20 במרץ 2026
מחקר זה בונה שני מודלים סטנדרטיים של השתלת זרים בעכברים כדי לשחזר באופן ספציפי דחייה תאית חריפה ודחייה חריפה בתיווך נוגדנים. מודלים אלו משמשים פלטפורמה אמינה לחקר מנגנוני דחיית מערכת החיסון על ידי זנוגרפט, להערכת אסטרטגיות מדכאות חיסון ולקידום מחקר טרום-קליני של השתלות זנו.
המחקר שלנו מתמקד במודלים סטנדרטיים של קסנוטרנספלנטציה (השתלה רב-מינית) בחיי animals קטנים, במטרה לבחון את המנגנונים של דחייה תאית חריפה ודחייה המתווכת נוגדנים. מודלים קיימים סובלים לעיתים קרובות מרגישות לביצועי המפעיל ומפרוצדורות ריאה. פרוטוקול זה מספק זרימת עבודה מהירה, סטנדרטית וניתנת לשחזור.
איור זה ממחיש את זרימת העבודה הסטנדרטית של שלושה אנשים עבור Xenatransplantation בעכברים, שבה המפעילים מבצעים בו-זמנית את הכנת המקבל, השגת לב התורם ואנסטומוזיס של לב התורם. ראשית, השגו חולדות sprayed dolly ניו born בנות 10 עד 12 ימים ועכברי C57 Black six או BALB/c בני שבעה עד שמונה שבועות. שכן את כל חולדות התורם ועכברי המקבל בסביבה נקייה מפתוגנים ספציפיים (specific pathogen-free).
חטט את אזור החזה והבטן של החולדה המורדמת באמצעות כדורי צמר ספוגים בפובידון יוד. בצע חתך בבטן בעזרת מספריים. לאחר מכן, השתמש במקלון צמר כדי להזיז בעדינות את המעיים הצידה כדי לחשוף את הווריד הנinferior vena cava.
השתמש במזרק אינסולין כדי להזריק 0.2 עד 0.5 milliliters של תמיסת מלח עם הפרין לווריד הנבוב התחתון (inferior vena cava). לחץ בעדינות על מקום ההזרקה בעזרת גדור כותנה כדי למנוע דימום. בצע חתך בסרעף.
בצע חיתוך דו-צדדי של דופן בית החזה והרחקה שלה כדי לחשוף את הלב במלואו. לאחר מכן, הסר את הבלוטה הטימוס ונתק את הווריד החולReturning superior vena cava כדי להקל על הלחץ. הזרם 1 mL של תמיסת University of Wisconsin לאורטה כדי להשריות עצירה של הלב.
המשיכו בפרפוזיה עד שהלב משנה את צבעו מאדום לחיוור. הניחו רפידה של גזה ספוגה בתמיסת סליין קרה מאוד על הלב כדי להוריד את טמפרטורתו ולמנוע התייבשות. קשרו את הווריד החוללי העליון והתחתון (superior and inferior vena cava) באמצעות תפר משי 8.0.
בצעו חיתוך רוחבי (transection) לשני כלי הדם. לאחר מכן, חתכו את האבי העורקי בקשת האורטלית. נתקו את העורק הריאתי בנקודת הפיצול שלו.
קשרו את כל הורידים הריאתיים באמצעות תפר משי 8-O. לאחר מכן, הוציאו את לב התורם. הניחו את הלב שהוצא למלחים קריים לשימור זמני.
הסר שיער מאזור הצוואר של העכבר המקבל המורדם באמצעות קרם להסרת שיער. חטא את העור בשלוש סבבים לסירוגין של פובידון יוד ואלכוהול. בצע חתך אורך של שני סנטימטרים, כסנטימטר אחד מימין לקו האמצע של הצוואר, באמצעות להב כירורגי.
בצעו דיסקציה תמה (blunt dissection) להסרת שכבות השומן והשריר התת-עוריים. כרתו את בלוטת תת-הלסת. לאחר חשיפת הווריד הג'וגולרי החיצוני, השתמשו בעט אלקטרו-קוואטריזציה המוגדר למצב קואגולציה נמוך כדי לצרוב את הענפים באופן פרטני.
הניחו שתי תפרי משי 8.0 ליד הקצה הדיסטלי של הווריד לצורך ליגציה. לאחר מכן, השתמשו במספרי מיקרוכירורגיה כדי לחתוך את הווריד הג'גולרי החיצוני בין שתי הליגטורות. הכניסו את הווריד הג'גולרי החיצוני דרך השרוול הוורידי (venous cuff) ודחפו את השרוול לבסיס הווריד.
לאחר מכן, קבעו אותה באמצעות תסביך כלי דם. השתמשו במספרי מיקרו-כירורגיה כדי להסיר את הקשירות. לאחר מכן, שטפו את שאריות הדם מהוריד באמצעות תמיסת סלין עם הפרין.
באמצעות פינצטה מיקרו-כירורגית, הפכו את הווריד הג'וגולרי החיצוני מעל השרוול והדקו אותו באמצעות תפר משי 8.0. בצעו דיסקציה קהה posterior לשריר הסטרנוקליידומסטואידי כדי לאתר את נרתיק העורק העניקי (carotid sheath). פתחו את נרתיק העורק העניקי.
הפרידו בזהירות את העורק התהומי השائع (common carotid artery) מהוריד הג'וגולרי הפנימי ומעצב הוואגוס. לאחר מכן, קשרו וחתכו את העורק התהומי. לאחר מכן, השחילו את הקצה התחתון של העורק החתוך דרך השרוול העורקי (arterial cuff).
הפוך את העורק מעל השרוול (cuff) וקבע אותו במקומו. החלק את האורטה של התורם מעל השרוול העורקי בעורק התגרה (carotid artery) של המקבל. קבע אותו באמצעות ליגטורה ממשי 8.0.
צרו לולאת קשר רפויה מסביב לעורק הריאתי של התורם. החליקו את העורק הריאתי מעל השרוול הוורידי של הווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל. לאחר מכן, הדקו אותו באמצעות ליגטורה של משי.
שחררו את התפסנים הכליים (vascular clamps) מעורק התגר (carotid artery) ומורי הווריד הג'וגולרי החיצוני (external jugular vein) של הרקיב כדי להחזיר את זרימת הדם. צפו בלב התורם כשהוא מחדיש כוצריות חזקות והופך לאדום במהירות בתוך 10 שניות. ברגע שלב התורם מחזיר לעצמו קצב יציב, כווננו את מיקומו.
בעזרת תפרי 4.0, סגור את החתך בעור הצוואר. חטא את אזור הניתוח באמצעות פובידון יוד. הנח את העכבר על פד רך וחם השומר על טמפרטורה של 37 to 38 °C כדי לשמר את טמפרטורת הגוף.
עקוב אחר העכבר עד שיחזור להכרה. לאחר התעוררות מלאה, שכן את העכבר באופן פרטני בכלוב עם גישה נאותה למזון ולמים. זמן ההישרדות החציוני של השתו Transplant בנקבלי BALB/c היה ארבעה ימים.
לעומת זאת, ברכיבים מסוג C57 Black 6, התקופה התארכה באופן משמעותי ל-6.5 ימים. בקבוצת ה-SD-to-BALB/c, צביעת המטוקסילין ואאוזין הראתה הרס מיקארדיאלי חמור עם דליפת תאי דם אדומים (erythrocyte extravasation) נרחבת. בקבוצת ה-SD-to-C57 Black 6, צביעת המטוקסילין ואאוזין הראתה נזק מיקארדיאלי שאופיין בעיקר בתסנינים דלקתיים.
בקבוצת SD-to-BALB/c, צביעה אימונופלואורסצנטית הראתה חדירה מינימלית של תאי T חיוביים ל-CD3, חדירה מינימלית של מקרופאגים חיוביים ל-CD68, והשקעה נרחבת ועוצמתית של C4D. בקבוצת SD-to-C57 Black 6, צביעה אימונופלואורסצנטית הראתה חדירה בולטת של תאי T חיוביים ל-CD3, נוכחות מתונה של מקרופאגים חיוביים ל-CD68, והשקעה מתונה של C4D. שיעור ההצלחה הממוצע היה 93.3% בקבוצת שלושת האנשים, בהשוואה ל-86.7% בקבוצת האדם הבודד.
האתגר המרכזי במתאם צוותי, תרגול רווחים, עיגול והבטחת הקמה מודרנית יציבה ומעוצבת. מחקרים עתידיים יוכלו להשתמש במודל סטנדרטי זה כדי לחקור מנגנונים אימונולוגיים של שיכ transplant (xenograft) ולהעריך טווחים תקינים של דיכוי חיסוני או השראת סובלנות.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מציג פיתוח של שני מודלים סטנדרטיים של קסנו-טרנספלנטציה בעכברים, שנועדו לדמות דחייה תאית חריפה (ACR) ודחייה חריפה המתווכת על ידי נוגדנים (AMR). מודלים אלו נותנים מענה למגבלות של מחקרים בבעלי חיים גדולים על ידי אספקת פלטפורמה הניתנת לשחזור, יעילה ומעשית לחקר מנגנוני דחייה חיסונית ולבחינת טיפולים אימונו-סופרסיביים במחקרי קסנו-טרנספלנטציה.
דחייה חריפה נותרת צוואר בקבוק קריטי בטרנספלנטציה קרוס-מינית (xenotransplantation), המעכבת את ההתקדמות התרגומית ואת פיתוח פורטפוליו הפתרונות. מודלים עכבריים סטנדרטיים לדחייה תאית חריפה ולדחייה המתווכת על ידי נוגדנים מספקים פלטפורמה ניתנת לשחזור ובקנה מידה רחב להפחתת סיכונים מכניסטיים ולהערכת אסטרטגיות של דיכוי חיסוני. גישה זו, המונעת על ידי זרימת עבודה (workflow), מאפשרת תיקוף של מטרות ברמת ביטחון גבוהה ומאיצה את קבלת ההחלטות הפרה-קליניות במחקר ופיתוח בתחום השתלות.&ד'.
מודל עכברי סטנדרטי זה מגשר בין שלבי הגילוי המוקדמים, זיהוי מועמדים (lead identification) ותיקוף פרה-קליני במחקרים של קסנו-טרנספלנטציה.