka, M., Tajima, K., Tsang, B. K., Kotsuji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa-theca+cell+interactions+during+preantral+follicular+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ovarian.+Res%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa-theca cell interactions during preantral follicular development.</a> J. Ovarian. Res. 2 (1), 9(2009).</li>
<li>Gilbert, I., Robert, C., Dieleman, S., Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+effect+of+the+LH+surge+in+bovine+granulosa+cells+during+the+peri-ovulation+period%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Transcriptional effect of the LH surge in bovine granulosa cells during the peri-ovulation period.</a> Reproduction. 141 (2), 193-205 (2011).</li>
<li>Kotsuji, F., Kamitani, N., Goto, K., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+theca+and+granulosa+cell+interactions+modulate+their+growth%2C+morphology%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Bovine theca and granulosa cell interactions modulate their growth, morphology, and function.</a> Biol Reprod. 43 (5), 726-732 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x תמיסת מלח מאוזנת של האנק HBSS (עם מ"ג/Ca, פנול אדום)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. L201-10</td><td>להמיס במים טהורים במיוחד; התאם את ה-pH ל-7.4 של תמיסת העיכול (HBSS ו-HEPES) ובצע סינון סטרילי לפני השימוש</td></tr><tr><td>מחט 18 גרם, 40 מ"מ, קוטר 1.2 מ"מ</td><td>רוט</td><td>281ט.1</td><td>מחט חד פעמית, קיצור דרך</td></tr><tr><td>מזרק 3 מ"ל (Omnifix Luer)</td><td>רוט</td><td>LY22.1</td><td></td></tr><tr><td>אקוטאז</td><td>מרק</td><td>א6964</td><td>סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>אמפוטריצין B (250 ומיקרו; גרם/מ"ל)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. AB17.01050</td><td></td></tr><tr><td>אנדרוסטנדיון</td><td>מרק</td><td>46033</td><td>אנו משתמשים בתמיסת מלאי של 10 מ"מ, מדוללת ב-100% אתנול; סניף החברה: סופלקו</td></tr><tr><td>משקפת Carl Zeiss Technival2</td><td>קארל זייס ג'נה</td><td>לא ישים</td><td>בשימוש יחד עם תאורת תקרית Schott KL 1600 LED</td></tr><tr><td>BSA (5%)</td><td>מרק</td><td>א3311</td><td>סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>מסננת תאים (100 ומיקרו; גודל נקבוביות מ')</td><td>סרשטדט</td><td>83.3945.100</td><td>התאמת צינורות צנטריפוגה של 50 מ"ל</td></tr><tr><td>קולגן R (0.2%)</td><td>סרווה</td><td>47254</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז NB8 (10%)</td><td>נורדמארק</td><td>S1745601</td><td></td></tr><tr><td>מיכל הקפאת תאים CoolCell LX&nbsp;</td><td>מרק</td><td>CLS432002</td><td>מוצר מקורנינג</td></tr><tr><td>בקבוקונים לשימור הקפאה (2 מ"ל)</td><td>TPP פאוסט</td><td>TPP89020</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבות, 12 בארות, תחתית שטוחה</td><td>TPP פאוסט</td><td>TPP92112</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבות, 24 בארות, תחתית שטוחה</td><td>TPP פאוסט</td><td>TPP92424</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבות, 6 בארות, תחתית שטוחה</td><td>TPP פאוסט</td><td>TPP92006</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>רוט</td><td>4720.1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS עם Ca2+, Mg2+</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. L182-10</td><td>יש להמיס במים טהורים במיוחד ובחיטוי לפני השימוש</td></tr><tr><td>אסטרדיול, 17b-[2,4,6,7-3H]</td><td>הרטמן אנליטיק</td><td>ART1555</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי (FBS Superior stabil)</td><td>ביו & מכר</td><td>FBS. S0615</td><td></td></tr><tr><td>FSH (~7,000 יחב"ל/מ"ג; מיותרת המוח האנושית)</td><td>מרק</td><td>F4021</td><td>אנו מעדיפים להשתמש בתמיסת מלאי של 2 ומיקרו; גרם/מ"ל, מדולל ב-0.9% NaCl; סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>תוספות תרבית תאים תלויות (0.4 ומיקרו; גודל נקבוביות מ')</td><td>cellQART</td><td>9320412</td><td>בזמן ההזמנה להיות מודע למאפיינים השונים של תוספות; אנו מעדיפים קרום PET שקוף למיקרוסקופ ניגודיות פאזה</td></tr><tr><td>HEPES (1 מ')</td><td>רוט</td><td>9105.2</td><td>התאם את ה-pH ל-7.4 של תמיסת העיכול (HBSS ו-HEPES) ובצע סינון סטרילי לפני השימוש</td></tr><tr><td>הולו-טרנספרין (בקר)</td><td>מרק</td><td>T1283</td><td>להתמוסס במים סטריליים; סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>ערכת מיני רנ"א innuPREP 2.0</td><td>IST innuscreen</td><td>ברקוד 845-KS-2040250</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין (10 מ"ג/מ"ל; מלבלב בקר)</td><td>מרק</td><td>I0516</td><td>להתמוסס ב-1x PBS; סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>L-גלוטמין (200 מ"מ)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. K0283</td><td></td></tr><tr><td>LR3-IGF-1</td><td>מרק</td><td>I1146</td><td>אנו משתמשים בתמיסת מלאי של 200 ומיקרו; גרם/מ"ל, מומס ב-10 מ"מ HCl ו-1x PBS עם 1 מ"ג/מ"ל BSA; סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר NanoDrop 1000</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>לא ישים</td><td>מדידת ריכוז RNA</td></tr><tr><td>NEA (פי 100)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. K0293</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין (10,000 יחב"ל/10 מ"ג/מ"ל)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. א2213</td><td></td></tr><tr><td>מים מטוהרים, מתאימים לתרבית תאים</td><td>מרק</td><td>W3500</td><td>סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>ערכת סינתזה cDNA SensiFAST</td><td>ביוליין</td><td>ביו-65054</td><td>מסופק באמצעות שותפת ההפצה BioCat</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט (7.5%)</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. L1713</td><td></td></tr><tr><td>נתרן סלניט</td><td>מרק</td><td>S9133</td><td>להתמוסס במים סטריליים; סניף החברה: סיגמא-אולדריץ'</td></tr><tr><td>תרמושייקר TS-100C</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12357627</td><td>בשימוש יחד עם בלוק HC18 (מס' קטלוגי 12337627)</td></tr><tr><td>&alpha;-MEM</td><td>ביו & מכר</td><td>ב. F0915</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכת קו-תרבית מותאמת להבנת אינטראקציות בין תאי גרנולוזה-תקה בשחלת הבקר

A Modified Co-Culture System for Understanding Granulosa-Theca Cell Interactions in the Bovine Ovary

למרות ש-TCs ו-GCs בודדו באמצעות טכניקות הפרדה מכניות מבוססות היטב המבוססות על מידור זקיקים, הביטוי של גנים ספציפיים לסוג התא CYP17A1 ו-CYP19A1 הוערך כדי למנוע את הסיכון לזיהום צולב. CYP17A1 התבטא אך ורק ב-TCs שבודדו טריים, בעוד CYP19A1 התבטא בעיקר ב-GCs שבודדו טריים (איור 2).
מערכת התרבות המשותפת מאפשרת מידור של תאי תקה בקר וגרנולוזה בצדדים מנוגדים של הכנסת ממברנה, ובכך מחקה את הארגון המרחבי in vivo. אחרי שלושה ימים בתרבית, ה-TCs הראו מורפולוגיה שטוחה ומוארכת כשהם התפשטו על פני השטח של קרום ההכנסה המצופה בקולגן, מה שמעיד על חיבור מוצלח (איור 3A). כאשר הם תורבו לבד במשך כל תקופת 9 הימים, TCs המשיכו להתרבות והגיעו למפגש עד היום התשיעי (איור 3B). לעומת זאת, GCs שגודלו לבד במשך 6 ימים על קרום ההכנסה המצופה בקולגן פיתחו פנוטיפ דמוי פיברובלסטים, האופייני ל-GCs במבחנה (איור 3C). בנוסף, כפי שתואר קודם לכן, GCs נטו ליצור אשכולות, מאפיין אופייני של תאים אלה בתרבית 5,7,31,32. במערכת התרבות המשותפת, לא נצפו הבדלים מורפולוגיים לכאורה ב-TCs או ב-GCs בהשוואה לתרביות המונו-תרביות המותאמות בזמן שלהן (איור 3D), מה שמצביע על כך שהסביבה מבוססת ההכנסה שומרת על התנהגות תאית נורמלית. עם זאת, בשל מגבלות טכניות, הערכה מיקרוסקופית של התרבות המשותפת נותרה מאתגרת, במיוחד בהבחנה והערכה של מורפולוגיה של TC באופן עצמאי מהתאים האחרים. כדי להתגבר על מגבלות אלה, מטפלים כיום בפרוטוקול אופטימלי לקיבוע תאים בהתאם לבחינת אסטרטגיות חלופיות לזיהוי תאים בהיעדר נוגדנים ספציפיים לתא לצביעה חיסונית.
הפונקציונליות של מערכת התרבות המשותפת הוערכה על ידי ניתוח ייצור הורמונים וביטוי גנים סמני מפתח עבור TCs ו-GCs33,34, המאשרים את התפקידים הסטרואידוגניים הספציפיים לסוג התא. השוואה בין מונו-תרבות GC למודל התרבות המשותפת גילתה רמות אסטרדיול (E2) דומות המיוצרות במבחנה. עם זאת, כצפוי, תרבית TC מונו-תרבית ייצרה רק כמויות זניחות של E2, בהתאם להשערת 2-תאים-2-גונדוטרופין (איור 4A)15, הקובעת כי לתאי theca אין את היכולת לסנתז E2 באופן עצמאי.
כדי להעריך עוד יותר את הרלוונטיות הפיזיולוגית של תנאי התרבית, נבדק הביטוי של גנים סמני מפתח33. בהתאם להשערת 2 תאים-2-גונדוטרופין, CYP19A1 התבטא בעיקר ב-GCs, בעוד CYP17A1 זוהה בעיקר ב-TCs, דפוס שנצפה הן בתנאי מונו-תרבית והן בתנאי קו-תרבית (איור 4B,C). יש לציין כי שפע התעתיק של CYP19A1 היה גבוה יותר ב-GCs בתוך מערכת ה-co-culture בהשוואה ל-GC mono-culture, למרות שלא נצפו הבדלים בריכוזי האסטרדיול.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig1.jpg"> 
איור 1: ייצוג סכמטי של מערך תרבית תאים. (A) דיאגרמה הממחישה את תא החיסון שנבנה בהתאמה אישית, המשתמש בצינור קטום על התוספת ההפוכה כדי למנוע דליפת מדיה לאורך תקופת התרבית הראשונית. (B) ציר הזמן של הליך הניסוי: TCs תורבבו על התוסף ההפוך במשך שלושה ימים כדי לאפשר היצמדות. התוספת התהפכה, ו-GCs נזרעו בצד הנגדי, ואחריהם שישה ימים נוספים של תרבית. המחקר השווה TCs ו-GCs שגודלו בנפרד למערכת התרבות המשותפת TC-GC. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig2.jpg"> 
איור 2: ביטוי גנים של סמנים ספציפיים לסוג התא בתאי גרנולוזה ותקה שבודדו טריים. (A) CYP17A1 התבטא אך ורק ב-TCs, בעוד ש-(B) CYP19A1 זוהה בעיקר ב-GCs, מה שאישר את הספציפיות והטוהר הראשוני של אוכלוסיות התאים המבודדות לפני התרבית. הנתונים מוצגים כביטוי יחסי מנורמל לממוצע הגיאומטרי של גני הייחוס RPLP0 ו-TBP. הממוצעים וטעות התקן של האמצעים מוצגים, הנתונים נבדקו לנורמליות ושונות, כוכביות מצביעות על הבדלים משמעותיים (n=3, מבחן t). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig3.jpg"> 
איור 3: מורפולוגיה של תאי theca וגרנולוזה בתרבית. (A) TCs שתורבו במשך 3 ימים חוברו לקרום ההכנסה המצופה בקולגן. (B) TCs גדלו למפגש לאחר כל תקופת 9 הימים בתרבות המונו-תרבית. (C) GCs מציגים את הפנוטיפ דמוי הפיברובלסטים האופייני לאחר 6 ימים בתרבית. (D) תרבית משותפת של TCs ו-GCs לא מראה הבדל מורפולוגי נראה לעין בהשוואה למונו-תרביות תואמות זמן. תמונה זו צולמה לאחר 6 ימים של תרבית GC ו-9 ימים של תרבית TC (בסיום ניסוי ה-co-culture). פסי קנה מידה 100 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig4.jpg"> 
איור 4: ניתוח סמנים פונקציונליים במערכת התרבית המשותפת. (A) ריכוזי הורמונים של אסטרדיול (E2) מאשרים את התפקוד הפיזיולוגי של מערכת תרבית התאים. (ב, ג) ניתוח ביטוי גנים של סמן TC CYP17A1 וסמן GC CYP19A1 מדגים את הזהות והמצב התפקודי של שתי אוכלוסיות התאים. הממוצע הגיאומטרי של גני הייחוס RPLP0 ו-TBP שימש לחישוב הביטוי היחסי. מוצגים ממוצעים וטעות תקן של אמצעים, הנתונים נבדקו לנורמליות ושונות, כוכביות מצביעות על הבדלים משמעותיים (n=3, ANOVA חד כיווני). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

A reliable co-culture of granulosa (GCs) and theca cells (TCs) has the potential to facilitate a more comprehensive understanding of the interactions, ...

a-modified-co-culture-system-for-understanding-granulosa-theca-cell

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מתאר את התרבות העיקרית / שיתוף התרבות של רקמת השחלה עכבר, באמצעות השחלות מעכברים בילוד וזקיקים בשחלות בודדות מעכברים לפני גיל בגרות מיניים. טכניקות התרבות לתמוך בפיתוח באופן פיסיולוגי מאוד, המאפשר חקירה של ההשפעה של סוכנים חיצוניים בשחלה, ושל יחסי גומלין בין זקיקים בשחלות.

תרבות ושיתוף התרבות של עכבר שחלות וזקיקים בשחלות

מודל התרבות ארוכת טווח של תאים granulosa שור בתנאים ללא סרום מתואר. מודל זה מאפשר לחוקרים לחקור את ההשפעות של גורמים שונים ותנאים כמו ציפוי שונים צפיפויות על המאפיינים של ייצור אסטרוגן בתאי granulosa שור.

מודל תרביות רקמה של ייצור אסטרוגן Granulosa שור ראשי תאים

מוצגים כאן שני פרוטוקולים לתחינה של ציטים שונים בתנאי תרבות תלת-מידוד. בתחילה, קומפלקסים cumulus-oocyte (COCs) הם עטוף חרוזים fibrin-אלגינט. בשנייה, הם מוקפים פלואורציה אתילן פרופילן אבקת חלקיקי (microbioreactors). שתי המערכות מבטיחות תנאים אופטימליים לשמירה על ארגון תלת-מיוד.

הידרוג'לים אלג'ינאט מפורקים ופרוטאוליטית ומיקרוביו-סיבה לאנקלוסציה של פורצין אוציט

אנו מתארים את ההליכים לבידוד של גידול oocytes מזקיקי השחלות בשלבים מוקדמים של פיתוח, כמו גם את ההתקנה של מערכת תרבות מבחנה אשר יכול לתמוך בצמיחה ובידול עד לשלב הבוגר במלואו.

במבחנה תרבות אסטרטגיה עבור Oocytes מ זקיק אנטרל מוקדם בבקר

תרבות מבינטית של קליפת המוח השחלות שור ואת ההשפעה של דיאטה תזונתית מדרגות צעד על microenvironment השחלות מוצג. חתיכות קליפת המוח השחלתית היו מתורבתים במשך שבעה ימים, סטרואידים, ציטוקינים, ושלבי זקיק הוערכו. טיפול דיאטה מדרגות-צעד היה סטרואידוגנזה מוגברת וכתוצאה מכך התקדמות זקיק בתרבות.

תרבית רקמת קליפת המוח השחלות

קידום המחקר של פוליקולוגנזה פרה-אנטרלית דורש שיטות יעילות לבידוד זקיקים משחלות בודדות. מוצג כאן פרוטוקול מכני יעיל לבידוד זקיקים משחלות בקר באמצעות מסוק רקמות והומוגנייזר. שיטה זו מאפשרת איסוף של מספר רב של זקיקים פרה-אנטרליים בני קיימא משחלה אחת.

בידוד זקיקים פרה-אנטרליים קטנים משחלת הבקר באמצעות שילוב של פיצול, הומוגניזציה וסינון סדרתי

כאן, אנו מתארים פרוטוקול להפרדת תאי חלמון, גרנולוזה ותאי תקה בזקיקי קדם-ביוץ של עופות. טיפול מדויק זה מאפשר חקירות קריטיות של תפקידן של שכבות אלה בתפקוד הרבייה, ומסייע להבנת התפתחות הזקיקים, ויסות הורמונלי וחקר מחלות לשיפור התפוקה החקלאית ותובנות ביו-רפואיות.

הפרדה של גרנולוזה של זקיקי קדם-ביוץ של עופות ושכבות תאי Theca ליישומים במורד הזרם

אנו מתארים שיטות לבידוד תאי סומטיקה של שחלות העכבר מחלק מועשר בסטרומה של השחלה וליצירת אורגנואידים סומטיים של שחלות העכבר בגישה ללא פיגומים.

חקירת מיקרו-סביבת השחלות: שיטות לבידוד, תרבית דו-ממדית ותרבות אורגנואידית של תאי סומטיקה בשחלות בעכברים

פרוטוקול זה מתאר מודל microfluidic שיתוף תרבות לתרבות סימולטני מקומי של תאים וחיידקים אפיתל. מודל זה יכול לשמש חוקר את תפקידם של אותות מולקולריים שונים מסיסים על הפתוגנזה, כמו גם מסך האפקטיביות של זני חיידקים פרוביוטיים המשוערת.

Microfluidic משותף התרבות של תאים וחיידקים אפיתל לחקירת מסיסים אותות בתיווך אינטראקציות

mStrawberry OP9 התאים מאפשרים הערכה מלאה של הצאצאים ES-derived כל מתרבות משותפת.

השתנה ES / OP9 שותף לתרבות פרוטוקול מספקת שירותי אפיון משופר צאצאיהם hematopoietic

חקור מודל קו-תרבית של תאי תקה וגרנולוזה בבקר לניתוח אינטראקציות פרקריניות ותובנות לפיזיולוגיה שחלתית. שיטה זו מאפשרת חקירת דינמיקה זקיקית ותקשורת תאית.

מערכת קו-תרבית מותאמת להבנת אינטראקציות בין תאי גרנולוזה-תקה בשחלת הבקר

גלה סרטונים נוספים