מחקר השוואתי על תכולת הפוליסכרידים ופעילויות נוגדות החמצון של Hippophae rhamnoides subsp. sinensis ו-Hippophae gyantsensis

מחקר זה משווה את תכולת הפוליסכרידים ואת הפעילות נוגדת החמצון בין Hippophae rhamnoides sub. sinensis ו-Hippophae gyantsensis כדי להבהיר את ההבדלים ביניהם. המחקר מבוסס מבחינה מתודולוגית, והוא מתייחס לפער בספרות לגבי הבדלים ספציפיים למינים במאפייני הפוליסכרידים.

ממצאי מחקר זה משמעותיים להערכת האיכות וליישומים התרופתיים הפוטנציאליים. כדי להתחיל, העבירו חמישה גרם של אבקת דגימת אשחר הים לבקבוק עם תחתית עגולה של 250 מיליליטר. לאחר מכן מוסיפים 50 מיליליטר אתנול נטול מים, ומשרים אותו בטמפרטורת החדר של 25 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.

למחרת, סנן את אבקת הדגימה הספוגה באמצעות משפך בוכנר כדי להשיג את שאריות המסנן. שוטפים את שאריות המסנן שלוש פעמים עם 50 מיליליטר מים נטולי יונים. כעת, העבירו את שאריות המסנן נטול השומן לבקבוק מיובש עם תחתית עגולה של 250 מיליליטר.

הוסף 150 מיליליטר מים נטולי יונים ביחס מוצק לנוזל של 1 עד 30 גרם למיליליטר. בצע מיצוי ריפלוקס באמבט מים בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס למשך שעתיים פעמיים. לאחר מכן רכזו את התמצית באמצעות מאייד סיבובי.

יש לאחסן את התמיסה המרוכזת במקרר בחום של ארבע מעלות צלזיוס לשימוש מאוחר יותר. לאחר מכן, הוסף מגיב Sevag לתמיסת הפוליסכריד הגולמית ביחס נפח אחד עד ארבעה והניח על מערבל מגנטי. לאחר מכן העבירו את התערובת לצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר.

צנטריפוגה את המתלה ב -4, 000 גרם למשך 15 דקות, ואוספים את הסופרנטנט. כדי לרכז את תמצית הפוליסכריד לאחר הסרת החלבון, הוסף אתנול נטול מים ביחס נפח של אחד לשלושה כדי לזרז פוליסכרידים. מניחים את התערובת על ארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה.

למחרת, הסר את שכבת האתנול העליונה. מעבירים את התערובת לצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר וצנטריפוגה כמו קודם. מקפיאים לייבש את המשקעים כדי להשיג פוליסכרידים כוללים.

מעבירים שלושה גרם פנול לבקבוק נפחי חום. הוסף 50 מיליליטר מים נטולי יונים כדי להמיס את הפנול. יש לנער עד לקבלת תערובת אחידה, ולאחר מכן לתייג ולאחסן את הבקבוק לשימוש מאוחר יותר.

לאחר מכן, העבירו 10 מיליגרם של גלוקוז נטול מים לבקבוק נפח של 10 מיליליטר. מוסיפים מים נטולי יונים ומנערים היטב את התערובת. לאחר מכן סמן את הבקבוק.

להכנת תמיסת דגימת הבדיקה, שקלו חמישה מיליגרם של פוליסכרידים מיובשים של אשחר הים בהקפאה לצלוחיות נפח. הוסף מים נטולי יונים כדי להביא כל אחד לנפח סופי של 50 מיליליטר. סוניקציה של כל תערובת למשך 20 דקות עד להמסה מלאה.

יש לדלל את תמיסת הגלוקוז הסטנדרטית במים נטולי יונים ל-0.1 מיליגרם למיליליטר. לאחר מכן באמצעות מיקרופיפטה העבירו 200, 300, 400, 500, 600 ו-700 מיקרוליטר לשש מבחנות נקיות. יש להוסיף מים טהורים כדי להגיע לנפח כולל של מיליליטר אחד, ולערבב בעדינות כל תמיסה כדי להבטיח דילול אחיד.

הוסף מיליליטר אחד של תמיסת פנול 6% וחמישה מיליליטר חומצה גופרתית לכל מבחנה וערבב היטב. מעבירים את הדגימות לקובטות. השתמש במים טהורים כריק ומדוד ספיגה ב-490 ננומטר עם ספקטרופוטומטר נראה UV בשלושה שכפולים.

לבדיקת הדיוק, הכינו את תמיסת הבדיקה. בצע קולורימטריה פנול-חומצה גופרתית. קבע את הספיגה וחזור שש פעמים כדי לחשב סטיית תקן יחסית.

לבדיקת היציבות, הכינו את תמיסת הבדיקה. בצע קולורימטריה באפס, שתיים, ארבע, שש, שמונה ועשר שעות לאחר ההכנה. קבע את הספיגה בנקודות הזמן הנ"ל כדי לחשב סטיית תקן יחסית.

לבדיקת החזרתיות, הכינו שישה שכפולים מקבילים של הדגימה. בצע קולורימטריה פנול-גופרתית, וקבע את הספיגה בהתאם לנוהל שנקבע. כדי לבצע את בדיקת ההתאוששות, הכן תשעה שכפולים מקבילים של פתרון הבדיקה.

הוסף נפחי ייחוס השווים ל- 80, 100 ו- 120% מהתוכן הכולל של רב-סוכרים. לאחר מכן בצע קולורימטריה של חומצה פנולית-גופרתית. לקביעת תוכן, הכן את הפתרון לדוגמה.

בצע קולורימטריה פנול-חומצה גופרתית לפי השיטה שנקבעה. ואז לקבוע את הספיגה. שקלו 2.7 מיליגרם DPPH לבקבוק נפח ריק של 50 מיליליטר.

הוסף 50 מיליליטר אתנול נטול מים כדי להמיס את ה- DPPH ולהכין תמיסת מלאי. לאחר מכן, ממיסים חמישה מיליגרם ויטמין C ב -10 מיליליטר מים נטולי יונים להכנת תמיסה של 0.5 מיליגרם למיליליטר. יש לדלל תמיסה זו ברציפות להכנת תמיסות בדיקה של ויטמין C.

כעת ממיסים חמישה מיליגרם מכל דגימת פוליסכריד של אשחר הים ב-10 מיליליטר של מים נטולי יונים להכנת תמיסה של 0.5 מיליגרם למיליליטר. לדלל את התמיסות הללו ברציפות כדי להשיג ריכוזי בדיקה. בעזרת תמיסת DPPH כמצע, הכינו את קבוצות הבדיקה בצלחת של 96 בארות.

הוסף 150 מיקרוליטר מים ו -50 מיקרוליטר DPPH לקבוצת הבקרה השלילית, A0. הוסף 150 מיקרוליטר מהדגימה או תמיסת ויטמין C ו-50 מיקרוליטר DPPH עבור קבוצת הדגימה A1. עבור קבוצת ביקורת דגימה A2, הוסף 150 מיקרוליטר של דגימה ו-50 מיקרוליטר של אתנול נטול מים. אפשר לתגובה להמשיך בחושך למשך 30 דקות. לאחר מכן מדוד את הספיגה ב-517 ננומטר.

העקומה הסטנדרטית של הגלוקוז הראתה קשר ליניארי חזק בין ספיגה וריכוז בטווח של 0.02 עד 0.07 מיליגרם למיליליטר. התפוקה הממוצעת של הפוליסכריד של Hippophae gyantsensis הייתה גבוהה משמעותית מזו של תת-המין Hippophae rhamnoides sinensis. בדיקת הדיוק הדגימה שונות מינימלית בספיגה על פני שש מדידות, ו-RSD של 0.21% המצביע על דיוק גבוה של המכשיר.

מבחן היציבות הראה שערכי הספיגה נשארו עקביים לאורך תקופה של 10 שעות, כאשר ערך RSD של 0.45% מאשר את יציבות תמיסת הדגימה. מבחן החזרתיות ייצר ערכי ספיגה עקביים על פני שישה שכפולים עם RSD של 0.5% המאמת את יכולת החזרה של השיטה. ניסוי ההתאוששות של תכולת הגלוקוז הניב שיעור התאוששות ממוצע של 99.18% המאשר את דיוק השיטה.

תכולת הפוליסכרידים הממוצעת של תת-המין Hippophae rhamnoides sinensis הייתה גבוהה משמעותית מזו של Hippophae gyantsensis. Hippophae gyantsensis הפגין פעילות נוגדת חמצון מעט גבוהה יותר מאשר תת-המין Hippophae rhamnoides sinensis בכל הריכוזים שנבדקו. ב-0.5 מיליגרם למיליליטר, שיעור פינוי ה-DPPH של Hippophae gyantsensis הגיע ל-81.93% ואילו תת-המין Hippophae rhamnoides sinensis הגיע ל-75.17%