Name: בידוד RNA מאפיתל עדשת עין של עכבר ומסות בתפזורת של תאי סיבים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: למדו לבודד RNA מאפיתל ומסות סיבים בעדשת עין עכבר. הפרוטוקול מדגים הפרדה נקייה של תאי עדשה לניתוח טרנסקריפטומי וזיהוי הבדלי ביטוי גנים בין סוגי התאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Lovicu, F. J., Robinson, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLovicu%2C+FJ+%22Development+of+the+Ocular+Lens%22">Development of the Ocular Lens</a>. , Cambridge University Press. (2004).</li>
<li>Bassnett, S., Winzenburger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+analysis+of+fibre+cell+growth+in+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric analysis of fibre cell growth in the developing chicken lens.</a> Exp Eye Res. 76 (3), 291-302 (2003).</li>
<li>Kuszak, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+epithelial+and+fiber+cells+in+the+crystalline+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of epithelial and fiber cells in the crystalline lens.</a> Int Rev Cytol. 163, 305-350 (1995).</li>
<li>Yamamoto, N., Majima, K., Marunouchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+the+proliferating+activity+in+lens+epithelium+and+the+identification+of+tissue-type+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mol+Morphol%22%5BJournal%5D)">A study of the proliferating activity in lens epithelium and the identification of tissue-type stem cells.</a> Med Mol Morphol. 41 (2), 83-91 (2008).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+organelle+degradation+in+the+vertebrate+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of organelle degradation in the vertebrate lens.</a> Exp Eye Res. 88 (2), 133-139 (2009).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+the+Golgi+apparatus+and+the+endoplasmic+reticulum+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The fate of the Golgi apparatus and the endoplasmic reticulum during lens fiber cell differentiation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (9), 1793-1803 (1995).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+organelle+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Lens organelle degradation.</a> Exp Eye Res. 74 (1), 1-6 (2002).</li>
<li>Bassnett, S., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coincident+loss+of+mitochondria+and+nuclei+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Coincident loss of mitochondria and nuclei during lens fiber cell differentiation.</a> Dev Dyn. 194 (2), 85-93 (1992).</li>
<li>Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+glass%3A+Structural+determinants+of+eye+lens+transparency%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Biological glass: Structural determinants of eye lens transparency.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 366 (1568), 1250-1264 (2011).</li>
<li>Vrensen, G. F., Graw, J., De Wolf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+breakdown+during+terminal+differentiation+of+primary+lens+fibres+in+mice%3A+A+transmission+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nuclear breakdown during terminal differentiation of primary lens fibres in mice: A transmission electron microscopic study.</a> Exp Eye Res. 52 (6), 647-659 (1991).</li>
<li>Counis, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nuclear+degradation+during+lens+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Analysis of nuclear degradation during lens cell differentiation.</a> Cell Death Differ. 5 (4), 251-261 (1998).</li>
<li>Piatigorsky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+differentiation+in+vertebrates.+A+review+of+cellular+and+molecular+features%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features.</a> Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).</li>
<li>Al-Khudari, S., Donohue, S. T., Al-Ghoul, W. M., Al-Ghoul, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+compaction+of+lens+fibers+affects+the+structure+and+optical+properties+of+rabbit+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Age-related compaction of lens fibers affects the structure and optical properties of rabbit lenses.</a> BMC Ophthalmol. 7, 19(2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22World+Report+on+Vision%22">World Report on Vision</a>. , World Health Organization. Geneva. (2019).</li>
<li>Hashemi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+prevalence+of+age-related+cataract%3A+A+comprehensive+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global and regional prevalence of age-related cataract: A comprehensive systematic review and meta-analysis.</a> Eye (Lond). 34 (8), 1357-1370 (2020).</li>
<li>Cheng, C., Gong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+roles+of+eph%2Fephrin+signaling+in+the+mouse+lens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Diverse roles of eph/ephrin signaling in the mouse lens.</a> PLoS One. 6 (11), e28147(2011).</li>
<li>Ibaraki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brighter+future+for+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A brighter future for cataract surgery.</a> Nat Med. 3 (9), 958-960 (1997).</li>
<li>Scullica, L., Grimes, P., Mcelvain, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+autoradiographic+studies+of+the+lens+epithelium.+Normal+and+x-irradiated+rat+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Further autoradiographic studies of the lens epithelium. Normal and x-irradiated rat eyes.</a> Arch Ophthalmol. 70, 659-665 (1963).</li>
<li>Caraguel, C. G., Stryhn, H., Gagne, N., Dohoo, I. R., Hammell, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+a+cutoff+value+for+real-time+polymerase+chain+reaction+results+to+fit+a+diagnostic+purpose%3A+Analytical+and+epidemiologic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Selection of a cutoff value for real-time polymerase chain reaction results to fit a diagnostic purpose: Analytical and epidemiologic approaches.</a> J Vet Diagn Invest. 23 (1), 2-15 (2011).</li>
<li>60/280 and 260/230 ratios. , Thermo Scientific. 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf</a> (2009).</li>
<li>Beyer, E. C., Kistler, J., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisera+directed+against+connexin43+peptides+react+with+a+43-kd+protein+localized+to+gap+junctions+in+myocardium+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Antisera directed against connexin43 peptides react with a 43-kd protein localized to gap junctions in myocardium and other tissues.</a> J Cell Biol. 108 (2), 595-605 (1989).</li>
<li>Gong, X., Cheng, C., Xia, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+in+lens+development+and+cataractogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexins in lens development and cataractogenesis.</a> J Membr Biol. 218 (1-3), 9-12 (2007).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+n-cadherin+linked+c-src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for n-cadherin linked c-src and fyn kinases in lens development.</a> Dev Dyn. 242 (5), 469-484 (2013).</li>
<li>Leonard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+n-cadherin+junctions+and+their+role+as+epicenters+of+differentiation-specific+actin+regulation+in+the+developing+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of n-cadherin junctions and their role as epicenters of differentiation-specific actin regulation in the developing lens.</a> Dev Biol. 349 (2), 363-377 (2011).</li>
<li>Logan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+regulates+signaling+mechanisms+required+for+lens+fiber+cell+elongation+and+lens+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">N-cadherin regulates signaling mechanisms required for lens fiber cell elongation and lens morphogenesis.</a> Dev Biol. 428 (1), 118-134 (2017).</li>
<li>Maddala, R., Nagendran, T., Lang, R. A., Morozov, A., Rao, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rap1+gtpase+is+required+for+mouse+lens+epithelial+maintenance+and+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Rap1 gtpase is required for mouse lens epithelial maintenance and morphogenesis.</a> Dev Biol. 406 (1), 74-91 (2015).</li>
<li>Parreno, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodologies+to+unlock+the+molecular+expression+and+cellular+structure+of+ocular+lens+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Methodologies to unlock the molecular expression and cellular structure of ocular lens epithelial cells.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 983178(2022).</li>
<li>Paul, D. L., Ebihara, L., Takemoto, L. J., Swenson, K. I., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin46%2C+a+novel+lens+gap+junction+protein%2C+induces+voltage-gated+currents+in+nonjunctional+plasma+membrane+of+xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin46, a novel lens gap junction protein, induces voltage-gated currents in nonjunctional plasma membrane of xenopus oocytes.</a> J Cell Biol. 115 (4), 1077-1089 (1991).</li>
<li>Rong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+gja8+%28alpha8+connexin%29+in+mice+leads+to+microphthalmia+associated+with+retardation+of+lens+growth+and+lens+fiber+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Disruption of gja8 (alpha8 connexin) in mice leads to microphthalmia associated with retardation of lens growth and lens fiber maturation.</a> Development. 129 (1), 167-174 (2002).</li>
<li>Terrell, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+mouse+lens+epithelial+cell+lines+and+their+suitability+to+study+RNA+granules+and+cataract+associated+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of mouse lens epithelial cell lines and their suitability to study RNA granules and cataract associated genes.</a> Exp Eye Res. 131, 42-55 (2015).</li>
<li>White, T. W., Bruzzone, R., Goodenough, D. A., Paul, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cx50%2C+a+functional+member+of+the+connexin+family+of+gap+junction+proteins%2C+is+the+lens+fiber+protein+mp70%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mouse cx50, a functional member of the connexin family of gap junction proteins, is the lens fiber protein mp70.</a> Molecular Biology of the Cell. 3 (7), 711-720 (1992).</li>
<li>Xia, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+cell+clusters+and+upregulated+Aqp1+in+connexin+50+knockout+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Altered cell clusters and upregulated Aqp1 in connexin 50 knockout lens epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (11), 27(2024).</li>
<li>Beyer, E. C., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin43%3A+A+protein+from+rat+heart+homologous+to+a+gap+junction+protein+from+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin43: A protein from rat heart homologous to a gap junction protein from liver.</a> J Cell Biol. 105 (6 Pt 1), 2621-2629 (1987).</li>
<li>Gong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Alpha3+connexin+gene+leads+to+proteolysis+and+cataractogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Disruption of Alpha3 connexin gene leads to proteolysis and cataractogenesis in mice.</a> Cell. 91 (6), 833-843 (1997).</li>
<li>Xu, L., Overbeek, P. A., Reneker, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+E-%2C+N-+and+P-cadherin+expression+in+mouse+eye+development%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of E-, N- and P-cadherin expression in mouse eye development.</a> Exp Eye Res. 74 (6), 753-760 (2002).</li>
<li>Nishina, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax6+expression+in+the+developing+human+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pax6 expression in the developing human eye.</a> Br J Ophthalmol. 83 (6), 723-727 (1999).</li>
<li>Wistow, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamman-crystallin+and+the+evolution+of+the+betagamma-crystallin+superfamily+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Gamman-crystallin and the evolution of the betagamma-crystallin superfamily in vertebrates.</a> FEBS J. 272 (9), 2276-2291 (2005).</li>
<li>Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue%2C+cellular%2C+and+molecular+level+determinants+for+eye+lens+stiffness+and+elasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Tissue, cellular, and molecular level determinants for eye lens stiffness and elasticity.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1456474(2024).</li>
<li>Huynh, P. N., Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial-temporal+comparison+of+eph%2Fephrin+gene+expression+in+ocular+lenses+from+aging+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Spatial-temporal comparison of eph/ephrin gene expression in ocular lenses from aging and knockout mice.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1410860(2024).</li>
<li>Zelenka, P. S., Gao, C. Y., Saravanamuthu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+culture+of+rat+lens+epithelial+explants+for+studying+terminal+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation and culture of rat lens epithelial explants for studying terminal differentiation.</a> J Vis Exp. (31), e1519(2009).</li>
</ol>

עדשת העין היא איבר שקוף הממקד את האור בעדינות על הרשתית כדי לייצר תמונה ברורה. העדשה מורכבת משני סוגי תאים עיקריים: שכבה אחת של תאי אפיתל שמכסים את חצי הכדור הקדמי ותאי סיבים שמרכיבים את המסה העיקרית של הרקמה (איור 1). העדשה עטופה בקרום בסיס קולגני המכונה קפסולת העדשה, שאליה דבוקים היטב תאי אפיתל. ככל שהעדשה גדלה, תאי אפיתל בקו המשווה מתרבים ומתמיינים לקליפות מתפתחות של תאי סיבים המונחים על העדשה בצורה קונצנטרית 1,2,3. צמיחת עדשות לכל החיים תלויה בריבוי מתמשך של אוכלוסייה קטנה זו של תאי אפיתל משווניים המרכיבים את אזור הנביטה4. כאשר תאי הסיבים מתבגרים, כל אברוני התא מתפרקים כדי לחסל אובייקטים המפזרים אור 5,6,7,8,9,10,11 ולשמור על שקיפות הרקמה, ותאי הסיבים הפנימיים ביותר נדחסים בסופו של דבר, וכתוצאה מכך מרכז עדשה קשיח 9,12. בשל קפסולת העדשה שמסביב, אין תחלופת תאים בעדשה, וסיבי הזרע נשארים במרכז העדשה לאורך כל החיים כאשר סיבים חדשים מתווספים בפריפריה של הרקמה או בקליפת המוח. לתאי הסיבים של העדשה יש תכונות אופטיות שונות בהתאם לגילם ויכולים לספק תמונת מצב זמנית של המאפיינים הביולוגיים המשתנים בכל שלבנתון 13.
למרות האפשרויות הניתוחיות הזמינות, קטרקט, המוגדר כאטימות כלשהי בעדשה השקופה בדרך כלל, נותר הגורם המוביל לעיוורון בעולם14. קטרקט יכול להתבטא באפיתל העדשה, בקליפת המוח או בגרעין עם פתופיזיולוגיות שונות15. עם זאת, המנגנונים התאיים והמולקולריים של היווצרות קטרקט נותרו לא ברורים16,17. כדי להבין טוב יותר כיצד למנוע סוגים שונים אלה של קטרקט ולפתח חלופות לניתוח, עלינו להבין טוב יותר כיצד סוגי התאים השונים האלה שומרים על ההומאוסטזיס שלהם בעדשה.
תאי האפיתל והסיבים ממלאים תפקידים פיזיולוגיים שונים בעדשה. התפשטות התאים, למשל, מוגבלת לאפיתל העדשה18. בינתיים, סיבי העדשה מהווים את המסה העיקרית של העדשה, ומספקים מבנה ותכונות שבירה לעדשה9. כדי לקבל פרספקטיבה ניואנסית יותר של התהליכים הביולוגיים המעורבים בתאים השונים של העדשה, יש לחקור בנפרד תאי אפיתל וסיבים. כאן, אנו מציגים שיטה לבודד את האפיתל ממסת התפזורת של תא הסיבים, לחלץ mRNA מכל שבר, ולנתח את התעתיקים הללו באמצעות תגובת שרשרת פולימראז כמותית של שעתוק הפוך (RT-qPCR).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69079/69079fig1.jpg"> 
איור 1: דיאגרמת אנטומיה של עדשה. העדשה מורכבת משני סוגי תאים, תאי אפיתל חד-שכבתיים (כחול וכתום) המכסים את חצי הכדור הקדמי ומסה גדולה של סיבי עדשה (לבן). הרקמה מוקפת בקרום קולגני דק, המכונה קפסולת העדשה (שזוף). תאי אפיתל קדמיים (כחול) שקטים בעוד שתאי אפיתל משווניים (כתום) מתרבים, מתמיינים ומתארכים והופכים לשכבות חדשות של תאי סיבים (לבנים) בהיקף העדשה. דורות חדשים של תאי סיבים מונחים על דורות קודמים של סיבים בקליפות קונצנטריות. תאי סיבי העדשה העתיקים ביותר נדחסים למרכז הרקמה. נתון זה שונה מ-Cheng (2024)38. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69079/69079fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<table><tbody><tr><td>צנטריפוגה ורוטור</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14285554אחה"צ</td><td></td></tr><tr><td>כלורופורם, דרגת HPLC</td><td>אלפא אסאר</td><td>22920</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (190 הוכחה)</td><td>מעבדות דקון</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>אתנול (200 הוכחה)</td><td>פישר ביו-ריאגנטים</td><td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>פישרברנד גלולה עלי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-141-363</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים, מעוקלים; פינצטה לסטודנטים #7</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501981</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים, ישר; דומונט #5</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11252-40</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים, ישר; פינצטה לסטודנטים #4</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501978</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes, קטן</td><td>קימברלי-קלארק</td><td>34155</td><td>ניגוב משימות עדין</td></tr><tr><td>מוליך סרט דבק MicroAmp</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>4333183</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate אופטי 96 באר צלחת תגובה מהירה וברורה עם ברקוד</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>4483485</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטורים</td><td>אפנדורף</td><td>&nbsp; 01-671-120</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ, דיסקציה</td><td>קרל זייס</td><td>SteREO Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי דבק אופטי MiniAmp</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>MiniAmp תרמי Cycler</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>א37834</td><td></td></tr><tr><td>מערבולת צלחות MixMate</td><td>אפנדורף</td><td>5353000529</td><td></td></tr><tr><td>מים בדרגה מולקולרית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP28191</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר Nanodrop One Microvolume UV-Vis</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>ND-אחד-W</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell MiniTrays</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-565-154</td><td>מגש חיתוך</td></tr><tr><td>צינורות PCR</td><td>VWR</td><td>201007-012</td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי, 60 מ"מ על 15 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח חומצה פוספט, 1x Dulbecco's</td><td>ג'יבקו</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטות, 10 ומיקרו; L בוגר</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1161-3700</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה, 1250 ומיקרו; L XL בוגר</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1161-1720</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה, 200 ומיקרו; L פרופיל בוגר</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1163-1700</td><td></td></tr><tr><td>מערכת PCR בזמן אמת QuantStudio 3</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>A28567</td><td></td></tr><tr><td>Reverse Transcriptase, SuperScript IV VILO&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>11756050</td><td>טרנסקריפטאז הפוך תהליכי ויציב בחום</td></tr><tr><td>ערכת RNA ניקוי ורכז 5</td><td>זימו</td><td>ZR1013</td><td></td></tr><tr><td>מים ללא RNase</td><td>פישר ביו-ריאגנטים</td><td>BP2819</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>סיגמא</td><td>₪2020</td><td>פתרון טיהור RNase</td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה של SealRite 1.5 מ"ל</td><td>ארה"ב סיינטיפיק</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>SuperFine Vannas 8 ס"מ</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501778</td><td>מספריים</td></tr><tr><td>TaqMan FAST Advanced Master Mix עבור qPCR</td><td>אפלייד ביוסיסטמס</td><td>4444557</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת ביטוי גנים של TaqMan (FAM) (MTO)</td><td>תרמו-פישר סיינטיפיק</td><td>4448892</td><td></td></tr><tr><td>טריזול</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td>תמיסת חומצה-גואנידיניום-פנול</td></tr><tr><td>מערבל מערבולת</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>88880017</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד rna מאפיתל עדשת עין של עכבר ומסות בתפזורת של תאי סיבים

RNA Isolation from Mouse Ocular Lens Epithelium and Fiber Cell Bulk Masses

אפיתל העדשה וסיבי העדשה בודדו מעכברים פראיים בני 6 עד 7 שבועות. שלושה עכברים שימשו לניסויים אלה, ו-2 קפסולות עדשות או 2 מסות תאי סיבים מכל עכבר נאספו יחד לשכפול ביולוגי אחד. כפי שמתואר בפרוטוקול, RNA חולץ באמצעות הפרדת פאזה של מגיב TRIzol. בממוצע, זוג אפיתל עדשה ומסות סיבים בתפזורת הניבו 0.8 מיקרוגרם (SD ± 0.2) ו-9.7 מיקרוגרם (SD ± 2.3) של RNA, בהתאמה. הריכוז הממוצע בפליטה של 15 מיקרוליטר היה 55.4 ננוגרם/מיקרוליטר (SD ± 16.3) ו-650.0 ננוגרם/מיקרוליטר (SD ± 152.2) עבור דגימות האפיתל והסיבים, בהתאמה. באמצעות תגובות של 5 ננ...

בידוד RNA מאפיתל עדשת עין של עכבר ומסות בתפזורת של תאי סיבים

The lens is a specialized, transparent tissue in the anterior chamber of the eye that is comprised of two major cell types, epithelial cells and fiber ...

rna-isolation-from-mouse-ocular-lens-epithelium-fiber-cell-bulk

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור microdissection לכידה לייזר לשחזור (LCM) לבידוד meshwork trabecular (TM) לניתוח RNA במורד הזרם. היכולת לנתח שינויים בביטוי הגנים ב ה-TM יעזור להבין את המנגנונים המולקולריים שבבסיס של מחלות עינית הקשורות TM.

לייזר Microdissection לכידה של מאוד טהור Meshwork Trabecular מעיני העכבר עבור ניתוח ביטוי גנטי

בלוטת lacrimal (LG) יש שני סוגי תאים המבטא α-השריר החלקה אקטין (αSMA): מיואפיתל תאים (mecs) ו קרום הלב. MECs הם של מוצא העורי, נמצא ברקמות הבלוטות רבות, בעוד קרום הלב הם תאים שריר וסקולריים חלקה של מקור אנדועורי. פרוטוקול זה מבודד מנות וכלי קרום.

בידוד של תאים מיואפיתל מתוך למבוגרים מורנה לקטמל בלוטות הלסת

פרוטוקול זה מתאר שיטות להכנת תאי סיבי עדשת עין היקפיים, בוגרים וגרעיניים לצביעת אימונופלואורסנציה כדי לחקור אינטרדיגיטציות מורכבות בין תאים ואת ארכיטקטורת הממברנה.

הכנה וצביעה אימונופלואורסצנטית של צרורות ותאי סיבים בודדים מקליפת המוח וגרעין עדשת העין

כתב יד זה מתאר פרוטוקול וידאו מפורט לגידול תאי אפיתל ראשוניים של עדשה (LECs), במטרה לשפר את יכולת השחזור ולסייע במחקר בקטרקט ובפסיפיקציה של קפסולה אחורית (PCO). הוא מציע הוראות שלב אחר שלב על דיסקציה של עדשות, בידוד LECs ותיקוף, ומשמש כמדריך רב ערך, במיוחד עבור מצטרפים חדשים בתחום.

אופטימיזציה של תרבית תאי אפיתל בעדשה הראשית של עכבר: מדריך מקיף לטריפסיניזציה

הפרוטוקולים הנוכחיים מתארים הדמיה חדשה של הר שלם להדמיית מבנים היקפיים בעדשת העין עם שיטות לכימות תמונה. פרוטוקולים אלה יכולים לשמש במחקרים כדי להבין טוב יותר את הקשר בין מבנים מיקרוסקולריים של עדשה לבין התפתחות/תפקוד עדשה.

הדמיה של תושבת שלמה כדי להמחיש ולכמת את מבנה העדשה ההיקפית, המורפולוגיה של התא והארגון

כתב יד זה מתאר פרוטוקול מפורט לבידוד תאי גליית הרשתית מעיני עכבר. הפרוטוקול מתחיל באינקולציה ודיסקציה של עיני עכבר, ואחריו בידוד, זריעה וטיפוח של תאי מולר.

בידוד תאי גליית גליה ראשוניים ברשתית העכבר

אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) פועל כמחסום מכריע בין הכורואיד לרשתית, ומקדם את בריאותם ותפקודם של סוגי תאי רשתית, כגון פוטורצפטורים. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול פשוט ויעיל לבידוד וטיפוח RPE של מורין בוגר.

שיטה פשוטה לבידוד ותרבית של תאי אפיתל פיגמנט ברשתית מעכברים בוגרים

לאחרונה זיהינו התקשות נימי רשתית כפרדיגמה חדשה לתפקוד לקוי של הרשתית הקשור לסוכרת. פרוטוקול זה מפרט את השלבים לבידוד נימי הרשתית של עכבר והמטריצה התת-אנדותלית מתרביות אנדותל ברשתית, ולאחר מכן תיאור של טכניקת מדידת הנוקשות באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי.

בידוד נימי רשתית עכבר ומטריצת תת-אנדותל למדידת נוקשות באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

הרשתית מציגה ארגון מרחבי מורכב על פני המבנה הלמינרי שלה. טכניקות מודרניות של טרנסקריפטומיקה מרחבית וריצוף דורשות קטעי רקמה בעובי &lt; 20 מיקרומטר, מה שמגביל את תחולת מחקר הרשתית. שיטת הקפאה טרייה זו מייצרת קטעי פנים דקים של רשתית העכבר תוך שמירה על יחסים מרחביים מישוריים, ומאפשרת מיפוי מולקולרי מקיף על פני הלמינות.

פנים פנים הקפאה של רשתית עכבר לניתוח מרחבי מרחבי בממדים גבוהים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשגת תליות חד-תאיות איכותיות מקרניות עכבר שלמות באמצעות עיכול רציף עם קולגנאז A וטריפסין. שיטה זו מניבה תאים בודדים ברי קיימא עם שלמות RNA גבוהה, מה שהופך אותם לתואמים ליישומים בהמשך כמו ריצוף RNA חד-תאי וציטומטרי זרימהy.

פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים

למדו לבודד RNA מאפיתל ומסות סיבים בעדשת עין עכבר. הפרוטוקול מדגים הפרדה נקייה של תאי עדשה לניתוח טרנסקריפטומי וזיהוי הבדלי ביטוי גנים בין סוגי התאים.

בידוד RNA מאפיתל עדשת עין של עכבר ומסות בתפזורת של תאי סיבים

גלה סרטונים נוספים