Name: אסטרטגיות השוואתיות לזיהוי יוביקוויטינציה בליזטים של תאי יונקים באמצעות SMAD2/SMURF2 כמודל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-17T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: למד שתי שיטות ליזה של תאים לזיהוי רמות יוביקוויטינציה בתאי יונקים באמצעות מודל SMAD2/SMURF2. השיטות מסייעות לחוקרים לבחור טכניקות מתאימות לניתוח שינויי חלבונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Popovic, D., Vucic, D., Dikic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitination+in+disease+pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ubiquitination in disease pathogenesis and treatment.</a> Nat Med. 20 (11), 1242-1253 (2014).</li>
<li>Han, D., Wang, L., Jiang, S., Yang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin-proteasome+system+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin-proteasome system in breast cancer.</a> Trends Mol Med. 29 (8), 599-621 (2023).</li>
<li>Fulcher, L. J., Batley, C., Sobajima, T., Barr, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+as+a+danger+signal+promoting+G1+arrest+after+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Time as a danger signal promoting G1 arrest after mitosis.</a> Trends Cell Biol. 36 (2), 142-153 (2025).</li>
<li>Gao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+linear+ubiquitination+in+regulating+cell+death+and+correlative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">The mechanism of linear ubiquitination in regulating cell death and correlative diseases.</a> Cell Death Dis. 14 (10), 659(2023).</li>
<li>Serratore, V., Lucibello, M., Malanga, D., Viglietto, G., De Marco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Akt+and+DUBs%3A+A+bidirectional+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Biol+Lett%22%5BJournal%5D)">Akt and DUBs: A bidirectional relationship.</a> Cell Mol Biol Lett. 30 (1), 77(2025).</li>
<li>Kwon, Y. T., Ciechanover, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+code+in+the+ubiquitin-proteasome+system+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin code in the ubiquitin-proteasome system and autophagy.</a> Trends Biochem Sci. 42 (11), 873-886 (2017).</li>
<li>Liu, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDH2+triggers+ROS-induced+cell+death+and+autophagy+by+promoting+NRF2+ubiquitination+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">BDH2 triggers ROS-induced cell death and autophagy by promoting NRF2 ubiquitination in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 39 (1), 123(2020).</li>
<li>Cappadocia, L., Lima, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin-like+protein+conjugation%3A+Structures%2C+chemistry%2C+and+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Rev%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin-like protein conjugation: Structures, chemistry, and mechanism.</a> Chem Rev. 118 (3), 889-918 (2018).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATRA+upregulates+OTUD6B+to+recruit+CD8%2B+T+cells+to+suppress+colorectal+liver+metastasis+by+stabilizing+DDX5%2FSTAT3%2FCXCL11+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">ATRA upregulates OTUD6B to recruit CD8+ T cells to suppress colorectal liver metastasis by stabilizing DDX5/STAT3/CXCL11 axis.</a> Cell Death Dis. 16 (1), 521(2025).</li>
<li>Niu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((USP33+deubiquitinates+PRKN%2FParkin+and+antagonizes+its+role+in+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">USP33 deubiquitinates PRKN/Parkin and antagonizes its role in mitophagy.</a> Autophagy. 16 (4), 724-734 (2020).</li>
<li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+K63-linked+polyubiquitination+in+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">The role of K63-linked polyubiquitination in cardiac hypertrophy.</a> J Cell Mol Med. 22 (10), 4558-4567 (2018).</li>
<li>Guo, Y., Zhao, Y., Cong, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Met1-linked+ubiquitination+in+cell+signaling+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Met1-linked ubiquitination in cell signaling regulation.</a> Biophys Rep. 10 (4), 230-240 (2024).</li>
<li>Di, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+c-Myc-WDR43+signalling+axis+promotes+chemoresistance+and+tumour+growth+in+colorectal+cancer+by+inhibiting+p53+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resist+Updat%22%5BJournal%5D)">The c-Myc-WDR43 signalling axis promotes chemoresistance and tumour growth in colorectal cancer by inhibiting p53 activity.</a> Drug Resist Updat. 66, 100909(2023).</li>
<li>Liebl, M. C., Hofmann, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+p53+signaling+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">The role of p53 signaling in colorectal cancer.</a> Cancers (Basel). 13 (9), 2125(2021).</li>
<li>Oikawa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD1+deubiquitinase+regulates+NF-%CE%BAB-+and+KEAP1-mediated+inflammatory+responses+and+reactive+oxygen+species-associated+cell+death+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">OTUD1 deubiquitinase regulates NF-κB- and KEAP1-mediated inflammatory responses and reactive oxygen species-associated cell death pathways.</a> Cell Death Dis. 13 (8), 694(2022).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deubiquitinase+OTUD1+stabilizes+NRF2+to+alleviate+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">The deubiquitinase OTUD1 stabilizes NRF2 to alleviate hepatic ischemia/reperfusion injury.</a> Redox Biol. 75, 103287(2024).</li>
<li>Moreau, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+ixazomib%2C+lenalidomide%2C+and+dexamethasone+for+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Oral ixazomib, lenalidomide, and dexamethasone for multiple myeloma.</a> N Engl J Med. 374 (17), 1621-1634 (2016).</li>
<li>Stewart, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carfilzomib%2C+lenalidomide%2C+and+dexamethasone+for+relapsed+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Carfilzomib, lenalidomide, and dexamethasone for relapsed multiple myeloma.</a> N Engl J Med. 372 (2), 142-152 (2015).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+gut+microbial+nitrogen+recycling+and+cellular+uptake+of+ammonium+to+improve+bortezomib+resistance+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Targeting gut microbial nitrogen recycling and cellular uptake of ammonium to improve bortezomib resistance in multiple myeloma.</a> Cell Metab. 36 (1), 159-175.e8 (2024).</li>
<li>De Silva, A. R. I., Page, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitination+detection+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Ubiquitination detection techniques.</a> Exp Biol Med (Maywood). 248 (15), 1333-1346 (2023).</li>
<li>Choo, Y. S., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+protein+ubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Detection of protein ubiquitination.</a> J Vis Exp. (30), e1293(2009).</li>
<li>Worboys, J. D., Palazón-Riquelme, P., López-Castejón, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+to+measure+ubiquitination+of+NLRs%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Method to measure ubiquitination of NLRs.</a> Methods Mol Biol. 2696, 105-114 (2023).</li>
<li>DeCaprio, J., Kohl, T. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denaturing+lysis+of+cells+for+immunoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Denaturing lysis of cells for immunoprecipitation.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2020 (2), 098616(2020).</li>
<li>Bass, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+technical+considerations+for+western+blotting+applications+to+physiological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Med+Sci+Sports%22%5BJournal%5D)">An overview of technical considerations for western blotting applications to physiological research.</a> Scand J Med Sci Sports. 27 (1), 4-25 (2017).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+troubleshooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and troubleshooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Crane, J. L., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+and+TGF-%CE%B2+signaling+in+bone+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mesenchymal stem cells and TGF-β signaling in bone remodeling.</a> J Clin Invest. 124 (2), 466-472 (2014).</li>
<li>Gough, N. R., Xiang, X., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+signaling+in+liver%2C+pancreas%2C+and+gastrointestinal+diseases+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">TGF-β signaling in liver, pancreas, and gastrointestinal diseases and cancer.</a> Gastroenterology. 161 (2), 434-452.e15 (2021).</li>
<li>Tzavlaki, K., Moustakas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">TGF-β signaling.</a> Biomolecules. 10 (3), 487(2020).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+western+blot%5BTitle%5D)+AND+%22J+vis+exp%22%5BJournal%5D)">The western blot.</a> J vis exp. , e5065(2025).</li>
<li>Wu, M., Chen, G., Li, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+and+BMP+signaling+in+osteoblast%2C+skeletal+development%2C+and+bone+formation%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-β and BMP signaling in osteoblast, skeletal development, and bone formation, homeostasis and disease.</a> Bone Res. 4, 16009(2016).</li>
<li>Jeon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+miR-15b-SMURF2-HSP27+axis+promotes+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">The miR-15b-SMURF2-HSP27 axis promotes pulmonary fibrosis.</a> J Biomed Sci. 30 (1), 2(2023).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMURF2+predisposes+cancer+cell+toward+ferroptosis+in+GPX4-independent+manners+by+promoting+GSTP1+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">SMURF2 predisposes cancer cell toward ferroptosis in GPX4-independent manners by promoting GSTP1 degradation.</a> Mol Cell. 83 (23), 4352-4369.e8 (2023).</li>
<li>Pi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+SMURF2+expression+enhances+RACK1+stability+and+promotes+ovarian+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Loss of SMURF2 expression enhances RACK1 stability and promotes ovarian cancer progression.</a> Cell Death Differ. 30 (11), 2382-2392 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מיקרוצינור 1.5 מ"ל</td><td>סרוויסביו</td><td>EP-150-M</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 100 מ"מ מתורבת בטיפול TC</td><td>סרוויסביו</td><td>CCD-100</td><td></td></tr><tr><td>דיסק 6 בארות</td><td>סרוויסביו</td><td>CCP-6H</td><td></td></tr><tr><td>נוגדנים נגד FLAG</td><td>פרויטנטק</td><td>20543-1-AP</td><td>דילול השתמש ב-1:200 עבור IP ו-1:10000 עבור WB</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד GAPDH</td><td>פרויטנטק</td><td>MA5-15738</td><td>דילול בשימוש 1:10000</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד HA</td><td>פרויטנטק</td><td>51064-2-AP</td><td>דילול בשימוש 1:10000</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד IgG</td><td>CST</td><td>#3900</td><td>שימוש בדילול 1:200 עבור IP</td></tr><tr><td>נוגדנים אנטי-MYC</td><td>פרויטנטק</td><td>60003-2-Ig</td><td>דילול בשימוש 1:10000</td></tr><tr><td>נוגדנים נגד SMAD2</td><td>CST</td><td>#5339</td><td>דילול השתמש ב-1:200 עבור IP ו-1:2000 עבור WB</td></tr><tr><td>ברומופנול כחול</td><td>סרוויסביו</td><td>GC307006-5 גרם</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (pH=8.0)</td><td>סרוויסביו</td><td>G1207-1L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ABW</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>סינופארם</td><td>10010618</td><td></td></tr><tr><td>חימום/קירור אמבטיה יבשה</td><td>גואוצ'נג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T תאים</td><td>ATCC</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>DMEM עם רמות סוכר גבוהות</td><td>סרוויסביו</td><td>G4515-500ML</td><td></td></tr><tr><td>שרשרת אור IgG אנטי-עכבר של עזים בצורת HRP&nbsp;</td><td>אבקלונל</td><td>AS062</td><td>דילול בשימוש 1:5000</td></tr><tr><td>שרשרת אור IgG עכברית נגד ארנב עם HRP קונוגט&nbsp;</td><td>אבקלונל</td><td>AS061</td><td>דילול בשימוש 1:10000</td></tr><tr><td>Lipo8000</td><td>ביוטיים</td><td>C0533</td><td></td></tr><tr><td>MG132</td><td>אלדין</td><td>M421264</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td>לבאג'יק</td><td>CF1524R</td><td></td></tr><tr><td>אבקת NaCl</td><td>סרוויסביו</td><td>GC102004</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>סרוויסביו</td><td>G4202-500ML</td><td></td></tr><tr><td>pCMV-FLAG-SMAD2</td><td></td><td></td><td>לביטוי יונקים</td></tr><tr><td>pCMV-HA-Ub</td><td></td><td></td><td>לביטוי יונקים</td></tr><tr><td>pCMV-MYC</td><td></td><td></td><td>לביטוי יונקים</td></tr><tr><td>pCMV-MYC-SMURF2</td><td></td><td></td><td>לביטוי יונקים</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סרוויסביו</td><td>G4003-100ML</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל מעכב פרוטאז ללא EDTA</td><td>TargetMol</td><td>C0001</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי אגרוז חלבון A/G</td><td>ביוטיים</td><td>P2017</td><td></td></tr><tr><td>ממברנת PVDF</td><td>וייזמה</td><td>E801</td><td></td></tr><tr><td>אבקת SDS</td><td>סולרביולוגיה</td><td>S8010-500g</td><td></td></tr><tr><td>מערכת SDS-PAGE</td><td>ארבייצביו</td><td>BVE4-BVT4</td><td></td></tr><tr><td>סוניקס</td><td>תא אויברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אבקת טריס-HCl</td><td>ביוטופ</td><td>HST-0372</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סרוויסביו</td><td>GC204003-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין</td><td>סרוויסביו</td><td>G4021-100ML</td><td></td></tr><tr><td>מערבל מערבולת</td><td>נתרם בנדיבות על ידי וייזמה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-מרקפטואנול</td><td>אלדין</td><td>M301573</td><td></td></tr></tbody></table>

אסטרטגיות השוואתיות לזיהוי יוביקוויטינציה בליזטים של תאי יונקים באמצעות smad2/smurf2 כמודל

Comparative Strategies for Ubiquitination Detection in Mammalian Cell Lysates Using SMAD2/SMURF2 as a Model

אסטרטגיות השוואתיות לזיהוי יוביקוויטינציה בליזטים של תאי יונקים באמצעות SMAD2/SMURF2 כמודל

Ubiquitination, a post-translational modification, is a critical regulator of intracellular protein function. Ubiquitination modulates protein functions ...

comparative-strategies-for-ubiquitination-detection-mammalian-cell

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Ubiquitination הוא שינוי posttranslational המפתח בוצע על ידי קבוצה של שלושה אנזימים. מוטציות של גנים המעורבים שינוי זה קשור הרבה מחלות אנושיות שונות. כאן אנו מתארים פרוטוקולים לזהות ubiquitination החלבון בתאים...

זיהוי של חלבון Ubiquitination

סרטון זה מדגים את שיטת in vitro עבור SUMOylation של חלבוני סובסטרט באמצעות מפל אנזימים רציף. יתר על כן, מצב SUMOylated של החלבון מזוהה באמצעות אלקטרופורזה וטכניקת immunoblotting.

בדיקת SUMOylation: טכניקה במבחנה לזיהוי מצב SUMOylation של חלבוני סובסטרט על ידי immunoblotting

הפרוטוקול הנוכחי מפרט שיטה למדידת הפעילות של אנזימים תפקודי הומולוגי deubiquitinating. בדיקות מיוחדות קוולנטית לשנות את האנזים ולאפשר לגילוי. שיטה זו מחזיקה את הפוטנציאל לזהות מטרות טיפוליות חדשות.

שיטה למדידת הפעילות של אנזימי Deubiquitinating בשורות תאים ודגימות רקמה

אנו מציגים שיטה לטיהור, איתור וזיהוי של פפטידים diGly שמקורם בחלבונים אוביקטיביים מדגימות ביולוגיות מורכבות. השיטה המוצגת מופצת, איתנה, ומבצעת שיטות שפורסמו ביחס לרמת העומק של האנליזה האוביקווינופית.

איתור מקומות לגילוי החלבון על ידי העשרה מפפטיד וספקטרומטר מסה

אוביקווינציה היא שינוי פוסט-טרנסלייתי המשחק תפקידים חשובים בתהליכים סלולריים והוא מתואם באופן הדוק על ידי דאובינציה. פגמים בשתי התופעות מתחת לפתווגיות אנושיות. אנו מספקים פרוטוקולים לביצוע התגובה אוביקווינציה ותגובת דאוביטיות באמצעות רכיבים מטוהרים.

בתחומי החוץ והאי של האבנים הנוזומטיות

פרוטוקול זה נועד ביעילות לכמת אוביקוויב-פרוטאסדום מערכת (UPS) פעילות בתאים סלולריים שונים של המוח מכרסם. משתמשים יכולים לבחון את התפקוד UPS בתוך שברים גרעיניים, cytoplasmic וסינפטית באותו בעל חיים, הפחתת כמות הזמן ומספר בעלי החיים הדרושים כדי לבצע ניתוחים אלה מורכבים.

בדיקת כימות משנית אוביקוויאין-פעילות פרוטאסדום במוח מכרסם

פרוטוקול זה מטרתו להקים אוביקוויב (וכדומה) ו אוביקוויב-אוהב (Ubls) הפרוטאמים ספציפיים כדי לזהות שינויים של סוג זה של שינויים לאחר העברה (לאחר ההעברה), הקשורים במצב ספציפי כגון טיפול או פנוטיפים.

יצירת פרופיל אוביקוויפין ואוביקוויב-שינויים עצמאיים וזיהוי של שינויים משמעותיים

שיטה זו מתארת הערכה של שינויים גלובליים בטופולוגיית שרשרת ubiquitin. ההערכה מבוצעת על ידי יישום של גישה פרוטאומית ממוקדת ספקטרומטריית מסה.

ניתוח שרשרת Ubiquitin על ידי ניטור תגובה מקבילה

המחקר הנוכחי מספק פרוטוקולים מפורטים במבחנה בכל מקום לבדיקת אנליזה לניתוח של E3 אוביקוויטין פעילות קטליטית ligase. חלבונים רקומביננטיים באו לידי ביטוי במערכות פרוקריוטיות כגון תרבות קולי Escherichia.

במבחנה ניתוח של E3 אוביקוויטין פונקציית ליגאז

אנו מספקים פרוטוקול מפורט לבדיקת יוביקוויטילציה של מצע מסוים ויוביקוויטין-ליגאז E3 בתאי יונקים. קווי תאים HEK293T שימשו לביטוי יתר של חלבונים, המצע הפוליוביקוויטילטיבי טוהר מליאסטים של תאים על ידי מיצוי חיסוני, ונפתר ב- SDS-PAGE. אימונובלוטינג שימש כדי לדמיין את השינוי הפוסט-תרגומי הזה.

הערכה של יוביקוויטילציה של מצע על ידי E3 יוביקוויטין-ליגאז בליסאטים של תאי יונקים

הפרוטוקול מתאר שיטה שלב אחר שלב לטיהור חלבונים הנמצאים בכל מקום מתאי יונקים באמצעות חלבון מדכא הגידול p53 כדוגמה. חלבוני p53 הנמצאים בכל מקום טוהרו מתאים בתנאים מחמירים של אי-דנטורציה ודנאטורציה.

טיהור של חלבוני p53 הנמצאים בכל מקום מתאי יונקים

למד שתי שיטות ליזה של תאים לזיהוי רמות יוביקוויטינציה בתאי יונקים באמצעות מודל SMAD2/SMURF2. השיטות מסייעות לחוקרים לבחור טכניקות מתאימות לניתוח שינויי חלבונים.

אסטרטגיות השוואתיות לזיהוי יוביקוויטינציה בליזטים של תאי יונקים באמצעות SMAD2/SMURF2 כמודל

גלה סרטונים נוספים