19 בדצמבר 2025
פרוטוקול זה מציג טכניקת מיקרו-שאיירה פשוטה לבידוד תאים סומטיים (SCs) חיוניים מזרע סוסי מוקפיא. בניגוד לגישות המסורתיות, טכניקה זו מונעת תרביות ממושכות במבחנה ומתגברת על זיהום זרע, ומאפשרת שימוש מיידי בשכפול תאים סומטיים.
מטרתנו להראות שתאים סומטיים מזרע סוסי מוקפא יכולים להיות שימושיים לשיקום פרטים בעלי ערך גנטי גבוה. האתגר הנוכחי שלנו הוא לבחור תאים סומטיים עם DNA דיפלואידי שלם לשימוש כתורם גרעיני. כדי להתחיל, הסר את קשיות הזרע של הסוסים ממיכל החנקן הנוזלי.
חשפו אותם לאוויר למשך 10 שניות, והפשרו אותם באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות. קח דגימה של 250 מיקרוליטר מהזרע המופשל. מדלל אותו במיליליטר אחד של DMEM-F12 בתוספת תוספת.
דגרו את תערובת הזרע בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. יש להוציא 25 מיקרוליטר מהדילול המודגר לתוך צינור, ולדלל אותו ב-975 מיקרוליטר DPBS בתוספת 0.1 מיליגרם למיליליטר פוליוויניל אלכוהול או פוליוויניל פירולידון. ערבב בעדינות את המתלים.
שמור על תערובת הזרע המדוללת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לאורך כל תהליך איסוף התאים. הניחו מכסה צלחת פטרי המכיל זרע סויס מדולל על שלב המיקרוסקופ כדי להתכונן לאיסוף תאים סומטיים. בחר מיקרופיפטה בקוטר מתאים לאיסוף תאים סומטיים וחבר אותו למערכת השאיבה המכנית.
הכנס בזהירות את המיקרופיפטה לתוך הטיפה המיקרו ומיישר אותו עם בסיס מכסה הצליח. כאשר הפיפטה שואבת מדיום תרבית, התחילו ללכוד תאים סומטיים בנפרד. התמקד בתחתית המיקרו-דרופ, שם נראים מורפולוגיות תאים שונות.
מקם את קצה המיקרופיפטה ליד כל תא סומטי, ושאוף תחת לחץ שלילי. אסוף תאים עגולים ומוארכים, ללא קשר לגודל. לאחר איסוף 10 תאים, מניחים אותם בטיפה מיקרוסקופית של 10 מיקרוליטר הממוקמת על פני השטח העליון של מכסה הצלחת.
שמור את כל התאים הסומטיים שנאספו בתוך המיקרו-טיפה הזו לאורך כל תהליך האיסוף. לאחר איסוף מספר התאים הסומטיים הרצוי, יש לבצע תהליך שטיפה פשוט באמצעות טיפות מיקרו להסרת זרע, פסולת ומזהמים מיקרוביאליים. באמצעות מכסה כלים שני, בצע שטיפה רציפה בת שלושה שלבים של תאים סומטיים.
השתמשו במיקרופיפטה כדי להעביר את התאים הסומטיים לטיפה הראשונה, ותנו להם לשקוע למשך שלוש עד חמש דקות. העבר את התאים מהטיפה הראשונה לטיפה השנייה באותו פרוצדורה. חזור על ההעברה פעם נוספת ומניח את התאים הסומטיים בטיפה השלישית.
לבסוף, יש להפקיד את התאים הסומטיים המבודדים בטיפה מיקרו מוכנה המיועדת להעברת גרעין של תא סומטי. טכניקת המיקרו-שאיבה הצליחה לשחזר תאים סומטיים מזרע סוסי מוקפיא, עם קצב לכידה שנע בין 317.7 ל-424.7 תאים בשעה בשלושה סייחים. סוס מספר 3 מציג את התפוקה הגבוהה ביותר.
זוהו חמישה סוגי תאים סומטיים מובחנים בהתבסס על גודל ומורפולוגיה. זיהינו אוכלוסיית תאים סומטיים השונה במורפולוגיה ובחיוניות בזרע סוסי מוקפיא, שעשוי להיות שימושי כתורם גרעיני. ניתן לבחור את התאים לפי המורפולוגיה שלהם, וההליך אינו דורש הקמת תרבית ראשונית.
נתמקד בשיפור החיוניות של תאים אלו לאחר הגדלת זרע הסוסים.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
הפרוטוקול הזה מציג טכניקת מיקרו-שאיבה לבידוד תאים סומטיים חיים מזרע סוסים קפוא. שיטה זו מונעת תרביות ארוכות in vitro וזיהום זרע, ומאפשרת שימוש מיידי בתאי תא סומטי לשיבוט.
Efficient recovery of viable somatic cells from cryopreserved equine semen addresses a critical bottleneck in genetic resource utilization for advanced reproductive technologies. This microaspiration technique enables immediate access to diploid donor cells for somatic cell nuclear transfer (SCNT), bypassing the need for prolonged culture and mitigating sperm contamination. The approach expands the potential for genetic rescue and portfolio diversification in animal biotechnology pipelines.
This microaspiration method integrates at the interface of genetic resource recovery and SCNT-based cloning, bridging cryopreservation banking with immediate nuclear donor preparation.