November 25th, 2025
פרוטוקול זה מתאר שיטת צביעת חיסון לכל הקיבה, שעובדה על ידי טכניקת "Swiss roll" שפותחה במקור למעי העכברים.
המחקר שלנו מתמקד בשיפור האופן שבו אנו מכינים ומנתחים את הקיבה הקלה להדמיה. התאמנו את טכניקת הגלגול השווייצרית שפותחה במקור למעי העכברים, כך שכל אזורי הקיבה העיקריים, כולל הקרקעית, הגופן והאנטרום, יוכלו להיות משולבים יחד בחלק קריו אחד. זה מאפשר לנו להמחיש את מבנה הקיבה והרכב התאים זה לצד זה, תוך שמירה על כיוון מרחבי מדויק ואיכות תמונה גבוהה.
הקיבה היא איבר מורכב עם רקמות עדינות. טעויות קטנות עלולות לפגוע בתאים או לעוות את הסידור, מה שהופך את ההדמיה ברזולוציה גבוהה וצביעת החיסון לבלתי עקבית. טכניקת הגלגול השווייצרי שלנו פותרת זאת בכך שהיא שומרת על כל האזורים, כולל התריסריון והוושט שלמים, בבלוק קריו אחד, מה שהופך את הניסויים לאמינים וניתנים לשחזור יותר.
כדי להתחיל, השתמש במספריים כדי לחתוך לאורך המזנטריה הגחונית של התריסריון והקיבה עד לסיכה בגוף. באמצעות פיפטת העברה מלאה ב-PBS, שטפו כל שאריות מזון מהלומן הקיביתי. מתחו בעדינות את הבטן הפתוחה כדי להגיע לכיוון שטוח.
הצמיד את הרקמה שטוחה שוב אחרי הקיבוע הקצר. באמצעות מספריים, גזמו את הבטן לאורך הקו המקווקט כדי ליצור צורה אחידה המתאימה לגלגול. הניחו את רקמת הקיבה הגזורת על נייר פילטר רטוב ב-PBS.
גלגלו את הטישו לצורת גלגול שוויצרי ואבטחו אותה על ידי הכנסת קיסם דרך המרכז. לאחר הגלגול, הכנס מחט בקוטר 30 גייג' כדי לקבע את צורתו. אחר כך כופף את המחט בזווית של 90 מעלות כדי לייצב את הבטן המגולגלת.
תקבע את הרקמה המגולגלת ב-4% פאראפורמלדהיד בארבע מעלות צלזיוס למשך שש שעות. לאחר מכן הסר בעדינות את מחט הייצוב. הטמיעו את הרקמה בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית באמצעות תבניות בסיס חד-פעמיות.
לאחר מכן הקפיאו את התבנית על קרח יבש. לאחר הקפאה מלאה, אחסן את התבנית בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס. השיטה החדשה אפשרה הכללה של הקרקעית, הקורפוס, האנטרום, חלק מהוושט והתריסיון בתוך חתך גלגול קיבה שווייצרי יחיד של עכברים.
כתמי המטוקסילין ואאוזין בגליל השווייצרי הקיבתי חשפו אדריכלות שמורה היטב בפונדוס, קורפוס, אנטרום, וושט ותריסריון עם שכבות ריריות, תת-ריריות ושרירים נראות בבירור. צביעות אימונופלואורסצנטיות הראו ביטוי של KIT ו-ANO1 בתאים אינטרסטיציאליים של קחל וביטוי של בטא טובולין 3 בנוירונים מעיים, מה שמאשר את שימור התאים בגליל השווייצרי הקיבה. ביטוי KIT זוהה גם בתאי פנת' וגביע ברירית הקיבה, בעוד ש-ANO1 היה מבוטא מאוד בתאי אפיתל עמודיים פונדיים.
ביטוי של בטא טובולין שלוש נצפה בתאים המפרישים בקיבה, באנדוקרין ובריר בנוסף לנוירונים מעיים. צביעת שרשרת 11 כבדה במיוזין אישרה את נוכחות תאי שריר חלק ומיופיברובלסטים ברירית הקיבה, בעוד שצביעת E-cadherin הראתה תאי אפיתל וצביעת KIT שוב סימנה תאים אינטרסטיאליים של קחל. טכניקת הכבישים השווייצרית יכולה לקדם מחקר על שינויים ספציפיים לאזור ברקמת הקיבה.
בניגוד לגישות המסורתיות שמטמיעות אזור בנפרד, שיטת הגלגול השווייצרית מעבדת את כל אזורי הקיבה בתנאים זהים, וחוסכת זמן ותגובות. דבר זה הופך אותו לפלטפורמה מעשית וניתנת להרחבה לניתוח מקיף של רקמת הקיבה הן בבריאות והן במחלות.
פרוטוקול זה מתאר שיטת אימונו-צביעה של הבטן כולה, ששוכללה משיטת "הגליל השוויצרי" שפותחה במקור עבור המעי העכברי. השיטה מאפשרת ויזואליזציה של מבנה הקיבה והרכב התאים תוך שמירה על אוריינטציה מרחבית ואיכות תמונה.
Consistent spatial mapping of gastric muscle layers is critical for high-confidence target validation and mechanistic de-risking in gastrointestinal drug discovery. The modified Swiss roll technique enables reproducible, side-by-side analysis of all major mouse gastric regions, supporting robust comparative studies and minimizing experimental variability. This scalable approach enhances predictive confidence for early discovery and translational research pipelines focused on gastric biology.
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through assay development and preclinical research, providing a reproducible platform for spatial and molecular analysis of gastric tissues.