Name: שיפור מסכי CRISPR-Cas9 בתאי CAR T – שיטה משופרת להכנת ספרייה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-02T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: חקור פרוטוקול משופר לסקרינג CRISPR-Cas9 בתאי CAR T אנושיים. השיטה משתמשת בעיכול אנזימטי ושליפה סלקטיבית לשיפור שחזור sgRNA מ-DNA גנומי, ומאפשרת זיהוי מהימן של רגולטורים גנטיים לשיפור תרפיות CAR T.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Brudno, J. N., Maus, M. V., Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+T+cells+and+T-cell+therapies+for+cancer%3A+A+translational+science+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">CAR T cells and T-cell therapies for cancer: A translational science review.</a> JAMA. 332 (22), 1924-1935 (2024).</li>
<li>Cappell, K. M., Kochenderfer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+following+CAR+T+cell+therapy%3A+What+we+know+so+far%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes following CAR T cell therapy: What we know so far.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (6), 359-371 (2023).</li>
<li>Cui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenges+and+progress+of+CAR-T+cell+therapy+in+the+treatment+of+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">The challenges and progress of CAR-T cell therapy in the treatment of solid tumors.</a> Mol Cell Biochem. 480 (10), 5345-5367 (2025).</li>
<li>Shah, N. N., Fry, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+resistance+to+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of resistance to CAR T cell therapy.</a> Nat Rev Clin Oncol. 16 (6), 372-385 (2019).</li>
<li>Redondo-Frutos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+in+CAR+T+cells+for+solid+tumors%3A+Current+state%2C+barriers+and+future+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering in CAR T cells for solid tumors: Current state, barriers and future developments.</a> Hum Gene Ther. 36 (17-18), 1138-1153 (2025).</li>
<li>Bock, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+CRISPR+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">High-content CRISPR screening.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-23 (2022).</li>
<li>Shang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+FAM49B+as+a+key+regulator+of+actin+dynamics+and+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies FAM49B as a key regulator of actin dynamics and T cell activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (17), E4051-E4060 (2018).</li>
<li>Shifrut, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+primary+human+T+cells+reveal+key+regulators+of+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in primary human T cells reveal key regulators of immune function.</a> Cell. 175 (7), 1958-1971 (2018).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+CD8%2B+T+cell+CRISPR+screening+reveals+control+by+Fli1+in+infection+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">In vivo CD8+ T cell CRISPR screening reveals control by Fli1 in infection and cancer.</a> Cell. 184 (5), 1262-1280.e22 (2021).</li>
<li>Belk, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+of+T+cell+exhaustion+identify+chromatin+remodeling+factors+that+limit+T+cell+persistence%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens of T cell exhaustion identify chromatin remodeling factors that limit T cell persistence.</a> Cancer Cell. 40 (7), 768-786.e7 (2022).</li>
<li>Henriksson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screens+in+T+helper+cells+reveal+pervasive+crosstalk+between+activation+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screens in T helper cells reveal pervasive crosstalk between activation and differentiation.</a> Cell. 176 (4), 882-896.e18 (2019).</li>
<li>Gurusamy, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-phenotype+CRISPR-Cas9+screen+identifies+p38+kinase+as+a+target+for+adoptive+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Multi-phenotype CRISPR-Cas9 screen identifies p38 kinase as a target for adoptive immunotherapies.</a> Cancer Cell. 37 (6), 818-833.e9 (2020).</li>
<li>Wei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+REGNASE-1+programs+long-lived+effector+T+cells+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Targeting REGNASE-1 programs long-lived effector T cells for cancer therapy.</a> Nature. 576 (7787), 471-476 (2019).</li>
<li>Dong, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+immunotherapy+target+discovery+using+genome-scale+in+vivo+CRISPR+screens+in+CD8+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Systematic immunotherapy target discovery using genome-scale in vivo CRISPR screens in CD8 T cells.</a> Cell. 178 (5), 1189-1204.e23 (2019).</li>
<li>Legut, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-scale+screen+for+synthetic+drivers+of+T+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-scale screen for synthetic drivers of T cell proliferation.</a> Nature. 603 (7902), 728-735 (2022).</li>
<li>Ye, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-scale+gain-of-function+CRISPR+screen+in+CD8+T+cells+identifies+proline+metabolism+as+a+means+to+enhance+CAR-T+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">A genome-scale gain-of-function CRISPR screen in CD8 T cells identifies proline metabolism as a means to enhance CAR-T therapy.</a> Cell Metab. 34 (4), 595-614.e14 (2022).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+screening+of+CAR+T+cells+and+cancer+stem+cells+reveals+critical+dependencies+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">CRISPR screening of CAR T cells and cancer stem cells reveals critical dependencies for cell-based therapies.</a> Cancer Discov. 11 (5), 1192-1211 (2021).</li>
<li>Yukl, S. A., Kaiser, P., Kim, P., Li, P., Wong, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+using+the+QIAshredder+instead+of+restriction+digestion+to+prepare+DNA+for+droplet+digital+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Advantages of using the QIAshredder instead of restriction digestion to prepare DNA for droplet digital PCR.</a> BioTechniques. 56 (4), 194(2014).</li>
<li>Latham, S., Hughes, E., Budgen, B., Morley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+the+PCR+by+genomic+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inhibition of the PCR by genomic DNA.</a> PLoS One. 18 (4), e0284538(2023).</li>
<li>Owczarzy, R., Moreira, B. G., You, Y., Behlke, M. A., Wälder, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+stability+of+DNA+duplexes+in+solutions+containing+magnesium+and+monovalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Predicting stability of DNA duplexes in solutions containing magnesium and monovalent cations.</a> Biochemistry. 47 (19), 5336-5353 (2008).</li>
<li>Sasaki, Y., Miyoshi, D., Sugimoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+molecular+crowding+on+DNA+polymerase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">Effect of molecular crowding on DNA polymerase activity.</a> Biotechnol J. 1 (4), 440-446 (2006).</li>
<li>Seitz, V., Schaper, S., Dröge, A., Lenze, D., Hummel, M., Hennig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+to+prevent+carryover+contaminations+in+two-step+PCR+NGS+library+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new method to prevent carryover contaminations in two-step PCR NGS library preparations.</a> Nucleic Acids Res. 43 (20), e135(2015).</li>
<li>Giuffre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+Agilent+Technologies+SureSelectTM+target+enrichment+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">Overview of the Agilent Technologies SureSelectTM target enrichment system.</a> J Biomol Tech. 22 (Suppl), S30(2011).</li>
<li>Chen, R., Im, H., Snyder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-exome+enrichment+with+the+Roche+NimbleGen+SeqCap+EZ+Exome+Library+SR+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-exome enrichment with the Roche NimbleGen SeqCap EZ Exome Library SR platform.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2015 (7), 634-641 (2015).</li>
<li>Horlbeck, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+and+highly+active+next-generation+libraries+for+CRISPR-mediated+gene+repression+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Compact and highly active next-generation libraries for CRISPR-mediated gene repression and activation.</a> eLife. 5, e19760(2016).</li>
<li>Rodriguez-Marquez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((density+influences+antitumoral+efficacy+of+BCMA+CAR+T+cells+and+correlates+with+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">density influences antitumoral efficacy of BCMA CAR T cells and correlates with clinical outcome.</a> Sci Adv. 8 (39), 514(2022).</li>
<li>Gilbert, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-mediated+control+of+gene+repression+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-mediated control of gene repression and activation.</a> Cell. 159 (3), 647-661 (2014).</li>
<li>Dash, S., Balasubramaniam, M., Dash, C., Pandhare, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biotin-based+pulldown+assay+to+validate+mRNA+targets+of+cellular+miRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Biotin-based pulldown assay to validate mRNA targets of cellular miRNAs.</a> J Vis Exp. (136), e57786(2018).</li>
<li>Tsuji, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+biotinylated+RNA+or+DNA+pulldown+assays+for+detection+of+binding+proteins%3A+Examples+of+IRP1%2C+IRP2%2C+HuR%2C+AUF1%2C+and+Nrf2%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of biotinylated RNA or DNA pulldown assays for detection of binding proteins: Examples of IRP1, IRP2, HuR, AUF1, and Nrf2.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3604(2023).</li>
<li>Sui, H., Chen, Q., Imamichi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pulldown+assay+using+DNA%2FRNA-conjugated+beads+with+a+customized+competition+strategy%3A+An+effective+approach+to+identify+DNA%2FRNA+binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">A pulldown assay using DNA/RNA-conjugated beads with a customized competition strategy: An effective approach to identify DNA/RNA binding proteins.</a> MethodsX. 7, 100890(2020).</li>
<li>Chaparian, R. R., van Kessel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoter+pulldown+assay%3A+A+biochemical+screen+for+DNA-binding+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Promoter pulldown assay: A biochemical screen for DNA-binding proteins.</a> Methods Mol Biol. 2346, 165-172 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4200 TapeStation</td><td>אג'ילנט</td><td>G2991A</td><td></td></tr><tr><td>אקרידין אורנג'</td><td>Invitrogen</td><td>A1301</td><td></td></tr><tr><td>AMPure XP&nbsp;</td><td>בקמן קולטר</td><td>A63881</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS NEO מפריד</td><td>מילטני</td><td>130-120-327</td><td>ממיין תאים מגנטיים במהירות גבוהה</td></tr><tr><td>אוליגואים ביוטיניליים</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>סיגמא</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>מונה תאים פלואורסצנטיים של Cellometer K2</td><td>Revvity</td><td>CMT-K2-MX-150</td><td>מונה תאים פלואורסצנטיים</td></tr><tr><td>חדרי ספירה של CHT4</td><td>Revvity</td><td>CHT4-SD100-002</td><td></td></tr><tr><td>ננו-חרוזי CytoSinct CD4</td><td>GenScript</td><td>L00863-1</td><td></td></tr><tr><td>ננו-חרוזי CytoSinct CD8</td><td>GenScript</td><td>L00864-1</td><td></td></tr><tr><td>dNTP</td><td>אג'ילנט</td><td>200418-51</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads M-280 Streptavidin</td><td>Invitrogen</td><td>11206D</td><td></td></tr><tr><td>מגנט DynaMag-2</td><td>Invitrogen</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 0.5 M, pH 8.0</td><td>Invitrogen</td><td>15575-038</td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>מרק</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>אלקטרופורטור ExPERT Atx</td><td>MaxCyte</td><td>ExPERT ATx</td><td></td></tr><tr><td>פיקול-פאקה</td><td>ציטיבה</td><td>17544203</td><td></td></tr><tr><td>פילטרופור S 0.2 ומיקרו; m</td><td>סארסטדט</td><td>83,18,26,001</td><td></td></tr><tr><td>GenCRISPR Ultra NLS-Cas9-Research</td><td>GenScript</td><td>Z03621-1</td><td></td></tr><tr><td>בופר הרקולאז 5X</td><td>אג'ילנט</td><td>600675-52</td><td>בופר 5X</td></tr><tr><td>אנזים מיזוג הרקולאז II</td><td>אג'ילנט</td><td>600679-51</td><td>DNA פולימראז</td></tr><tr><td>IL-15</td><td>מילטני</td><td>130-095-765</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>מילטני</td><td>130-095-362</td><td></td></tr><tr><td>מאסטרסייקלר X50a</td><td>אפנדורף</td><td>6313HG006059</td><td></td></tr><tr><td>בופר אלקטרופורציה של MaxCyte</td><td>ציטיבה</td><td>EPB1</td><td></td></tr><tr><td>NdeI</td><td>ניו אינגלנד ביולאבס</td><td>R0111L</td><td></td></tr><tr><td>רקמת נוקלאוספין</td><td>מאשרי-נגל</td><td>74,09,52,250</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>גיבקו</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>פוליברן</td><td>מרק</td><td>TR-1003-6</td><td></td></tr><tr><td>מבנים</td><td>תרמופישר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרופידיום יוד</td><td>סיגמא</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>PspXI</td><td>ניו אינגלנד ביולאבס</td><td>R0656S</td><td></td></tr><tr><td>פורומיצין</td><td>גיבקו</td><td>A11138-03</td><td></td></tr><tr><td>פלואורומטרי קיוביט 3.0</td><td>Invitrogen</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת DNA של קיוביט HS</td><td>Invitrogen</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>מכלול עיבוד באר סטרילית R-50x3</td><td>MaxCyte</td><td>LM243882</td><td></td></tr><tr><td>T Cell TransAct אנושי</td><td>מילטני</td><td>130-111-160</td><td>מגיב גירוי תאי T</td></tr><tr><td>תחנת טייפ HSD1000</td><td>אג'ילנט</td><td>5067-5585</td><td></td></tr><tr><td>TEXMACS</td><td>מילטני</td><td>130-097-196</td><td>מדיום גדילה של תאי T</td></tr><tr><td>בופר טריס, 1.0 מטר, pH 8.0, דרגת ביולוגיה מולקולרית</td><td>EMD מיליפורה</td><td>648314</td><td></td></tr><tr><td>מים, לביולוגיה מולקולרית, DNAse, RNAse וללא פרוטאז</td><td>תרמו-סיינטיפיקי</td><td>327390010</td><td></td></tr></tbody></table>

שיפור מסכי crispr-cas9 בתאי car t – שיטה משופרת להכנת ספרייה

Improving CRISPR-Cas9 Screens in CAR T Cells: A Refined Method for Library Preparation

שיפור מסכי CRISPR-Cas9 בתאי CAR T – שיטה משופרת להכנת ספרייה

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have demonstrated remarkable efficacy in several hematological malignancies, yet their success has not ...

improving-crispr-cas9-screens-car-t-cells-refined-method-for-library

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

הסרטון מתאר תהליך ליצירת תאי CAR T מהונדסים גנטית באמצעות מערכת CRISPR-Cas9. הדבקת תאי T ב-CRISPR וב-CAR lentiviruses גורמת לשינויים בגן המטרה ולסינתזה של קולטן אנטיגן כימרי או CAR, מה שמוביל בסופו של דבר להיווצרות תאי CAR T מהונדסים גנטית.

שינוי גנטי של תאי CAR T באמצעות מערכת CRISPR-Cas9

זה הפרוטוקול מתאר בפירוט הדור של תאי גזע pluripotent המושרה ללא טביעת רגל (iPSCs) מתאי הלבלב האנושי בתנאים ללא מזין, ואחריו עריכה באמצעות ribonucleoproteins CRISPR/Cas9 ואפיון שונה תא בודד שיבוטים.

דור יעיל ועריכה של נטול מזין IPSCs מתאי הלבלב האנושי באמצעות מערכת CRISPR-Cas9

CRISPR-Cas היא טכנולוגיה רבת עוצמה להנדס הגנום מורכבים של צמחים ובעלי חיים. כאן, אנחנו פירוט נוהל לעריכת ביעילות הגנום האנושי באמצעות endonucleases רשויות אישורים שונים. אנחנו מדגישים שיקולים חשובים ופרמטרים עיצוב כדי למטב את יעילות העריכה.

הגנום עריכה בשורות תאים בתרבית של שימוש CRISPR-Cas

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי למטב את CRISPR-Cas9 כדי להשיג הם ברמת פירוט גבוהה ללא אובדן פעילות--היעד. אנו משתמשים בגישה אבולוציה מכוונת נקרא צלף מסך כדי למצוא. את המוטציה Cas9 עם התכונות הרצויות. צלף-Cas9 היא תואמת RNAs יחיד-מדריך קטום ו משלוח בתבנית ribonucleoprotein, ידועים אסטרטגיות להשגת specificities גבוהה יותר.

באמצעות צלף-Cas9 כדי למזער את ההשפעות את המטרה של CRISPR-Cas9 ללא אובדן פעילות--היעד באמצעות אבולוציה מכוונת

ספרייה CRISPR/sgRNA הוחל כדי לחקור חלבונים. עם זאת, הכדאיות של ספרייה sgRNA לחשוף את הפונקציה של גבול CTCF ב הכונה נשאר נחקרו. כאן, אנו מתארים ספרייה ספציפית sgRNA לוקוסים HOX התירי את הפונקציה של גבולות CTCF HOX לוקוסים.

HOX לוקוסים Focused CRISPR/sgRNA ספריית הקרנת זיהוי קריטי CTCF גבולות

CRISPR-Cas9 הטכנולוגיה מספקת שיטה יעילה בדיוק לערוך את הגנום היונקים בסוג תא כלשהו ומייצג את האמצעים הרומן לבצע מסכי גנטי רחב הגנום. פרוטוקול מפורט לדון בצעדים הנדרשים עבור ביצועים מוצלחים של מסכי CRISPR-Cas9 הגנום הרחב מסופק כאן.

מסכי גנטי מבוססי CRISPR במאגר תאים ממיונקים

כתב יד זה מתאר גישה מבוססת הגנום בקנה מידה מבוססי לזהות קולטן מסחטות-ליגניות ואינטראקציות.

זיהוי של פני שטח התא באמצעות הגנום בקנה מידה CRISPR/Cas9 מסכים גנטיים

כאן אנו מתארים מתודולוגיית הקרנה מהירה וישירה vivo CRISPR /Cas9 באמצעות אולטרסאונד מונחה זריקות lentiviral עוברי הרחם כדי להעריך בו זמנית פונקציות של מספר גנים בעור וחלל הפה של עכברים immunocompetent.

ב Vivo CRISPR / Cas9 הקרנה בו זמנית להעריך תפקוד גנים בעור העכבר וחלל הפה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לעריכת גנים בתאי T אנושיים ראשוניים באמצעות טכנולוגיית CRISPR Cas לשינוי תאי CAR-T.

ייצור תאי CAR-T מהונדסים על-ידי CRISPR האנושי

המאמר מתאר פרוטוקול ליישום מודל in vitro לתשישות כדי להשלים מסך נוקאאוט CRISPR כלל גנומי בתאי T קולטן אנטיגן כימרי בריא מתורם.

ביצוע מסך CRISPR רחב גנום במבחנה בתאי T של קולטן אנטיגן כימרי

חקור פרוטוקול משופר לסקרינג CRISPR-Cas9 בתאי CAR T אנושיים. השיטה משתמשת בעיכול אנזימטי ושליפה סלקטיבית לשיפור שחזור sgRNA מ-DNA גנומי, ומאפשרת זיהוי מהימן של רגולטורים גנטיים לשיפור תרפיות CAR T.

שיפור מסכי CRISPR-Cas9 בתאי CAR T – שיטה משופרת להכנת ספרייה

גלה סרטונים נוספים