Name: דיסקציה של שרירי טיסה עקיפים של Drosophila melanogaster לגישות מיקרוסקופיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: למד פרוטוקולי ניתוח מתקדמים לשרירי טיסה עקיפים ב-Drosophila melanogaster. השיטה מאפשרת ניתוח מיקרוסקופי של מורפולוגיית שריר ולוקליזציית חלבונים במהלך מיוגנזה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>צלחות תרבית רקמה בגודל 60 מ"מ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>FB012921</td><td>60 מ"מ, פוליסטירן</td></tr><tr><td>חומצה אצטית, קרחוניות (ACS מוסמך)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>אדנוזין טריפוספט (ATP)</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>נייר אלומיניום, עמידה כבדה</td><td>אמזון</td><td></td><td>12 אינץ'. x 1000 רגל.</td></tr><tr><td>כלים לניתוח סיליקון שחור: אבקת פחם פעיל</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>C9157</td><td>זמין גם ברוב בתי המרקחת</td></tr><tr><td>כלים לניתוח סיליקון שחור: סילגארד 184</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>761036</td><td>כדי להכין כלים לניתוח סיליקון, ערבבו את רכיבי סילגארד בשקית זיפלוק וערבבו היטב. מוסיפים אבקת פחם פעילה (~200 מ"ג) לסילגארד (~50 גרם), מערבבים היטב, חתכו את פינת השקית, ממלאים כלים של 60 מ"מ לתרב, הסרו בועות עם קצה פיפטה, והתקבשו כל הלילה.</td></tr><tr><td>מגש שקופיות מקרטון, Research Products International Corp</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי, ניקון AXR קונפוקלי הפוך</td><td>ניקון</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי, Zeiss LSM 780 קונפוקלי הפוך</td><td>צייס</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>תא גידול חרקים דרווין (אינקובטור)</td><td>פישר סיינטיפיק/דארווין צ'יימברס</td><td>IN034</td><td>מדגם מבוקר אור, טמפרטורה ולחות</td></tr><tr><td>צלחת ניתוח (זכוכית שחורה)</td><td>מיקרוסקופ טכניק דיטהלם</td><td>398011</td><td>לימפבקן (קערות צביעה/מיכלי לימפה), זכוכית שחורה, בגודל 4x4 ס"מ, עם כיסוי זכוכית שקוף</td></tr><tr><td>מלקחי דומון #3</td><td>כלי המדע המדויק</td><td>11231-30</td><td>קצה דומוקסל ישר באורך 12 ס"מ עם קצה 0.17 x 0.1 מ"מ;</td></tr><tr><td>דומונט #5 מלקחיים</td><td>כלי המדע המדויק</td><td>11252-20</td><td>קצה ישר של אינוקס 11 ס"מ, מלקחיים בדרגת ביולוגיה עם קצה 0.05 x 0.02 מ"מ;</td></tr><tr><td>EGTA (חומצה אגטאזית)</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט (200 proof)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP28184</td><td>ציון ביולוגיה מולקולרית</td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי פרימיום של פישרברנד (18 x 18 מ"מ), כיסויי כיסוי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12548A</td><td>זכוכית, ריבוע, עובי #1 (0.13 - 0.16 מ"מ)</td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי פרימיום של פישרברנד (22 x 22 מ"מ), כיסויי כיסוי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12548B</td><td>זכוכית, ריבוע, עובי #1 (0.13 - 0.16 מ"מ)</td></tr><tr><td>לוחות תרבית תאים שטוחים (24 בארים)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ ניתוח פלואורסצנטי, מצלמת Infinity8</td><td>טלדיין (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 מגה-פיקסל, תאורה נמוכה, מונוכרומטית</td></tr><tr><td>זבוב: Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>בעלי זבוב; מתנת גרגורי מאטרה</td></tr><tr><td>זבוב: w[1118]</td><td>מרכז המלאי בלומינגטון</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>סטוק זבובים</td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>BP229-1</td><td>ציון ביולוגיה מולקולרית</td></tr><tr><td>תמיסת גליאוקסל (40% משקל ב-H2O)</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>128465</td><td>&nbsp; זו תמיסת 40% סטוק</td></tr><tr><td>תוכנת עיבוד תמונה, Affinity Designer 2</td><td>זיקה</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>תוכנת עיבוד תמונה, Image J (פיג'י)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>סיכות לחרקים</td><td>כלי המדע המדויק</td><td>26002-10</td><td>פלדת אל-חלד, קוטר 0.1 מ"מ (פינים קטנים)</td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד (MgCl2)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>מתנול (HPLC)</td><td>פישר כימיקל (פישר סיינטיפיק)</td><td>A452-4</td><td>להירגע ב-20- ? לפני השימוש</td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ, מטושטשות</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-400</td><td>שטח כתיבה, לא טעון, 75 מ"מ x 25 מ"מ x 1 מ"מ</td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ, זכוכית פשוטה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-544-4</td><td>נקי מראש, 75 מ"מ x 25 מ"מ</td></tr><tr><td>להבי MX35 אולטרה מיקרוטום</td><td>אפרדיה (פישר סיינטיפיק)</td><td>3053835</td><td>פרופיל נמוך, 34 מעלות; זווית חיתוך; להבי נוצות C35 בגודל 80 מ"מ עובדים טוב</td></tr><tr><td>לק לציפורניים, שקוף (Sally Hansen Xtreme Wear Nail Polish)</td><td>אמזון</td><td></td><td>0.4 אונקיות נוזליות.</td></tr><tr><td>סרום עזים רגיל</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>S26 ליטר</td><td></td></tr><tr><td>נוטייטור (מיני נואטינג רוקר, בנצ'מרק)</td><td>מדעי המידווסט</td><td>H3D1020</td><td>24 סל"ד, קבוע; 8 x 6 אינץ'. פלטפורמה עם שטיח עם גומות</td></tr><tr><td>מברשת צבע (סיבוב מס' 0)</td><td>אמזון</td><td></td><td>מכחול עגול מס' 0 או מכחול דומה מכל ציוד אמנות</td></tr><tr><td>פאראפורמלדהיד (PFA)</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>סליין מפוזר עם זרחן (PBS): KCl</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>529552-250GM</td><td>הכינו PBS לפי Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>סליין עם בופר פוספט (PBS): KH2PO4</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>P0662-500G</td><td>הכינו PBS לפי Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>סליין עם בופר זרחן (PBS): Na2HPO4</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>S9763-500G</td><td>הכינו PBS לפי Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>מלח מופעל פוספט (PBS): NaCl</td><td>פישר כימיקל (פישר סיינטיפיק)</td><td>S271-1</td><td>הכינו PBS לפי Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>טיפים לפיפטה PR1MA (10 ומיקרו; L)</td><td>מדעי המידווסט</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>יוניברסל 10 ומיקרו; קצות פיפטה L</td></tr><tr><td>טיפים של פיפט PR1MA (1000 ומיקרו; L)</td><td>מדעי המידווסט</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>יוניברסל 1000 ומיקרו; קצות פיפטה L</td></tr><tr><td>טיפים של PR1MA Pipette (200 ומיקרו; L)</td><td>מדעי המידווסט</td><td>PR-200RK-NS</td><td>יוניברסל 200 ומיקרו; קצות פיפטה L</td></tr><tr><td>רודמין-פאלואידין</td><td>Invitrogen, גשושיות מולקולריות</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>סרט דבק דו-צדדי סקוטי</td><td>סקוטש/3M (סטייפלס)</td><td>649280</td><td>שני הצדדים מצופים בדבק, בגודל 0.5" x 7 יארד, זמין ברוב מפעילי ציוד משרדי</td></tr><tr><td>נתרן די-הידרוגן פוספט דיהידרט (NaH2PO4)</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>תוכנה: GraphPad Prism</td><td>פריזמת GraphPad</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>תוכנה: Infinity Analyze 7</td><td>טלדיין (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>תוכנה: Microscoft Excel</td><td>מיקרוסופט</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>טישו/Kimtech Science Kimwipes למגבים עדינים למשימות, שכבה אחת</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>06-666</td><td>מגבוני טישו סטנדרטיים</td></tr><tr><td>פיפטת העברה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-711-9AMMD</td><td>פיפטה מפלסטיק</td></tr><tr><td>טרישן X-100</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיץ של ואנאס</td><td>כלי המדע המדויק</td><td>15000-00</td><td>קצה חיתוך 3 מ"מ, קוטר קצה 0.05 מ"מ, אורך 8 ס"מ</td></tr><tr><td>Vectashield עם DAPI</td><td>מעבדות וקטור</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield ללא DAPI</td><td>מעבדות וקטור</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>נייר ווטמן</td><td>מיליפור סיגמא</td><td>WHA1004070</td><td>מעגלי נייר סינון, דרגה 4, 70 מ"מ</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקיטינג סטריאו פלואורסצנטי Z10</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ניתוח סטריאו ארגונומי Z850</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

דיסקציה של שרירי טיסה עקיפים של drosophila melanogaster לגישות מיקרוסקופיות

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

דיסקציה של שרירי טיסה עקיפים של Drosophila melanogaster לגישות מיקרוסקופיות

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

dissection-drosophila-melanogaster-indirect-flight-muscles-for

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מדגים כיצד...

תסיסנית הזחל Dissection NMJ

זיהוי המנגנונים נזק לשרירים הוא קריטי. כאן אנו מציגים את הטכניקה היסטולוגית להכנת פרפין משובצים ו קפוא קטעי תסיסנית שרירי החזה. זה מאפשר ניתוח של מורפולוגיה שרירים לוקליזציה של חלבונים אחרים בתא השריר המרכיבים.

מדורים פרפין-Embedded קפואים של תסיסנית סקס שרירים

Dissection והדמיה של אזורי פעיל תסיסנית Neuromuscular צומת

שרירי התעופה של דרוזופילה משמשים כמערכת מודל להתפתחות שרירים ופיזיולוגיה. סרטון זה מתאר את שרירי התעופה של מבוגרים ומדגיש פרוטוקול לניתוח שרירי טיסה עקיפים מתפתחים המתאימים לריצוף RNA מגלמים.

דרוזופילה דיסקציה מאוחרת של שריר התעופה העקיפה של הגלמים (IFM): שיטה לאיסוף רקמות בתפוקה גבוהה

סרטון זה מדגים פרוטוקול להערכת השלמות המבנית של צמתים עצביים-שריריים בשרירי האורך הגביים של דרוזופילה. ההליך כולל צביעת נוירונים ושרירים בשני נוגדנים נפרדים והשוואת דפוסי פלואורסצנטיות בין זבובים מוטנטיים לזבובי בר. הפחתה בכתמים עצביים בזבובים מוטנטיים מצביעה על ניוון עצבי, בעוד מבנה השריר נשאר שלם.

הערכת השלמות המבנית של הצמתים העצביים-שריריים האורכיים הגביים בדרוזופילה

מחקרים של המורפוגנזה העצבית באמצעות arborization הדנדריטים הזחל תסיסנית (da) נוירונים ליהנות להדמיה באתרו של חלבונים עצביים ו אפידרמיס על ידי immunofluorescence. אנו מתארים הליך המשפר ניתוח immunofluorescence של דה נוירונים ותאי אפידרמיס סביב על ידי הסרת רקמת שריר מקיר גוף הזחל.

הסרה של<em&gt; תסיסנית</em&gt; רקמת שריר מן הזחל פילה עבור ניתוח Immunofluorescence של עצב סנסורי ותאי עוריות

. מדווחים שיטה לכמת שרירים באזור, אשר היא שיטה עקיפה כדי לקבוע את מסת השרירים במבוגרים דרוזופילה . נדגים היישום של המתודולוגיה שלנו על-ידי ניתוח הטיסה עקיף השרירים במודל דרוזופילה ממחלת ניוון שרירים חולים Myotonic.

קביעת אזור שרירים חתך הרוחב אופטי שרירי תעופה עקיף למבוגרים דרוזופילה Melanogaster

דרוזוהילה שריר הטיסה הוא מודל רב-עוצמה לחקר רגולציה משלימה, שחבור חלופיים, חילוף חומרים ומכניאולוגיה. אנו מציגים פרוטוקול לניתוח שריר הטיסה המסומן באמצעות פלורסנט מן הגלמים החיים כדי ליצור דגימות מועשר מאוד אידיאלי עבור פרוטאומוניקס וברצף עמוק. דגימות אלה יכולות להציע תובנות מכניסטיות חשובות להיבטים מגוונים של פיתוח שרירים.

חיתוך של דרוזופילה מלאנוסטר שרירי הטיסה לגישות omics

פרוטוקול מוצג המאפשר הדמיה של Drosophila melanogaster שלם בכל שלב של פיתוח באמצעות טומוגרפיה מיקרו מחשב.

הדמיה חיה שלמה של Drosophila melanogaster באמצעות טומוגרפיה מיקרו-מחשבתית

דוח זה מספק הליך הכנת מדגם חדש להדמיית צמתים עצביים-שריריים בזחלי דרוזופילה . שיטה זו יעילה יותר במניעת סלסול הדגימות בהשוואה לשיטה המסורתית והיא שימושית במיוחד עבור Drosophila neuromuscular junction ultrastructural analysis.

אופטימיזציה של תהליך הכנת הדגימה להעברת מיקרוסקופ אלקטרונים של צמתים עצביים-שריריים בזחלי דרוזופילה

דרוזופילה היא מודל מבוסס היטב לחקר מולקולות מפתח המווסתות מיוגנזה. עם זאת, השיטות הנוכחיות אינן מספיקות כדי לקבוע דינמיקת שעתוק mRNA והתפלגות מרחבית בתוך סינציטיה. כדי להתמודד עם מגבלה זו, ביצענו אופטימיזציה של שיטת הכלאה פלואורסצנטית באתרה של RNA המאפשרת זיהוי וכימות של mRNA בקנה מידה של מולקולה אחת.

חקר דינמיקת שעתוק שרירים בסקאלות של מולקולות בודדות בדרוזופילה

למד פרוטוקולי ניתוח מתקדמים לשרירי טיסה עקיפים ב-Drosophila melanogaster. השיטה מאפשרת ניתוח מיקרוסקופי של מורפולוגיית שריר ולוקליזציית חלבונים במהלך מיוגנזה.

דיסקציה של שרירי טיסה עקיפים של Drosophila melanogaster לגישות מיקרוסקופיות

גלה סרטונים נוספים