כריתת לימפהדנקטומיה דו-צדדית של עכברים
30 בדצמבר 2025
פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות לכריתת לימפאדנקטומיה כלייתית דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב.
אנו חוקרים את תנועת תאי החיסון מבלוטת הלימפה לכליה ואת האנטיגן של הכליה לבלוטת הלימפה המנקזת. הגישה הכירורגית שלנו מאפשרת יתרון ייחודי בכך שאנו יכולים לשבש באופן סלקטיבי את בלוטות הלימפה ולהשאיר את כל שאר בלוטות הלימפה שלמות במודל הישרדות ארוך טווח שנסבל היטב. כעת, לאחר שפותח מודל זה, אנו יכולים לחקור את התרומה של בלוטות הלימפה והתגובות החיסוניות וכיצד הסרת קשרים אלו תורמת לפגיעה בכליות הקשורה למערכת החיסון.
כדי להתחיל, מניחים את החיה המורדמת על שולחן הניתוחים ומרחו משחה. השתמשו בסרט כדי לקבע את זרועו השמאלית של החיה בכיוון גבוה יותר ואת הזנב בכיוון תחתון כדי ליצור יציבה רגועה אך מוארכת. לגלח את הפרווה ולחטא את אזור הניתוח שלוש פעמים.
לאחר אישור עומק ההרדמה באמצעות צביטה באצבע, בצע חתך אלכסוני של סנטימטר אחד דרך העור ממש מתחת לטחול, בערך סנטימטר אחד מתחת לצלע האחרונה. באמצעות דיסקציה קהה, הפרדו את העור מדופן הבטן והחזה וזהו את הטחול בתוך הבטן. לאחר מכן, בצע חתך של סנטימטר אחד דרך שרירי דופן הבטן שמתחת לטחול כדי להיכנס לחלל הפריטונאלי.
זהה את הכליה השמאלית כאיבר חלק הממוקם לאורך דופן הבטן האחורית ממש מתחת לטחול. באמצעות שני מלקחיים בזווית, נתח בצורה ישירה מאחורי הכליה השמאלית כדי להגיע לרטרופריטונאום ולהחזיר בעדינות את הכליה השמאלית בכיוון האנטרומדיאלי. אתר את כרית רקמת השומן שמקיפה את בלוטת הלימפה הכלייתית השמאלית, שנמצאת אחורית לכליה ומעל כלי הדם הכלייתיים.
לזהות ולהימנע מבלוטת יותרת הכליה הממוקמת כלפי מעלה, האאורטה האחורית והסיסטרנה כילי בצד הקדמי. באמצעות מלקחיים דקים, יש לנתח בצורה ישירה סביב קפסולת בלוטת הלימפה כדי להפריד אותה מכלי דם סמוכים, תוך מתן מתח נגדי עדין עם מלקחיים בזווית. השתמש במלקחיים ישרים עם קצה דק כדי למשוך את בלוטת הלימפה כלפי מעלה.
לאחר מכן השתמשו במספריים דקים כדי לחתוך בחדות את התוספות הפוסטרומדיאליות. בדקו את האזור כדי לוודא המוסטזיס. לאחר מכן, החזירו את הכליה למצב אנטומי תקין.
סגור את דופן הבטן ואז את העור עם תפר פוליפרופילן מונופילמנט 6-0 בתפר רציף. מרחו דבק כירורגי סטרילי כדי לאטום את הפצע. באופן אופציונלי, לשיפור זיהוי קשרי הלימפה הכלייתיים, יש להזריק 10 עד 20 מיקרוליטר של צבע כחול סטרילי מסונן של 5% Evans ב-PBS לשתי כריות הרגליים האחוריות לפני כריתת הלימפאדנקטומיה של הכליה.
תוך חמש דקות מהזרקה, הצבע מגיע לבלוטות הלימפה הכלייתיות דרך ניקוז לאורך מסלול הלימפה האיליאקית. העבר את החיה למצב דקוביטוס לטרלי שמאלי כאשר הצד השמאלי פונה כלפי מטה. השתמש בסרט כדי לקבע את זרוע ימין של החיה בכיוון העליון ואת הזנב בכיוון תחתון כדי לשמור על יציבה רגועה אך מוארכת.
עכשיו, תעשה חתך עור אלכסוני של סנטימטר מתחת לצלע האחרונה, שתמקם מעט גבוה יותר מהצד השמאלי. באמצעות דיסקציה קהה, הפרדו את העור מדופן הבטן והחזה. לאחר מכן מבצעים חתך של סנטימטר אחד דרך שרירי דופן הבטן כדי להגיע לחלל הפריטונאלי.
זהה את הכליה הימנית, שהיא איבר חלק הממוקם לאורך דופן הבטן האחורית ומתחת לכבד. באמצעות שני מלקחיים בזווית, נתח בצורה ישירה מאחורי הכליה הימנית כדי להיכנס למרחב הרטרופריטוניאלי ולהחזיר את הכליה הימנית בכיוון אנטרומדיאלי. זהה את כרית רקמת השומן המקיפה את בלוטת הלימפה הימנית, שנמצאת אחורית לכליה ומעל כלי הדם הכלייתיים.
זהה והימנע מבלוטת יותרת הכליה הממוקמת מעל בלוטת הלימפה. כעת, באמצעות מלקחיים דקים, מנתח בצורה ישירה סביב קפסולת בלוטת הלימפה כדי להפריד אותה מכלי דם סמוכים תוך הפעלת אחיזה נגדית עדינה עם מלקחיים בזווית. לאחר מכן, עם מלקחיים ישרים עם קצה דק, משוך את בלוטות הלימפה כלפי מעלה וחתך בחדות את החיבורים הפוסטרומדיאליים עם מספריים דקים.
בדוק את האזור כדי לוודא המוסטזיס. לבסוף, החזירו את הכליה הימנית למיקומה האנטומי. סגור את דופן הבטן והעור בשתי שכבות באמצעות תפר פוליפרופילן מונופילמנט 6-0 בתבנית רצינית, ומרח דבק כירורגי סטרילי על אזור החתך.
ציטומטריית זרימה אישרה חילוץ מוצלח של בלוטות לימפה בכל חמש דגימות כריתת הלימפאדנקטומיה של הכליה השמאלית ובחמש הדגימות הימניות, כאשר כל אחת מהן הראתה מעל 50% תאים חיים חיוביים ל-CD45, לעומת פחות מ-2% בביקורת שומן ויסרלי. כימות תאים חיוביים ל-CD45 הראה הבדל משמעותי מאוד בין דגימות הלימפאדנקטומיה של הכליה השמאלית והימנית בהשוואה לרקמת שומן ויסרלית, ללא הבדל משמעותי בין הצד השמאלי לימין.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מציג פרוטוקול מפורט לביצוע לימפאדנקטומיה רנלית בילטרלית בעכברים, המאפשרת הסרה סלקטיבית של קשרי הלימפה הרנליים תוך שימור רקמות לימפטיות אחרות. השיטה נועדה להקל על מחקרים העוסקים בתפקידם של קשרי הלימפה הרנליים בתנועת תאי מערכת החיסון ובתגובות חיסוניות הקשורות לכליות, במיוחד בהקשר של מחלות אוטואימוניות סיסטמיות כגון lupus erythematosus סיסטמי. הפרו prosedur נסבל היטב, תומך בהישרדות לטווח ארוך, ומניב קשרי לימפה שלמים המתאימים לניתוחים המשכיים.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- אימונולוגיה
- נפרולוגיה
- טכניקות כירורגיות במודלים של בעלי חיים
רקע
- מחלות אוטואימוניות כוללות התמקדות חיסונית שגויה ברקמות עצמיות, המובילה לנזק באיברים.
- איברים לימפואידיים משניים, כולל קשרי לימפה, הם קריטיים להפעלה של תאי B ותאי T ולסבילות חיסונית.
- תפקידם של קשרי לימפה מנקזים באוטואימוניות ספציפית לאיבר ובאוטואימוניות מערכתית אינו מובן במלואו, במיוחד עבור הכליות.
- לומיס מערכתי (Systemic lupus erythematosus) כולל לעיתים קרובות פגיעה בכליות, כאשר קשרי לימפה כלייתיים משמשים כאתרים עיקריים לניקוז אנטיגנים ולתנועת תאי מערכת החיסון.
מטרת המחקר
- פיתוח ותיאור של הליך כירורגי חי (survival surgical procedure) לכריתה סלקטיבית של קשרי לימפה כלייתיים דו-צדדיים בעכברים.
- מתן אפשרות לחקירת ההשפעות המקומיות של קשרי לימפה כלייתיים על תגובות חיסוניות ופגיעות בכליות.
- אספקת שיטה הניתנת לשחזור לבידוד קשרי לימפה כלייתיים שלמים לצורך ניתוחים המשכיים.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הרדמה של עכברים והכנה כירורגית, כולל גילוח וחיטוי.
- חתכים אלכסוניים בעור ובדופן הבטן להגעה לכליות שמאל וימין.
- דיסקציה קהה וחדה לבידוד והוצאה של קשרי לימפה כלייתיים תוך הימנעות ממבנים סמוכים (בלוטת יותרת הכליה, אבי העורקים, cisterna chyli).
- הזרקה אופציונלית של צבע Evans blue לשיפור הנראות של קשרי הלימפה.
- סגירת החתכים באמצעות תפרים ודבק כירורגי.
- ציטומטריה של זרימה (Flow cytometry) לאישור הצלחת השליפה של קשרי הלימפה ולהערכת אוכלוסיות התאים.
תוצאות עיקריות
- פרוצדורת הלימפדנאקטומיה הרנלית הבילטרלית היא בטוחה, נסבלת היטב ותומכת בהישרדות לטווח ארוך (לפחות 4 חודשים לאחר הניתוח).
- קשרי הלימפה הרנליים שהוסרו הם שלמים וזמינים באופן מיידי לעיבוד המשכי.
- זרימה ציטומטרית (Flow cytometry) אישרה חילוץ מוצלח, עם למעלה מ-50% תאים חיים חיוביים ל-CD45 בדגימות של קשרי לימפה, לעומת פחות מ-2% בביקורות של רקמת שומן ויסרלית.
- לא נמצא הבדל משמעותי בתבואת התאים בין קשרי הלימפה הרנליים השמאליים והימניים.
מסקנות
- פרוטוקול זה מאפשר הסרה סלקטיבית של קשרי לימפה כלייתיים בעכברים לצורך מחקרים ממוקדים של תגובות חיסוניות בכליות.
- השיטה מהווה כלי בעל ערך לניתוח תפקידם של קשרי הלימפה הכלייתיים באוטו-אימוניות סיסטמית וספציפית לאיבר.
- הנחיות מפורטות וטיפים לפתרון בעיות תומכים בהדירות ובהצלחת הפרוצדורה.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
כריתה סלקטיבית של קשרי לימפה ביליטרליים מהכליות בעכברים מאפשרת בחינה מדויקת של קשרי הלימפה המנקזים את הכליות, ובכך תומכת בהסרת סיכונים מכניסטיים במחקרים של אימונולוגיה רנלית ואוטואימוניות. מודל זה מספק פלטפורמה ייחודית לניתוח הפעלה חיסונית מקומית ותנועה של תאי מערכת החיסון, ובכך תורם ישירות לתיקוף מטרות ולאסטרטגיות של ביומרקרים טרנסלציונליים באוטואימוניות מערכתית. גישה זו מגבירה את הביטחון החזוי בנקודת המעבר משלב הגילוי לשלב הפרה-קליני עבור טיפולים המכוונים לכליות.
יישומים אסטרטגיים במחקר ופיתוח בביו-פרמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- מאפשר ניתוח תפקודי של תרומת קשרי הלימפה הכליתיים להפעלה ולמעבר של תאי מערכת החיסון.
- תומך בהסרת סיכונים מכניסטית על ידי בידוד השפעות חיסוניות מקומיות לעומת סיסטמיות בפתולוגיה של הכליות.
- מסייע בתיקוף מטרות עבור התערבויות המודולטיביות של אינטראקציות לימפטיות-חיסוניות במחלות כליות.
סריקה ופיתוח בדיקות
- מספק קשרי לימפה שלמים לצורך אנליזה כמותית בהמשך, כולל ציטומטריית זרימה של אוכלוסיות תאי חיסון.
- מבצע סטנדרטיזציה של איסוף רקמות לצורך פרופיל חיסוני הניתן לשחזור בין קבוצות ניסוי שונות.
- מכין דגימות ביולוגיות שעברו תיקוף לצורך סריקת תרכובות מוויסות חיסונית במערכות הרלוונטיות למחלה.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- מתיישב עם פיתוח ביומרקרים תרגומיים על ידי מתן אפשרות למחקר ישיר של רקמה לימפתית המנקזת את הכליות.
- תומך ברצף שבין גילוי מנגנוני לתיקוף פרה-קליני בלופוס אריתמטוסוסי סיסטמי ובמודלים קשורים.
- מספק מידע לקבלת החלטות על קידום מותאם-סיכון של אימונותרפיות המכוונות לכליות.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת נתונים
מודל כירורגי זה משלב בין שלבי הגילוי המוקדמים למחקר פרה-קליני, ומגשר בין מחקרים מכניסטיים לפרופילינג חיסוני תרגומי במודלים של מחלות כליה.
- ביולוגיה של הגילוי: מאפשר בדיקת השערות על תפקיד הלימפתיקה המקומית בתגובות חיסוניות של הכליות.
- סריקה: מספק מדדים כמותיים הדירים של תאי מערכת החיסון מקשרי לימפה שהוצאו.
- אנליזה: מאפשר השוואה באמצעות ציטומטריית זרימה של אוכלוסיות חיסוניות בין קבוצות ניסוי.
- מחקר תרגומי: מספק פלטפורמה להתאמת סממנים ביולוגיים (biomarkers) ובחינה חיסונית רלוונטית למחלה.
- שימוש חוזר ארגוני: מבסס מודל in vivo הניתן לשימוש חוזר למגוון מחקרים באימונולוגיה של הכליות ובמחלות אוטואימוניות.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מגביר את הביטחון החזיואי ומפחית עמימות מכניסטית במחקר אימונולוגיה של הכליות.
- ערך תפעולי: סטנדרטיזציה של בידוד קשרי לימפה ואנליזה חיסונית המשכית לצורך הדירות (reproducibility).
- ערך אסטרטגי: משפר את קבלת החלטות ה-go/no-go עבור התערבויות חיסוניות המכוונות לכליות.
- השפעה על הפורטפוליו: מאפשר תיעדוף מותאם סיכונים של נכסי אימונולוגיה של הכליות ותוכניות תרגומיות.
שיקולי יישום
- דורש מומחיות כירורגית במודלים של עכברים ודיסקציה אנטומית מדויקת.
- נדרשת גישה לתשתית של ציטומטריה זרימתית ואנליזה של תאי מערכת החיסון.
- דורש סטנדרטיזציה בין-צוותית לאיסוף רקמות ולפירוש הנתונים.
- ניתן להתאמה למודלים שונים של מחלות אוטואימוניות ומחלות כליות עם בקרות מתאימות.
- ניטור בעלי חיים לטווח ארוך הכרחי להבטחת סבילות להליך ושלמות הנתונים.
