Name: הערכת דינמיקת ביקוע/היתוך מיטוכונדריאלית בתאים צינוריים פרוקסימליים בכליה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: למדו להעריך דינמיקת ביקוע והיתוך מיטוכונדריאלית בתאים צינוריים פרוקסימליים בכליה באמצעות מיקרוסקופיית קונפוקל ו-Dendra2. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר מיטוכונדריות מושתלות ואינטגרציה בתאים מקבלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Liesa, M., Palacin, M., Zorzano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+in+mammalian+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics in mammalian health and disease.</a> Physiol Rev. 89 (3), 799-845 (2009).</li>
<li>Chen, Z., Berquez, M., Luciani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria%2C+mitophagy%2C+and+metabolic+disease%3A+towards+assembling+the+puzzle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress%22%5BJournal%5D)">Mitochondria, mitophagy, and metabolic disease: towards assembling the puzzle.</a> Cell Stress. 4 (6), 147-150 (2020).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+segmentation+and+function+prediction+in+live-cell+images+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial segmentation and function prediction in live-cell images with deep learning.</a> Nat Commun. 16, 743(2025).</li>
<li>Jiao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitocytosis%2C+a+migrasome-mediated+mitochondrial+quality-control+process%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mitocytosis, a migrasome-mediated mitochondrial quality-control process.</a> Cell. 184 (11), 2896-2910.e13 (2021).</li>
<li>Kraus, F., Roy, K., Pucadyil, T. J., Ryan, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+regulation+of+the+divisome+for+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Function and regulation of the divisome for mitochondrial fission.</a> Nature. 590 (7844), 57-66 (2021).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GTPBP8+modulates+mitochondrial+fission+through+a+Drp1-dependent+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">GTPBP8 modulates mitochondrial fission through a Drp1-dependent process.</a> J Cell Sci. 137 (8), jcs261612(2024).</li>
<li>San-Millán, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+key+role+of+mitochondrial+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants%22%5BJournal%5D)">The key role of mitochondrial function in health and disease.</a> Antioxidants. 12 (4), 782(2023).</li>
<li>Ponte, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drp1-mediated+mitochondrial+fission+regulates+calcium+and+F-actin+dynamics+during+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Drp1-mediated mitochondrial fission regulates calcium and F-actin dynamics during wound healing.</a> Biol Open. 9 (5), bio048629(2020).</li>
<li>Sabouny, R., Shutt, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondrial+dynamics+in+mtDNA+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondrial dynamics in mtDNA maintenance.</a> J Cell Sci. 134 (24), jcs258944(2021).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+tracking+with+two-photon+phosphorescent+terpyridyl+iridium%28III%29+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics tracking with two-photon phosphorescent terpyridyl iridium(III) complexes.</a> Sci Rep. 6, 20887(2016).</li>
<li>Chen, W., Zhao, H., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+in+health+and+disease%3A+mechanisms+and+potential+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics in health and disease: mechanisms and potential targets.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 333(2023).</li>
<li>Sabouny, R., Shutt, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+regulation+of+mitochondrial+fission+and+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Reciprocal regulation of mitochondrial fission and fusion.</a> Trends Biochem Sci. 45 (7), 564-577 (2020).</li>
<li>Jin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+adaptation+in+cancer+drug+resistance%3A+prevalence%2C+mechanisms%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial adaptation in cancer drug resistance: prevalence, mechanisms, and management.</a> J Hematol Oncol. 15 (1), 97(2022).</li>
<li>Wai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+membrane+scaffold+SLP2+anchors+a+proteolytic+hub+in+mitochondria+containing+PARL+and+the+i-AAA+protease+YME1L%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">The membrane scaffold SLP2 anchors a proteolytic hub in mitochondria containing PARL and the i-AAA protease YME1L.</a> EMBO Rep. 17 (12), 1844-1856 (2016).</li>
<li>Schiavon, C. R., Shadel, G. S., Manor, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+mitochondrial+mobility+in+Charcot-Marie-Tooth+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Impaired mitochondrial mobility in Charcot-Marie-Tooth disease.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 624823(2021).</li>
<li>Sivakumar, A., Shanmugarajan, S., Subbiah, R., Balakrishnan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+mitochondrial+PTEN-L+determines+cell+fate+between+apoptosis+and+survival+during+chronic+alcohol+consumption%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Cardiac mitochondrial PTEN-L determines cell fate between apoptosis and survival during chronic alcohol consumption.</a> Apoptosis. 25 (7-8), 590-604 (2020).</li>
<li>Simula, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism+sustains+CD8%2B+T+cell+migration+for+an+efficient+infiltration+into+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism sustains CD8+ T cell migration for an efficient infiltration into solid tumors.</a> Nat Commun. 15 (1), 2203(2024).</li>
<li>Kopek, B. G., Shtengel, G., Xu, C. S., Clayton, D. A., Hess, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlative+3D+superresolution+fluorescence+and+electron+microscopy+reveal+the+relationship+of+mitochondrial+nucleoids+to+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Correlative 3D superresolution fluorescence and electron microscopy reveal the relationship of mitochondrial nucleoids to membranes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (16), 6136-6141 (2012).</li>
<li>Whelan, D. R., Bell, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+artifacts+in+single+molecule+localization+microscopy%3A+why+optimization+of+sample+preparation+protocols+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Image artifacts in single molecule localization microscopy: why optimization of sample preparation protocols matters.</a> Sci Rep. 5, 7924(2015).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+reveals+the+arrangement+of+inner+membrane+protein+complexes+in+mammalian+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy reveals the arrangement of inner membrane protein complexes in mammalian mitochondria.</a> J Cell Sci. 134 (13), jcs252197(2021).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interactome+of+intact+mitochondria+by+cross-linking+mass+spectrometry+provides+evidence+for+coexisting+respiratory+supercomplexes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">The interactome of intact mitochondria by cross-linking mass spectrometry provides evidence for coexisting respiratory supercomplexes.</a> Mol Cell Proteomics. 17 (2), 216-232 (2018).</li>
<li>Karbowski, M., Cleland, M. M., Roelofs, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Methods+Enzymol%22">Methods Enzymol</a>. , Elsevier. Netherlands. (2014).</li>
<li>Kleih, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+impact+of+cisplatin+on+mitochondria+induces+ROS+production+that+dictates+cell+fate+of+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Direct impact of cisplatin on mitochondria induces ROS production that dictates cell fate of ovarian cancer cells.</a> Cell Death Dis. 10 (11), 851(2019).</li>
<li>Bouchareb, R., Yu, L., Lassen, E., Daehn, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+endothelial+cells+with+fluorescent+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of conditionally immortalized mouse glomerular endothelial cells with fluorescent mitochondria.</a> J Vis Exp. (187), e64147(2022).</li>
<li>Chu, C. H., Tseng, W. W., Hsu, C. M., Wei, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+analysis+of+the+mitochondrial+network+morphology+with+applications+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Phys%22%5BJournal%5D)">Image analysis of the mitochondrial network morphology with applications in cancer research.</a> Front Phys. 10, 855775(2022).</li>
<li>Montecinos-Franjola, F., Ramachandran, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontecinos-Franjola%2C+F+%22Methods+Mol+Biol%22">Methods Mol Biol</a>. , Springer, US. (2020).</li>
<li>Gaspar, M. L., Chang, Y. F., Jesch, S. A., Aregullin, M., Henry, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+repressor+Opi1p+and+ER+membrane+protein+Scs2p+facilitates+transit+of+phosphatidic+acid+from+the+ER+to+mitochondria+and+is+essential+for+INO1+gene+expression+in+the+presence+of+choline%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interaction between repressor Opi1p and ER membrane protein Scs2p facilitates transit of phosphatidic acid from the ER to mitochondria and is essential for INO1 gene expression in the presence of choline.</a> J Biol Chem. 292 (45), 18713-18728 (2017).</li>
<li>Karbowski, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Adv+Exp+Med+Biol%22">Adv Exp Med Biol</a>. , Springer, US. (2010).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+quantitatively+revealed+by+STED+nanoscopy+with+an+enhanced+squaraine+variant+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics quantitatively revealed by STED nanoscopy with an enhanced squaraine variant probe.</a> Nat Commun. 11 (1), 3699(2020).</li>
<li>Opstad, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+structured+illumination+microscopy+data+of+mitochondria+and+lysosomes+in+cardiomyoblasts+under+normal+and+galactose-adapted+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional structured illumination microscopy data of mitochondria and lysosomes in cardiomyoblasts under normal and galactose-adapted conditions.</a> Sci Data. 9 (1), 98(2022).</li>
<li>Kunz, T. C., Götz, R., Gao, S., Sauer, M., Kozjak-Pavlovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+expansion+microscopy+to+visualize+and+characterize+the+morphology+of+mitochondrial+cristae%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Using expansion microscopy to visualize and characterize the morphology of mitochondrial cristae.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 617(2020).</li>
<li>Teixeira, P., Galland, R., Chevrollier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopies%2C+technological+breakthrough+to+decipher+mitochondrial+structure+and+dynamic%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopies, technological breakthrough to decipher mitochondrial structure and dynamic.</a> Semin Cell Dev Biol. 159 - 160, 38-51 (2024).</li>
<li>Kirchweger, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Snapshots+of+mitochondrial+fission+imaged+by+cryo-scanning+transmission+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Snapshots of mitochondrial fission imaged by cryo-scanning transmission electron tomography.</a> J Cell Sci. 138 (9), jcs263639(2025).</li>
<li>Collins, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+morphology+and+mitophagy+in+heart+diseases%3A+qualitative+and+quantitative+analyses+using+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial morphology and mitophagy in heart diseases: qualitative and quantitative analyses using transmission electron microscopy.</a> Front Aging. 2, 670267(2021).</li>
<li>Marshall, A. G., Damo, S. M., Hinton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+focused+ion+beam+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Revisiting focused ion beam scanning electron microscopy.</a> Trends Biochem Sci. 48 (6), 585-586 (2023).</li>
<li>Adebayo, M., Singh, S., Singh, A. P., Dasgupta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+fusion+and+fission%3A+the+fine-tune+balance+for+cellular+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial fusion and fission: the fine-tune balance for cellular homeostasis.</a> FASEB J. 35 (6), e21620(2021).</li>
<li>Munro, D., Baldy, C., Pamenter, M. E., Treberg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+exceptional+longevity+of+the+naked+mole-rat+may+be+explained+by+mitochondrial+antioxidant+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The exceptional longevity of the naked mole-rat may be explained by mitochondrial antioxidant defenses.</a> Aging Cell. 18 (3), e12916(2019).</li>
<li>Varuzhanyan, G., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+during+spermatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics during spermatogenesis.</a> J Cell Sci. 133 (14), jcs235937(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Cell Culture&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp;</td><td>בסיס בינוני&nbsp;</td><td>(גיבקו/חתול. מס' 11320033 )&nbsp;</td><td>תרבית תאים צינורית פרוקסימלית&nbsp;</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)&nbsp;</td><td>5-10% תוספים&nbsp;</td><td>(ביוווסט/קט. No.S181B)&nbsp;</td><td>עשרה של מדיה תרבותית &nbsp;</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין&nbsp;</td><td>100X&nbsp;</td><td>(גיבקו/חתול. מס' 15140122)&nbsp;</td><td>הגנה מפני אנטיביוטיקה &nbsp;</td></tr><tr><td>קולגן IV&nbsp;</td><td>ציפוי &nbsp;</td><td>(סיגמא-C5533-5M)&nbsp;</td><td>ציפוי לוחות Ibidi &nbsp;</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA&nbsp;</td><td>0.25% פתרון &nbsp;</td><td>(גיבקו/חתול. מס' 25200056)&nbsp;</td><td>ניתוק תאים&nbsp;</td></tr><tr><td>סליין מפוזר-פוספט (PBS)&nbsp;</td><td></td><td>(גיבקו/חתול. מס' 10010023 )&nbsp;</td><td>שטיפת תאים&nbsp;</td></tr><tr><td><חזק>טיפולים&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cisplatin&nbsp;</td><td>2 ומיקרו; M בעבודה התמחות ו-nbsp;</td><td>(סלק כימיקלים/חתול. מס' S1166)&nbsp;</td><td>השראה למתח&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (DMSO)&nbsp;</td><td>בקרת רכב&nbsp;</td><td>(פישר סיינטיפיק/קט. No.D1391)&nbsp;</td><td>Cisplatin solvent control&nbsp;</td></tr><tr><td>imaging&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פנול אדום-חופשי מדיום&nbsp;</td><td>הדמיה חיה &nbsp;</td><td>(גיבקו/חתול. מס' 21041025)&nbsp;</td><td>הפחתת פלואורסצנציה ברקע&nbsp;</td></tr><tr><td>ביולוגיה מולקולרית &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>טריזול ורג; &nbsp;</td><td>חילוץ RNA &nbsp;</td><td>(גיבקו/חתול. מס' 15596018)&nbsp;</td><td>בידוד RNA מלא &nbsp;</td></tr><tr><td>SYBR Green Master Mix &nbsp;</td><td>qPCR כימיה &nbsp;</td><td>(תרמו סיינטיפיק/Cat. No.K0221)&nbsp;</td><td>ביטוי גנים בדינמיקת מיטוכונדריה (DNM1L, FIS1, MFN1, MFN2, OPA1)&nbsp;</td></tr><tr><td>Fluorescent Tools&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dendra2&nbsp;</td><td>תג מטריצה מיטוכונדריאלית &nbsp;</td><td>מעבדת ג'קסון (PhAMexcised)&nbsp;</td><td>כתב שניתן להחליף תמונות (המרה ל-405 ננומטר, הדמיית 488/561 ננומטר)&nbsp;</td></tr><tr><td><חזק>מיקרוסקופים&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי &nbsp;</td><td>לייקה DMi8&nbsp;</td><td>הדמיה של תאים חיים ו-FRAP&nbsp;</td><td>לייזרים 405nm/488nm/561nm &nbsp;</td></tr><tr><td>תמונה J&nbsp;</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תוסף ל-RGB Profiler &nbsp;</td><td></td><td>https://imagej.net/ij/plugins/rgb-profiler.html.&nbsp;</td><td>ניתוח אירועי היתוך (חפיפה בין אות אדום/ירוק)&nbsp;</td></tr></tbody></table>

הערכת דינמיקת ביקוע/היתוך מיטוכונדריאלית בתאים צינוריים פרוקסימליים בכליה

Assessment of Mitochondrial Fission/Fusion Dynamics in Kidney Proximal Tubular Cells

Mitochondria are best recognized for their role in ATP synthesis and serve as key regulators of cellular metabolism. Mitochondrial dynamics comprehend the ...

assessment-mitochondrial-fissionfusion-dynamics-kidney-proximal

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

היתוך מיטוכונדריאלי נמדד על ידי מעקב אחר איזון של ה-GFP מטריקס במיקוד photoconverted ברשת המיטוכונדריה לאורך זמן. עד כה, רק תא אחד יכול להיות חשוף ניתוח שעה ארוכה קינטית בכל פעם. אנו מציגים שיטה מודד בו זמנית מספר תאים, ובכך להאיץ את תהליך איסוף הנתונים.

מהר יותר, ברזולוציה גבוהה, mtpa-GFP מבוססי Fusion Assay מיטוכונדריאלי רכישת נתונים הקינטית של מספר תאים במקביל באמצעות מיקרוסקופ Confocal

את ההשפעות של הפעלה של קינאז isozymes חלבון C (PKC) על תפקוד המיטוכונדריה קשורים בנשימה וזרחון חמצונים ועל כדאיויות תא מתוארות. הגישה מסתגלת טכניקת adenoviral סלקטיבי overexpress isozymes PKC בתרבית תאים ראשוניים ומגוון של מבחנים כדי לקבוע פונקציות המיטוכונדריה ומצב אנרגיה של התא.

הערכה של פונקציות מיטוכונדריאלי וכדאיויות תא בתאי כלית overexpressing חלבון קינאז C Isozymes

כאן, אנו מתארים כיצד לחקור לוקליזציה מיטוכונדריאלית של קינאז (מחזור התא), וכיצד לקבוע את מיקומו התת-מיטוכונדריאלי כמו גם מצעים/מטרות מיטוכונדריאליות פוטנציאליות. ביטוי מאולץ של חלבונים למיטוכונדריה מספק כלי שימושי לחקר ההשלכות התפקודיות של לוקליזציה מיטוכונדריאלית של חלבון מעניין.

גישות ניסוייות לחקר מיטוכונדריאלי לוקליזציה ותפקוד של מחזור התא הגרעיני קינאז, Cdk1

פרוטוקול זה מספק גישה חסכונית כדי לבודד ולאפיין העכבר הראשי כליות צינורי תאים יכולים לאחר מכן להיות תת תרבותי להערכת תפקודים ביולוגיים כליות ex-vivo, כולל ביואנרגיה מיטוכונדריאלי.

ניתוח השטף חוץ-תאי בידוד, אפיון, תפוקה גבוהה של העכבר הראשי כליות צינורי בתאי אפיתל

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לניתוח שינויים בצפיפות המיטוכונדריה ובפיזור האורך על ידי הדמיית שרירי שלד חיים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי לסריקת רשת מיטוכונדריאלית.

ניתוח צפיפות המיטוכונדריה והתפלגות האורך בסיבי שריר שלד חי של חולדות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי

במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב ומדגישים את הפרטים העיקריים לקביעת מאפיינים מורפולוגיים של מיטוכונדריה בתאים חיים, כולל הכנת דגימות, רכישת תמונה וניתוח נתונים. שיטה זו משמשת בדרך כלל לבחינת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית לחקר מצבים שונים.

קביעת מורפולוגיה מיטוכונדריאלית בתאים חיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

כאן אנו מתארים את לוקלייזר האירועים המיטוכונדריאלי (MEL), תוסף ImageJ שימושי בכימות השינויים התלת-ממדיים בביקוע המיטוכונדריאלי ובפעילות ההיתוך לאורך זמן. אנו מתארים גם צינור עיבוד תמונה שימושי לניקוי מיקרוגרפים לפני ניתוח ב-ImageJ.

הבנת השינויים במורפולוגיה המיטוכונדריאלית באמצעות מיקרוגרפים פלואורסצנטיים דינמיים ותלת מימדיים

כאן, אנו מתארים פרוטוקול חוץ גופני למידול נזקי היפוקסיה/חמצון מחדש בתאי אפיתל פרוקסימליים פרוקסימליים מטבוליים מאוד. מודל זה נועד לגרום לנזק שנגרם מלחץ מטבולי, שניתן למדוד באמצעות ביטוי סמני נזק לצינורות הפרוקסימליים והערכת תפקוד הנשימה המיטוכונדריאלי.

מידול פגיעות היפוקסיה/חמצון מחדש בתאי אפיתל צינוריים פרוקסימליים

הזרקות מקומיות של תווית צבע מיטוכונדריאלי סופית של מיטוכונדריה תא שוואן ב-vivo למיקרוסקופיה קונפוקלית. שיטה זו משתמשת בהוכחת היתכנות שהודגמה ברקמת שריר שלד של עכברים עם שריר בריא או חולה, כדי לספק הדמיה מיטוכונדרית ברזולוציה גבוהה.

שיטות לכימות במקום של מורפולוגיית מיטוכונדריה בתאי שריר וסופיים של עכברים

גרגרי מתח (SGS) הם גרגרי cytoplasmic RNA המכילים חלקיקים נתקע ribonucleoprotein (RNPs), וחשובים בתגובה תאית ללחצים שונים. דינמיקה של SGS יכולה להיות מיושמת בתאי חיים על ידי הדמיה הלוקליזציה של רכיב מתויג של SGS בתאים ראשוניים transfected אחרי המתח.

ויזואליזציה של מתח G3BP גרגרי Dynamics בראשי תאים בשידור חי

למדו להעריך דינמיקת ביקוע והיתוך מיטוכונדריאלית בתאים צינוריים פרוקסימליים בכליה באמצעות מיקרוסקופיית קונפוקל ו-Dendra2. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר מיטוכונדריות מושתלות ואינטגרציה בתאים מקבלים.

הערכת דינמיקת ביקוע/היתוך מיטוכונדריאלית בתאים צינוריים פרוקסימליים בכליה

גלה סרטונים נוספים