Name: גישות ניסיוניות לניתוח ביוכימי של חלבון חומצי סיבי גליאלי ושל וריאנטים הקשורים למחלה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-28T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: למדו שיטות ניסיוניות לניתוח ביוכימי של חלבון GFAP ומוטציות הקשורות למחלת אלכסנדר. הפרוטוקול מספק כלים לחקר הרכבת סיבים, צבירה ושינויים לאחר תרגום בחלבון אסטרוציטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>30% פתרון אקרילאמיד/ביס 37.5:1</td><td>ביוראד</td><td>1610158</td><td></td></tr><tr><td>אמוניום פרסולפט (APS)</td><td>ביוראד</td><td>1610700</td><td></td></tr><tr><td>אמפיצילין</td><td>USB</td><td>11259</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי-GFAP</td><td>טכנולוגיית איתות סלולרי</td><td>12389</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי-יוביקוויטין</td><td>מיליפור</td><td>ST 1200</td><td>שיבוט FK2</td></tr><tr><td>צנטריפוגה Avanti J-26S XP</td><td>בקמן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלורואמפניקול</td><td>USB</td><td>23660</td><td></td></tr><tr><td>CM-ספרוז</td><td>ציטיבה</td><td>1707 1901</td><td></td></tr><tr><td>צבע כחול קומאסי</td><td>USB</td><td>32826</td><td></td></tr><tr><td>רשת נחושת</td><td>טד פלה</td><td>01753-F</td><td></td></tr><tr><td>CS 150 NX Micro אולטרצנטרפוג'</td><td>היטאצ'י</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר Dounce</td><td>וויטון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>UR</td><td>DTT</td><td></td></tr><tr><td>זן E. coli BL21(DE3) pLysS</td><td>אג'ילנט</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasiGlow</td><td>טד פלה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מגיב ECL</td><td>פרקיןאלמר</td><td>NEL 105001</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>USB</td><td>15699</td><td></td></tr><tr><td>H2O2</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>18312</td><td></td></tr><tr><td>עמודת HiRes S</td><td>ציטיבה</td><td>2927 5877</td><td></td></tr><tr><td>עמודת HiTrap Q</td><td>ציטיבה</td><td>1711 5301</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>UR</td><td>IPTG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>הוניוול</td><td>12636</td><td></td></tr><tr><td>LB בינוני (LB אגר)</td><td>USB</td><td>75851</td><td></td></tr><tr><td>LB בינוני (LB Broth)</td><td>BD Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>מרקפטואנול</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>MES</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>הוניוול</td><td>31434S</td><td></td></tr><tr><td>מערכת כרומטוגרפיה NGC</td><td>BioRad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אופטימה XE-90 אולטרה-צנטריפוגה</td><td>בקמן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>אקרוס אורגניקס</td><td>215740050</td><td></td></tr><tr><td>פוליאטילנימין</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>רוטור</td><td>בקמן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>רוטור S55S</td><td>היטאצ'י</td><td></td><td></td></tr><tr><td>רוטור S80AT3</td><td>היטאצ'י</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>USB</td><td>75819</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE</td><td>ביוראד</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 520 נגד עכבר עזים IgG&nbsp;</td><td>ביוראד</td><td>12005867</td><td></td></tr><tr><td>StarBright Blue 700 עזים נגד ארנבים IgG&nbsp;</td><td>BioRad</td><td>12004161</td><td></td></tr><tr><td>סוקרוזה</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>S5391</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>USB</td><td>76320</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אלקטרונים מעברית H-7700)</td><td>היטאצ'י</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>טריס</td><td>USB</td><td>75825</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>אצטט אורניל</td><td>מדעי מיקרוסקופ אלקטרונים &nbsp;</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>אוריאה</td><td>הוניוול</td><td>15604H</td><td></td></tr></tbody></table>

גישות ניסיוניות לניתוח ביוכימי של חלבון חומצי סיבי גליאלי ושל וריאנטים הקשורים למחלה

Experimental Approaches for Biochemical Analysis of Glial Fibrillary Acidic Protein and Its Disease-associated Variants

כדי לחקור כיצד מוטציות הגורמות ל-AxD משפיעות על תכונות ההרכבה של GFAP, יצרנו חלבונים רקומביננטיים בחיידקים באמצעות מערכת ביטוי מבוססת PET. אנו מפרטים את הפרוטוקולים לביטוי וטיהור GFAP, תוך שימוש ב-WT GFAP כדוגמה. לאחר השראת IPTG (איור 1A, נתיב 2), GFAP טוהר בתהליך בן שלושה שלבים הכולל הכנת גוף הכללה (איור 1B) וכרומטוגרפיית חילוף יונים עם עמודת CM (איור 1C, נתיב 1) ועמודת Q (איור 1C, נתיבים 2 ו-3).
<...

Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) is a key intermediate filament protein critical for maintaining the structural integrity and function of astrocytes ...

experimental-approaches-for-biochemical-analysis-glial-fibrillary

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

אנו מתארים טכניקה להכנת הבהיר homogenates קליפת המוח האנושי, הפרדת חלבונים על ידי SDS-PAGE, אחזור אנטיגן ו immunoblotting עם נוגדן ל הפפטיד Aβ. שימוש בפרוטוקול זה, אנו באופן עקבי לזהות Aβ monomeric ו multimeric ברקמת קליפת המוח של בני אדם עם פתולוגיה אלצהיימר.

איתור SDS-PAGE/Immunoblot של Multimers Aβ ברקמה קליפתיים האדם Homogenates באמצעות Antigen-epitope אחזור

פרוטוקול מיצוי חלבון נפוץ באמצעות מאגר האוריאה / thiourea / SDS לרקמת מוח אדם ועכברים מאפשר indentification של חלבונים על ידי 2D-DIGE והאפיון הבא שלהם על ידי immunoblotting 2DE המיני. שיטה זו מאפשרת לאדם להשיג תוצאות יותר לשחזור ואמינים מביופסיות אדם ומודלים ניסיוניים.

חלבון נגזר מוח קונסנסוס, חליצה ​​פרוטוקול לחקר האדם וMurine המוח Proteome שימוש בשתי 2D-DIGE ומיני 2DE immunoblotting

באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי בשילוב עם טכנולוגיית ביו-פאנינג יצרנו מערכת ביו-פאנינג שלילית וחיובית לרכישת נוגדנים כנגד וריאנטים חלבונים ספציפיים למחלה הנמצאים בכל חומר ביולוגי, אפילו בריכוזים נמוכים.  הצלחנו להשיג נוגדנים לגרסאות חלבון TDP-43 המעורבות בטרשת אמיוטרופית צידית.

רומן הכוח האטומי מיקרוסקופית מבוסס Biopanning לבידוד של חומרים כימיים מסוימים מורפולוגיה נגד גרסאות TDP-43 בטרשת לרוחב amyotrophic

מתואר ELISA המציע גישה כמותית חדשנית. הוא מגלה באופן ספציפי α-סינקליין הקשור למחלה (αSD) במודל עכבר מהונדס (M83) של סינקלינופתיה באמצעות מספר נוגדנים נגד צורת ה-αS המפוספסת ב-Ser129 או החלק ה-C-סופי של החלבון.

איתור של α-סינוקלאין קשורים למחלות על ידי ELISA משופר במוח של עכברים הטרנסגניים ביתר A53T אדם מוטצית α-סינוקלאין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבידוד של אלפא-סינוקלאין (α-syn) שהופך ליותר ויותר בלתי מסיס/מצטבר מרקמת מוח אנושית לאחר המוות. באמצעות ניצול חוצצים עם חוזק חומר ניקוי הולך וגובר וטכניקות אולטרה-צנטריפוגה במהירות גבוהה, ניתן לבחון את המאפיינים המשתנים של צבירת α-syn ברקמות חולה ולא חולות.

הפקה רציפה של המסיס ובלתי מסיס אלפא-סינוקלאין ממוח פרקינסון

להלן מוצגות שתי שיטות שבהן ניתן להשתמש בנפרד או במשולב כדי לנתח את השפעת בטא עמילואיד על מבנה קריש פיברין. כלול הוא פרוטוקול עבור יצירה של במבחנה clot פיברין, ואחריו קריש עכירות ואלקטרון סריקה שיטות.

ניתוח של β-עמילואיד-induced הפרעות על מבנה קריש פיברין על ידי ספקטרוסקופיה וסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור מערכת ביופסיה בחינם צף של העור על מקטעים לביופסיה של מעטפת המאפשרת זיהוי של מחלות היווצרות המחלה מסוים של מחלת אלפא מעורב במחלת פרקינסון מספר חלבונים של מערכת העצבים...

מיקוד אלפא Synuclein אגרגטים בתוך עורית היקפיים סיבים עצביים על ידי Free-צפה אימונוofלואונסנציה החופשית

פרוטוקול זה מתאר שיטה למעקב אחר מסלולים בודדים של הזדקנות המוח באמצעות תוכנית תרומת מוח ואפיון נכון של המוח. תורמי מוח מעורבים במחקר אורכי ארוך טווח כולל הערכות רב מימדיות סדרתיות. הפרוטוקול מכיל תיאור מפורט של עיבוד המוח ומתודולוגיית אבחון מדויקת.

פרוטוקול בנק המוח Abbiategrasso לאיסוף, עיבוד ואפיון מוחות מזדקנים

שתי שיטות קשורות מתוארות כדי לדמיין אירועים תת-תאיים הנדרשים לשידור סינפטי. פרוטוקולים אלה מאפשרים ניטור בזמן אמת של הדינמיקה של זרם סידן presynaptic והיתוך קרום שלפוחית סינפטי באמצעות הדמיה של תאים חיים של נוירונים בתרבית הפריה חוץ גופית .

מדידה פלואורסצנטית בזמן אמת של פונקציות סינפטיות במודלים של טרשת אמיוטרופית לרוחב

אנו מציגים כאן פרוטוקול כיצד להכין תרביות ראשוניות של תאי גליה, אסטרוציטים ומיקרוגליה מקליפת המוח של חולדות להדמיית וידאו בהילוך מהיר של Ca2+ תוך-תאי למחקר על פתופיזיולוגיה של טרשת אמיוטרופית צידית במודל החולדות hSOD1G93A .

תרביות ראשוניות של אסטרוציטים ומיקרוגליה של חולדות והשימוש בהן בחקר טרשת אמיוטרופית צידית

שיטת טיהור ביוכימית זו עם ניתוח פרוטאומי מבוסס ספקטרומטריית מסה מאפשרת אפיון חזק של ליבות פיבריל עמילואידיות, מה שעשוי להאיץ את זיהוי המטרות למניעת מחלת אלצהיימר.

טיהור ביוכימי ואפיון פרוטאומי של ליבות פיבריל עמילואידיות מהמוח

למדו שיטות ניסיוניות לניתוח ביוכימי של חלבון GFAP ומוטציות הקשורות למחלת אלכסנדר. הפרוטוקול מספק כלים לחקר הרכבת סיבים, צבירה ושינויים לאחר תרגום בחלבון אסטרוציטים.

גישות ניסיוניות לניתוח ביוכימי של חלבון חומצי סיבי גליאלי ושל וריאנטים הקשורים למחלה

גלה סרטונים נוספים