Name: הדמיה מדויקת של קולטני אינסולין A ו-B במוח עכברים עם בדיקת היברידיזציה של RNA באתרו (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: למדו שיטת היברידיזציה דופלקסית באתרו לזיהוי קולטני אינסולין A ו-B במוח עכברים. טכניקה זו חושפת תבניות ביטוי ספציפיות לאיזופורמים ומסייעת בפיתוח טיפולים למחלות נוירולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Häring, H. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+insulin+receptor%3A+signalling+mechanism+and+contribution+to+the+pathogenesis+of+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">The insulin receptor: signalling mechanism and contribution to the pathogenesis of insulin resistance.</a> Diabetologia. 34 (12), 848-861 (1991).</li>
<li>Benecke, H., Flier, J. S., Moller, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+spliced+variants+of+the+insulin+receptor+protein%3A+expression+in+normal+and+diabetic+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alternatively spliced variants of the insulin receptor protein: expression in normal and diabetic human tissues.</a> J Clin Invest. 89 (6), 2066-2070 (1992).</li>
<li>Vella, V., Malaguarnera, R., Nicolosi, M. L., Morrione, A., Belfiore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin%2FIGF+signalling+and+discoidin+domain+receptors%3A+an+emerging+functional+connection%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin/IGF signalling and discoidin domain receptors: an emerging functional connection.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1866 (11), 118522(2019).</li>
<li>Galal, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+and+insulin+growth+factor-like+receptors%3A+implications+in+cell+signaling%2C+carcinogenesis%2C+and+chemoresistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms and insulin growth factor-like receptors: implications in cell signaling, carcinogenesis, and chemoresistance.</a> Int J Mol Sci. 24 (19), 15006(2023).</li>
<li>Starks, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+is+associated+with+higher+cerebrospinal+fluid+tau+levels+in+asymptomatic+APOE%C9%9B4+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Alzheimers+Dis%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance is associated with higher cerebrospinal fluid tau levels in asymptomatic APOEɛ4 carriers.</a> J Alzheimers Dis. 46 (2), 525-533 (2015).</li>
<li>Belfiore, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptor+isoforms+in+physiology+and+disease%3A+an+updated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptor isoforms in physiology and disease: an updated view.</a> Endocr Rev. 38 (5), 379-431 (2017).</li>
<li>Wang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope%3A+a+novel+in+situ+RNA+analysis+platform+for+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Diagn%22%5BJournal%5D)">RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues.</a> J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).</li>
<li>BaseScope assays. , Advanced Cell Diagnostics, Inc. 
 <a target="_blank" href="https://acdbio.com/basescope-duplex-assay">https://acdbio.com/basescope-duplex-assay</a> (2025).</li>
<li>Dani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cellular+and+spatial+map+of+the+choroid+plexus+across+brain+ventricles+and+ages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A cellular and spatial map of the choroid plexus across brain ventricles and ages.</a> Cell. 184 (11), 3056-3074.e21 (2021).</li>
<li>Schulingkamp, R. J., Pagano, T. C., Hung, D., Raffa, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+receptors+and+insulin+action+in+the+brain%3A+review+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin receptors and insulin action in the brain: review and clinical implications.</a> Neurosci Biobehav Rev. 24 (8), 855-872 (2000).</li>
<li>Milstein, J. L., Ferris, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+as+an+insulin-sensitive+metabolic+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Metab%22%5BJournal%5D)">The brain as an insulin-sensitive metabolic organ.</a> Mol Metab. 52, 101234(2021).</li>
<li>Moruzzi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+insulin+receptor+isoforms+in+obesity%2Ftype+2+diabetes+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of insulin receptor isoforms in obesity/type 2 diabetes mouse models.</a> J Cell Mol Med. 25 (10), 4800-4813 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מי אמוניום</td><td>מדע מיקרוסקופ אלקטרונים&nbsp;</td><td>ברקוד 26754-4א</td><td></td></tr><tr><td>ערכת ריאגנטים לזיהוי Dulplex של BaseScope</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>323810</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת בקרה חיובית דופלקס דופלקס BaseScope- עכבר (מ"מ)-C1-PPIB-1ZZ/C2-Polr2A-1ZZ</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>700121</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת בקרה חיובית דופלקס דופלקס BaseScope-C1-DapB-1ZZ/C2-DapB-1ZZ</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>700141</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין I של גיל</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>GHS132-1L</td><td></td></tr><tr><td>עיזים נגד ארנב IgG (H+L) נוגדן משני בעל ספיחה צולבת גבוהה, Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>א32731</td><td></td></tr><tr><td>תנור, מגש, מתלה ומגש כביסה HybEZ</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>321721, 310012, 321716, 321717</td><td></td></tr><tr><td>עט מחסום הידרופובי ImmEdge</td><td>מעבדת וקטור</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>בדיקות איזופורם AAND B של INSR: BA-Mm-Insr-TV1-E10E11, BA-Mm-Insr-TV2-E11E12-C2</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>717411, 717421-C2</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן לקולטן אינסולין</td><td>איתות סלולרי&nbsp;</td><td>23413</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope 10x Target Retrival</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>322000</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope מי חמצן, פרוטאז פלוס</td><td>ביוגרפיה של ACD</td><td>322381</td><td></td></tr><tr><td>מי מלח-נתרן ציטראט (SSC) 20x</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP1325-1</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות SuperFrost Plus</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-18</td><td></td></tr><tr><td>VectaMount מדיום הרכבה קבוע</td><td>מעבדת וקטור</td><td>H-5000</td><td></td></tr></tbody></table>

הדמיה מדויקת של קולטני אינסולין a ו-b במוח עכברים עם בדיקת היברידיזציה של rna באתרו

Precise Visualization of Insulin Receptors A and B in Murine Brain with an RNA In Situ Hybridization Assay

קולטן האינסולין (IR) הוא קולטן טירוזין קינאז טרנסממברני המורכב משתי תת-יחידות α חוץ-תאיות ושתי תת-יחידות β טרנסממברניות, היוצרות הטרוטרמר תפקודי. α-תת-היחידות מתווכות את קשירת האינסולין, בעוד של-β-תת-היחידות יש פעילות טירוזין קינאז מהותית היוזמת איתות במורד הזרם. שחבור חלופי של IR mRNA של אקסון 11 מייצר שני איזופורמים של IR, IR-A ו-IR-B. ככזה, IR-B כולל מקטע של 12 חומצות אמינו המקודד על ידי אקסון 11 בתוך אזור מסוף C של תת-היחידה α, בעוד ש-IR-A חסר קטע זה.
<p class="jove_content" fo:ke...

הדמיה מדויקת של קולטני אינסולין A ו-B במוח עכברים עם בדיקת היברידיזציה של RNA באתרו

Insulin receptors (IRs) are widely expressed across all tissues and all cell types. It exists in two functionally distinct isoforms -- IR-A and IR-B -- ...

precise-visualization-insulin-receptors-b-murine-brain-with-an-rna

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פעמיים פלואורסצנטי באתרו הכלאה בסעיפים המוח טריים

פרוטוקול זה משמש בהצלחה כמותית לזהות רמות ודפוסים מרחביים של ביטוי mRNA של מספר סוגי רקמות על פני בעלי החוליות. השיטה יכולה לזהות תעתיקי שפע נמוך ומאפשר עיבוד של מאות שקופיות בו זמנית. אנו מציגים את הפרוטוקול באמצעות פרופיל הביטוי של היווצרות העופות המוח העוברי כדוגמה.

רדיואקטיבי באתרו הכלאה לזיהוי תבניות ביטוי מגוונות גנים רקמות

סרטון זה מדגים את הזיהוי של סינתזת RNA של קולטני סרוטונין באמצעות בדיקות אוליגונוקלאוטידים ברקמת מוח של חולדות המושפעות מתסמונת סרוטונין. הפרוטוקול כולל טיפול מקדים ברקמות, הכלאת בדיקה וזיהוי אנזימטי כדי לדמיין ולכמת את ביטוי ה-RNA של קולטני סרוטונין במיקרוסקופ.

הכלאה באתרה באמצעות בדיקות אוליגונוקלאוטידים לחקר ביטוי RNA בחלקי מוח של חולדות

מקור: Baleriola, J., et. al., זיהוי mRNAs מקומיים אקסונליים בחלקי מוח באמצעות הכלאה ברזולוציה גבוהה באתר.  J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את זיהוי ה-mRNA בתוך אקסונים כולינרגיים בפרוסות היפוקמפוס קבועות של עכבר באמצעות הכלאה פלואורסצנטית באתרה וצביעת נוגדנים. מיקרוסקופיה פלואורסצנטית חושפת את הלוקליזציה המרחבית של mRNAs מתויגים בבדיקה וכולין אצטילטרנספראז בנוירונים כולינרגיים.

צביעה חיסונית של נוירונים בפרוסות מוח של עכבר בעקבות הכלאה פלואורסצנטית באתרה

RNA in situ hybridization (ISH) מאפשר הדמיה של RNA בתאים וברקמות. כאן אנו מראים כיצד ניתן להשתמש בהצלחה בשילוב של RNAscope ISH עם אימונוהיסטוכימיה או צבעים היסטולוגיים כדי לזהות mRNAs הממוקמים באקסונים בחלקים של מוחות עכברים ובני אדם.

איתור של Axonally המותאם למקום mRNAs בסעיפי מוח באמצעות ברזולוציה גבוהה<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה

לוקליזציה של ביטוי גנים לסוגי תאים ספציפיים יכולה להיות מאתגרת בשל היעדר נוגדנים ספציפיים. כאן אנו מתארים פרוטוקול לזיהוי משולש בו זמנית של ביטוי גנים על ידי שילוב של RNA פלואורסצנטי כפול הכלאה באתרו עם צביעה חיסונית.

שילוב קרינה זוגית<em&gt; באתרו</em&gt; כלאה עם Immunolabelling עבור איתור של הביטוי של שלושה גנים בסעיפי מוח עכבר

בחיי עיר הכלאה (איש) פרוטוקול המשתמשת oligonucleotides antisense קצר כדי לזהות דפוסים חלופיים pre-mRNA splicing בסעיפים מוח העכבר מתואר.

ניתוח כמותי של שחבור חלופי Pre-mRNA בסעיפים מוח העכבר באמצעות ה-RNA בחיי עיר הכלאה Assay

רומן, חיסוני התאמה לניקוי רקמות הרקמה כמו הדמיה 3D האולטימטיבי של איברים הממס נקי לאפשר הדמיה 3D של זיהום המוח וירוס כלבת הסביבה הסלולרית המורכבת שלה. עבה, נוגדן מתויג פרוסות רקמת המוח נעשים שקופים להגדיל את עומק ההדמיה כדי לאפשר ניתוח תלת-ממד על ידי המיקרוסקופיה סריקת לייזר מיקרוסקופ.

ברזולוציה גבוהה 3D הדמיה של זיהום וירוס כלבת ברקמת המוח נקי ממס

כאן, אנו מציגים פרוטוקול העושה שימוש בצבעים ליד אינפרא-אדום בשילוב עם האימונוהיסטוכימיה וסריקה ברזולוציה גבוהה כדי לאשר את החלבונים באזורי המוח.

שימוש בקרוב-אינפרא אדום פלואורסצנטית ברזולוציה גבוהה סריקה למדוד חלבון הביטוי במוח מכרסם

פרוטוקול זה מתאר שיטה לשילוב הכלאה פלואורסצנטית באתרו (FISH) ואימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית (IHC) באזורי מוח עכבר טריים קפואים וקבועים, במטרה להשיג FISH רב-תוויות ואות IHC פלואורסצנטי. IHC התמקד בחלבונים ציטופלזמיים וחלבונים המחוברים לממברנה.

שילוב של הכלאה פלואורסצנטית באתרו עם אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית על חלקי מוח טריים של עכברים קפואים או קבועים

מולטיפלקס בהכלאה במקום (ISH) הועסק כדי לדמיין בו זמנית את התמלילים עבור שני קולטנים מצמידי חלבון G וגורם שעתוק אחד בכל הקומפלקס הגנגליוני של העכבר הבוגר. פרוטוקול זה יכול לשמש ליצירת מפות מדויקות של פרופילי התמלול של נוירונים vagal afferent.

זיהוי של ביטוי קולטן מצמיד חלבון G בנוירונים Afferent עכבר Vagal באמצעות מולטיפלקס בהכלאה במקום

למדו שיטת היברידיזציה דופלקסית באתרו לזיהוי קולטני אינסולין A ו-B במוח עכברים. טכניקה זו חושפת תבניות ביטוי ספציפיות לאיזופורמים ומסייעת בפיתוח טיפולים למחלות נוירולוגיות.

הדמיה מדויקת של קולטני אינסולין A ו-B במוח עכברים עם בדיקת היברידיזציה של RNA באתרו

גלה סרטונים נוספים