Name: הגברה וזיהוי של מיקרו-RNA באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה כשיטת זיהוי וכימות חדשה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: למד זיהוי וכימות מיקרו-RNA וחלבונים ברקמות FFPE באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה. שיטה זו מאפשרת תצפית מרחבית של היחסים בין מולקולות במיקרו-סביבת הגידול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Smolarz, B., Nowak, A. Z., Romanowicz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-epidemiology%2C+classification%2C+pathogenesis+and+treatment+%28review+of+literature%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-epidemiology, classification, pathogenesis and treatment (review of literature).</a> Cancers. 14 (10), 2569(2022).</li>
<li>Davis-Dusenbery, B. N., Hata, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+cancer%3A+The+involvement+of+aberrant+microrna+biogenesis+regulatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microrna in cancer: The involvement of aberrant microrna biogenesis regulatory pathways.</a> Genes Cancer. 1 (11), 1100-1114 (2010).</li>
<li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microRNAs+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of microRNAs in human cancer.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 1 (1), 15004(2016).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirnas+and+cancer%3A+Key+link+in+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Mirnas and cancer: Key link in diagnosis and therapy.</a> Genes. 12 (8), 1289(2021).</li>
<li>Juźwik, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+dysregulation+in+neurodegenerative+diseases%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA dysregulation in neurodegenerative diseases: A systematic review.</a> Prog Neurobiol. 182, 101664(2019).</li>
<li>Pauley, K. M., Cha, S., Chan, E. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+autoimmunity+and+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Microrna in autoimmunity and autoimmune diseases.</a> J Autoimmun. 32 (3-4), 189-194 (2009).</li>
<li>Lee, Y. S., Dutta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrornas+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol+Mech+Dis%22%5BJournal%5D)">Micrornas in cancer.</a> Ann Rev Pathol Mech Dis. 4 (1), 199-227 (2009).</li>
<li>Thomson, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+gene+regulatory+properties+of+argonaute-bound+small+rnas+of+diverse+genomic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Assessing the gene regulatory properties of argonaute-bound small rnas of diverse genomic origin.</a> Nuc Acids Res. 43 (1), 470-481 (2015).</li>
<li>Kim, Y. K., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nobel-winning+microRNA%2C+the+microRNAestro+of+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Nobel-winning microRNA, the microRNAestro of gene silencing.</a> Mol Cells. 47 (11), 100123(2024).</li>
<li>Lai, X., Eberhardt, M., Schmitz, U., Vera, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology-based+investigation+of+cooperating+microRNAs+as+monotherapy+or+adjuvant+therapy+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Systems biology-based investigation of cooperating microRNAs as monotherapy or adjuvant therapy in cancer.</a> Nuc Acid Res. 47 (15), 7753-7766 (2019).</li>
<li>Garzon, R., Marcucci, G., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+micrornas+in+cancer%3A+Rationale%2C+strategies+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Disc%22%5BJournal%5D)">Targeting micrornas in cancer: Rationale, strategies and challenges.</a> Nat Rev Drug Disc. 9 (10), 775-789 (2010).</li>
<li>Jiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA%3A+The+impact+on+cancer+stemness+and+therapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">MicroRNA: The impact on cancer stemness and therapeutic resistance.</a> Cells. 9 (1), 8(2019).</li>
<li>Lin, B., Jiang, J., Jia, J., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+exosomal+miRNA+biosensing+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Recent advances in exosomal miRNA biosensing for liquid biopsy.</a> Molecules. 27 (21), 7145(2022).</li>
<li>Farrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+circulating+miRNAs+in+bovine+serum+and+their+potential+as+novel+biomarkers+of+early+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of circulating miRNAs in bovine serum and their potential as novel biomarkers of early Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection.</a> PLoS One. 10 (7), e0134310(2015).</li>
<li>Aparicio-Puerta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Srnabench+and+srnatoolbox+2022+update%3A+Accurate+mirna+and+sncrna+profiling+for+model+and+non-model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Srnabench and srnatoolbox 2022 update: Accurate mirna and sncrna profiling for model and non-model organisms.</a> Nuc Acid Res. 50 (W1), W710-W717 (2022).</li>
<li>Friedländer, M. R., Mackowiak, S. D., Li, N., Chen, W., Rajewsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirdeep2+accurately+identifies+known+and+hundreds+of+novel+microRNA+genes+in+seven+animal+clades%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirdeep2 accurately identifies known and hundreds of novel microRNA genes in seven animal clades.</a> Nuc Acid Res. 40 (1), 37-52 (2012).</li>
<li>Chou, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirtarbase+2016%3A+Updates+to+the+experimentally+validated+miRNA-target+interactions+database%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirtarbase 2016: Updates to the experimentally validated miRNA-target interactions database.</a> Nuc Acid Res. 44 (D1), D239-D247 (2016).</li>
<li>Porichis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+detection+of+miRNAs+and+gene-specific+mRNA+at+the+single-cell+level+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.</a> Nat Commun. 5 (1), 5641(2014).</li>
<li>Eichert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crystal+structure+of+an+%27all+locked%27+nucleic+acid+duplex%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">The crystal structure of an 'all locked' nucleic acid duplex.</a> Nuc Acid Res. 38 (19), 6729-6736 (2010).</li>
<li>Viratham Pulsawatdi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+multiplex+immunofluorescence+and+digital+pathology+workflow+for+the+characterisation+of+the+tumour+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">A robust multiplex immunofluorescence and digital pathology workflow for the characterisation of the tumour immune microenvironment.</a> Mol Oncol. 14 (10), 2384-2402 (2020).</li>
<li>Janati-Idrissi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+for+a+needle+in+a+haystack%3A+De+novo+phenotypic+target+identification+reveals+hippo+pathway-mediated+mir-202+regulation+of+egg+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Looking for a needle in a haystack: De novo phenotypic target identification reveals hippo pathway-mediated mir-202 regulation of egg production.</a> Nuc Acid Res. 52 (2), 738-754 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10 פעמים סוליין עם מאגר TRIS (TBS) pH 7.6&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>&nbsp; J62662&nbsp; K7</td><td>לשטיפות לסירוגין בין שלבים</td></tr><tr><td>1x מדלל/חסימה של נוגדן אופל &nbsp;</td><td>אקויה ביוסיינסיס</td><td>ARD1001EA</td><td>תמיסת חסימת חלבון</td></tr><tr><td>מדלל הגברת אוטומציה 1x Plus</td><td>אקויה ביוסיינסס&nbsp;</td><td>FP1609</td><td>משמש לדילול פלואורופורים של אופל</td></tr><tr><td>20x Concentrate&nbsp; בופר נתרן ציטראט מלח (SSC)</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>S6639-1L</td><td>עבור שטיפות miRNA לאחר היברידיזציה של פרוב</td></tr><tr><td>4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול (DAPI)&nbsp;</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק/אינויטרוגן</td><td>EN62248 / 62248</td><td>לצביעה גרעינית</td></tr><tr><td>מערכת היברידיזציה ACD HybEZ II</td><td>ACD Biotechne</td><td>321711</td><td>תנור המשמש לווסת טמפרטורה במהלך פרוטוקול miRNAscope</td></tr><tr><td>אנטי-CD8 (D8A8Y), ארנב mAb</td><td>טכנולוגיות איתות סלולריות</td><td>85336S</td><td>דוגמה לנוגדן ראשוני המשמש לאופטימיזציה של פרוטוקול זה</td></tr><tr><td>קונוגט HRP אנטי-דיגוקסיגנין (עכבר)</td><td>רוויטי הלתי סיינס בע"מ</td><td>NEF832001EA</td><td>מגיב משני המשמש לזיהוי miRNA</td></tr><tr><td>אנטי-EpCAM (E6V8Y), ארנב mAb</td><td>טכנולוגיות איתות סלולריות</td><td>93790</td><td>דוגמה לנוגדן ראשוני המשמש לאופטימיזציה של פרוטוקול זה</td></tr><tr><td>אבקת חוסם</td><td>אקויה ביוסיינסס&nbsp;</td><td>FP1012</td><td>פתרון חסימת miRNA</td></tr><tr><td>אלכוהול אתיל 100% (200 proof)</td><td>פארמקו</td><td>111000200</td><td>לצורך דה-פרפיניזציה</td></tr><tr><td>בופר EZ-AR1</td><td>BioGeneX</td><td>HK521-XAK</td><td>משמש לשאיבת אנטיגנים של חתכי רקמת FFPE בשלב החלבון</td></tr><tr><td>EZ-AR1 בופר אלגנטיות</td><td>BioGeneX</td><td>HK546-XAK</td><td>משמש לשחזור אנטיגנים של חתכי רקמת FFPE בשלב פרוב miRNA</td></tr><tr><td>מערכת EZ-Retriever IR</td><td>BioGeneX</td><td>MW015-IR</td><td>מיקרוגל המשמש לשאיבת אנטיגנים של חתכי רקמת FFPE</td></tr><tr><td>תמיסת מי חמצן 30%&nbsp;</td><td>סיגמא-אלדריץ' &nbsp;</td><td>HX0640-5&nbsp;</td><td>להכנת רקמות. מסייע לחסום פעילות פרוקסידאז אנדוגנית ולהפיק מוצרים בעלי צבע גבוה</td></tr><tr><td>miR-181c-3p miRNA גלאי</td><td>קיאגן</td><td>339112</td><td>דוגמה לגלאי miRNA המשמש לאופטימיזציה של פרוטוקול זה</td></tr><tr><td>miRCURY LNA miRNA ISH Buffer Set (FFPE)</td><td>קיאגן</td><td>339450&nbsp;</td><td>משמש לדילול גלאי miRNA</td></tr><tr><td>אופל 620</td><td>אקויה ביוסיינסס&nbsp;</td><td>FP1495001KT</td><td>פלואורופור לזיהוי נוגדן ראשוני</td></tr><tr><td>אופל 690&nbsp;</td><td>אקויה ביוסיינסס&nbsp;</td><td>FP1497001KT</td><td>פלואורופור לזיהוי נוגדן ראשוני</td></tr><tr><td>Opal Anti-Ms + Rb HRP</td><td>אקויה ביוסיינסיס</td><td>ARH1001EA</td><td>נוגדן משני המשמש כסוכן גילוי</td></tr><tr><td>פירס 16% פורמלדהיד (ללא מתנול), ללא מתנול</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>28908</td><td>לייצר 3.7% PFA להכנת רקמות</td></tr><tr><td>אנטי-פייד יהלום פרולונג</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>P36970</td><td>מדיית הרכבה</td></tr><tr><td>RNAscope Protease Plus</td><td>ACD Biotechne</td><td>322331</td><td>לחדירת חתכי רקמה&nbsp; על ידי עיכול חלקי של חלבונים ו- חשיפת מולקולות miRNA מטרה</td></tr><tr><td>מים ללא RNAse&nbsp;</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td>46-000-CM&nbsp;</td><td>לנקות ולהכין את כל הציוד, ולהשתמש בו כמדלל כשצריך&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>גיל 20</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>P1379-25ML</td><td>ליצור את TBS-T</td></tr><tr><td>הגברת אות טירמיד בתוספת ציאנין 3</td><td>אקויה ביוסיינסס&nbsp;</td><td>NEL744001KT</td><td>פלואורופור לזיהוי miRNA</td></tr><tr><td>גשושי U6 ו-Scramble miRNA</td><td>קיאגן</td><td>339459</td><td>גשושי בקרה אופציונליים</td></tr><tr><td>דרגת היסטולוגיה של קסילנים</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>UN1307</td><td>לצורך דה-פרפיניזציה</td></tr></tbody></table>

הגברה וזיהוי של מיקרו-rna באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה כשיטת זיהוי וכימות חדשה

MicroRNA Amplification and Recognition through Locked-nucleic-acid In situ Hybridization as a Novel Detection and Quantification Method

הגברה וזיהוי של מיקרו-RNA באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה כשיטת זיהוי וכימות חדשה

When using traditional probe-based in situ hybridization (ISH) imaging detection methods, microRNAs (miRNAs) are difficult to capture due to their size, ...

microrna-amplification-recognition-through-locked-nucleic-acid-situ

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

כאן אנו מתארים זמנית אופטימיזציה הפוך transcriptase PCR כמותי (qRT-PCR) פרוטוקול בשילוב עם פלטפורמת microfluidic ככלי העלות והזמן תפוקה גבוהה יעיל ההקרנה microRNA (מירנה) רמות הביטוי, במיוחד כאשר עובדים עם כמויות מוגבלות של המדגם.

תפוקה גבוהה פרופיל MicroRNA: Multiplex אופטימליים qRT-PCR בקנה מידה Nanoliter על IFCs דינמי Fluidigm ArrayTM

שיטה חדשנית תפוקה גבוהה מתואר המאפשר איתור quantitation היחסי של RNA קטנים ביטוי mRNA של תאים חיידקיים יחיד באמצעות נעול בדיקות חומצות גרעין תזרים cytometry...

נעול חומצות גרעין תזרים cytometry פלואורסצנציה באתרו</emהכלאה> (LNA זרימה FISH): שיטה לגילוי חיידקי RNA קטנים

סרטון זה מתאר אסטרטגיית הכלאה רציפה הכוללת הכלאה של גשושיות mRNA ל-mRNA מטרה ספציפי. לאחר הכלאת הגשושיות, הגברת האות מבוצעת כדי לשפר את הרזולוציה באמצעות הפחתת יחס אות לרעש במהלך RNA-CISH של דגימות היסטולוגיות.

הכלאת בדיקה והגברת אותות בהכלאה של RNA באתרו: טכניקה לאיתור רצפי RNA ספציפיים במקטעי רקמות

מטרתו של פרסום זה היא לדמיין ולדון בצעדים האופרטיביים של פרוטוקול צפון כתם משופר על RNA שחולץ מתסיסנית עוברים, תאים ורקמות. פרוטוקול זה שימושי במיוחד לאיתור יעיל של מיני RNA קטנים.

Enhanced צפון כתם איתור של RNA קטן מינים ב תסיסנית

MicroRNAs (miRNAs) הם סוג של מולקולות רגולטוריות שנשמרו באופן נרחב. כאן אנו מתארים שיטת שיבוט miRNA המסתמכת על שני שלבי קשירה חזקים ואחריהם ריצוף תפוקה גבוהה. השיטה שלנו מאפשרת כימות מדויק בכל הגנום של miRNAs.

קשירת יעילה ביותר של RNA קטן מולקולות לMicroRNA Quantitation על ידי רצף תפוקה גבוהה

מיקרו-רנ"א במחזור צמחו לאחרונה כסמנים ביולוגיים מבטיחים וחדשניים לסוגי הסרטן שונים ולמחלות אחרות. המטרה של מאמר זה היא לדון בשלוש פלטפורמות שונות המבוסס על בדיקה בזמן אמת PCR ושיטות שאינן זמינים לכמת ולקבוע את השפע של מיקרו-רנ"א במחזור.

בזמן אמת המבוסס על הבדיקה PCR גישות למדידת כמותית של מיקרו-רנ&quot;א

כאן אנו מציגים פרוטוקול לאיתור ביטוי miRNA בדגימות חולות סרטן השד באמצעות הכלאה של miRNA באתר.

ניתוח Clinicopathological ביטוי מירנה שד רקמות סרטן על ידי שימוש מירנה<em&gt; באתרו</em&gt; כלאה

דו ח זה מתאר שיטה מהירה ואמינה עבור אימות מטרות mRNA miRNAs הסלולר. משתמשת בשיטה biotinylated סינתטי מבוססת מגבר קדם חומצת גרעין נעול miRNA מחקה ללכידת המטרה mRNA. לאחר מכן, מצופים streptavidin beads מגנטי מועסקים הנפתח המטרה mRNA על כימות על ידי תגובת שרשרת של פולימראז qPCR.

הנועד מבוסס-ביוטין הנפתח Validate mRNA miRNAs מטרות של הסלולר

Reproducibly לספור את המספרים של mRNAs ב oocytes בודדים, מולקולה בודדת RNA פלורסצנטיות באתרו הכלאה (RNA-דג) היה אופטימיזציה עבור תאים שאינם מחסידי. Oocytes נאספו, hybridized עם הגששים ספציפית התעתיק, לכמת באמצעות תוכנה כימות של התמונה.

השימוש יחיד מולקולה פלורסנט ב באתרו הכלאה (SM-דג) כדי mRNAs Quantify ו Localize ב Oocytes מאתר

שיטה זו ממחישה את השימוש בטכניקת הכלאה הצפוני כדי לזהות miRNAs מתוך תמצית RNA מוחלטת.

ה-RNA ניתוח כתמי לזיהוי וכימות של מיקרורונאס הצמח

ננו-מכונות מבוססות DNAzyme יכולות לשמש לזיהוי סלקטיבי ורגיש ביותר של חומצות גרעין. מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט לתכנון ננו-מכונות מבוססות DNAzyme עם ליבה של 10-23 המשתמשות בתוכנה חופשית ויישומן בזיהוי מקטע וירוס אפשטיין-בר כדוגמה.

DNAzyme 10-23 - ננו-מכונות מבוססות לזיהוי חומצות גרעין

למד זיהוי וכימות מיקרו-RNA וחלבונים ברקמות FFPE באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה. שיטה זו מאפשרת תצפית מרחבית של היחסים בין מולקולות במיקרו-סביבת הגידול.

הגברה וזיהוי של מיקרו-RNA באמצעות הכלאה נעולה של חומצת גרעין-באתרה כשיטת זיהוי וכימות חדשה

גלה סרטונים נוספים