Name: גוואג אורלי בגורי עכבר יילודים והערכה תפקודית של שלמות מחסום המעי באמצעות תאי שימוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: למדו הערכת שלמות מחסום המעי בגורי עכברים יילודים באמצעות גוואג' אורלי ותאי שימוש. פרוטוקול זה מאפשר חקירת השפעת מולקולות כמו microRNA על תפקוד מחסום המעי בתקופת ההתפתחות המוקדמת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Di Vincenzo, F., Del Gaudio, A., Petito, V., Lopetuso, L. R., Scaldaferri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+intestinal+permeability%2C+and+systemic+inflammation%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Intern+Emerg+Med%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, intestinal permeability, and systemic inflammation: A narrative review.</a> Intern Emerg Med. 19 (2), 275-293 (2024).</li>
<li>Mu, Q., Kirby, J., Reilly, C. M., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leaky+gut+as+a+danger+signal+for+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Leaky gut as a danger signal for autoimmune diseases.</a> Front Immunol. 8, 598(2017).</li>
<li>Sorini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+gut+barrier+integrity+triggers+activation+of+islet-reactive+T+cells+and+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of gut barrier integrity triggers activation of islet-reactive T cells and autoimmune diabetes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (30), 15140-15149 (2019).</li>
<li>An, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+intestinal+mucosal+barrier+in+autoimmune+disease%3A+a+potential+target%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of intestinal mucosal barrier in autoimmune disease: a potential target.</a> Front Immunol. 13, 871713(2022).</li>
<li>Picco, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+gut+permeability+in+juvenile+chronic+arthritides%3A+a+multivariate+analysis+of+the+diagnostic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Increased gut permeability in juvenile chronic arthritides: a multivariate analysis of the diagnostic parameters.</a> Clin Exp Rheumatol. 18 (6), 773-778 (2000).</li>
<li>Dunleavy, K. A., Raffals, L. E., Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+dysfunction+in+inflammatory+bowel+disease%3A+underpinning+pathogenesis+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier dysfunction in inflammatory bowel disease: underpinning pathogenesis and therapeutics.</a> Dig Dis Sci. 68 (12), 4306-4320 (2023).</li>
<li>Borrego-Ruiz, A., Borrego, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early-life+gut+microbiome+development+and+its+potential+long-term+impact+on+health+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome+Res+Rep%22%5BJournal%5D)">Early-life gut microbiome development and its potential long-term impact on health outcomes.</a> Microbiome Res Rep. 4 (2), 20(2025).</li>
<li>Di Costanzo, M., De Paulis, N., Biasucci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butyrate%3A+A+link+between+early+life+nutrition+and+gut+microbiome+in+the+development+of+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Life+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Butyrate: A link between early life nutrition and gut microbiome in the development of food allergy.</a> Life (Basel). 11 (5), 384(2021).</li>
<li>Kindgren, E., Ahrens, A. P., Triplett, E. W., Ludvigsson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+gut+microbiota+and+environment+associate+with+juvenile+idiopathic+arthritis+many+years+prior+to+disease+onset%2C+especially+in+genetically+vulnerable+children%5BTitle%5D)+AND+%22eBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Infant gut microbiota and environment associate with juvenile idiopathic arthritis many years prior to disease onset, especially in genetically vulnerable children.</a> eBioMedicine. 93, 104654(2023).</li>
<li>Borowitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+inflammatory+bowel+disease%3A+clues+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of inflammatory bowel disease: clues to pathogenesis.</a> Front Pediatr. 10, 1103713(2023).</li>
<li>Leete, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+age+on+the+progression+and+severity+of+type+1+diabetes%3A+potential+effects+on+disease+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Diab+Rep%22%5BJournal%5D)">The effect of age on the progression and severity of type 1 diabetes: potential effects on disease mechanisms.</a> Curr Diab Rep. 18 (11), 115(2018).</li>
<li>Francis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+studies+in+neonatal+mice+using+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Probiotic studies in neonatal mice using gavage.</a> J Vis Exp. (143), e59074(2019).</li>
<li>McClain, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+mouse+model%3A+review+of+methods+and+results%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neonatal mouse model: review of methods and results.</a> Toxicol Pathol. 29 (Suppl), 128-137 (2001).</li>
<li>Thomson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ussing+chamber+system+for+measuring+intestinal+permeability+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The Ussing chamber system for measuring intestinal permeability in health and disease.</a> BMC Gastroenterol. 19, 98(2019).</li>
<li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li>
<li>Westerhout, J., Wortelboer, H., Verhoeckx, K. Ussing chamber. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterhout%2C+J+%22The+Impact+of+Food+Bioactives+on+Health%3A+in+vitro+and+ex+vivo+models%22">The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models</a>. , (2015).</li>
<li>Hempstock, W., Ishizuka, N., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+intestinal+tight+junction+barrier+and+ion+permeability+in+native+tissue+by+Ussing+chamber+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of intestinal tight junction barrier and ion permeability in native tissue by Ussing chamber technique.</a> J Vis Exp. (171), e62468(2021).</li>
<li>Sjögren, E., Eriksson, J., Vedin, C., Breitholtz, K., Hilgendorf, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excised+segments+of+rat+small+intestine+in+Ussing+chamber+studies%3A+A+comparison+of+native+and+stripped+tissue+viability+and+permeability+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Excised segments of rat small intestine in Ussing chamber studies: A comparison of native and stripped tissue viability and permeability to drugs.</a> Int J Pharm. 505 (1), 361-368 (2016).</li>
<li>Moussaoui, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+intestinal+glucocorticoid+sensitivity+in+early+life+shape+the+risk+of+epithelial+barrier+defect+in+maternal-deprived+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in intestinal glucocorticoid sensitivity in early life shape the risk of epithelial barrier defect in maternal-deprived rats.</a> PLoS One. 9 (2), e88382(2014).</li>
<li>Gleeson, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enhanced+intestinal+permeability+of+infant+mice+enables+oral+protein+and+macromolecular+absorption+without+delivery+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">The enhanced intestinal permeability of infant mice enables oral protein and macromolecular absorption without delivery technology.</a> Int J Pharm. 593, 120120(2021).</li>
<li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+the+small+intestinal+mucosa+drives+age-dependent%2C+regio-selective+susceptibility+to+Escherichia+coli+K1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of the small intestinal mucosa drives age-dependent, regio-selective susceptibility to Escherichia coli K1 infection.</a> Sci Rep. 7 (1), 83(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x DPBS ללא Ca & מ"ג</td><td>דולבקוס</td><td>14200091</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן אנטי-HRP</td><td>האתר הביולוגי הנורדי</td><td>GTX10183</td><td>פרוקסידאז פרוקסידאז של עכבר מונוקלונלי [2H11]</td></tr><tr><td>לופה בינוקולרית</td><td>אולימפוס &nbsp;</td><td>SZ61</td><td>אין צורך במפרט.</td></tr><tr><td>פלט שחור עם 96 בארות שטוח</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td>137101</td><td>הלוחות חייבים להיות שחורים ומותאמים לקריאות פלואורסציה. יש להסיר את המכסה בזמן הקריאה.</td></tr><tr><td>BSA</td><td>מרק</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>עכברים C57BL/6J</td><td>נהר צ'ארלס</td><td>632C57BL/6J&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>מרק</td><td>2382</td><td></td></tr><tr><td>קשורה שקופה עם 96 בארים, קשוף שטוח תחתית גבוהה</td><td>קורנינג</td><td>9018</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-גלוקוז</td><td>מרק</td><td>G8270&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>H2O מזוקק</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-מניטול</td><td>מרק</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>FST</td><td>11445-12</td><td></td></tr><tr><td>מספריים עדינים</td><td>FST</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran 4Kd</td><td>FD4</td><td>TdB Labs</td><td>רגיש לפירוק פוטוגרפיטי.</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>מינרוב</td><td>20 031 01</td><td></td></tr><tr><td>HRP</td><td>מרק</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2, 6H2O</td><td>מרק</td><td>M2670&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מילי-קיו H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת ושימוש ב-P2300 EasyMount לשכות</td><td>כלים פיזיולוגיים</td><td>EM6-C-CE</td><td>מערכות, תאים וסליידרים חייבים להיות תואמים כולם.</td></tr><tr><td>סליידר תא Ussing P2306</td><td>כלים פיזיולוגיים</td><td>PI-P2306</td><td>דגמים שונים של סליידרים זמינים לגדלים וצורות שונות של רקמות.</td></tr><tr><td>ערכת מצע פרוקסידאז פלואורוגנית של QuantaBlu</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td>15169</td><td></td></tr><tr><td>מחטים רב-פעמיות עם קצה עגול</td><td>FST</td><td>18061-24</td><td>24 גייג', קצה בקוטר 1.25 מ"מ, קצה עגול. יש לכבס במים סטריליים, אתנול 70% ולהיות מאוטוקלב לפני השימוש.</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>מרק</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>פחמת נתרן</td><td>מרק</td><td>S7795</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר</td><td>TECAN&nbsp;</td><td>Spark 10M</td><td>נדרש קורא לוחות עם רכישה עליונה אם משתמשים בלוחות השחורים 137101.</td></tr><tr><td>טווין-20</td><td>מרק</td><td>P7949</td><td></td></tr></tbody></table>

גוואג' אורלי בגורי עכבר יילודים והערכה תפקודית של שלמות מחסום המעי באמצעות תאי שימוש

Oral Gavage in Neonatal Mouse Pups and Functional Assessment of Gut Barrier Integrity Using Ussing Chambers

כימות עקומה סטנדרטית וריכוז באר הערך הממוצע של כדורים ריקים הופחת מכל באר בפלטה. עם ערכי הספיגה בציר Y וריכוזים בציר X, נוצרה עקומה סטנדרטית באמצעות פונקציית "אינטרפולציה של עקומה סטנדרטית" מפריזמת GraphPad. אם כל הנקודות הסטנדרטיות מיושרות, מודל ה"קו" מספק את התוצאות הטובות ביותר. חלופה נוספת היא מודל "סיגמואידלי, 4 PL, X הוא ריכוז" מציע גמישות ודיוק רב עם אינטרפולציה עקומה סטנדרטית לא ליניארית (איור 6). ערכי הספיגה של דגימות בציר Y הודבקו מתחת לתקן והחזירו את הריכוזים מ...

Growing evidence underscores the importance of the first 1,000 days of life in shaping the gut-microbiome axis. This early-life window is critical in the ...

oral-gavage-neonatal-mouse-pups-functional-assessment-gut-barrier

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ileus לאחר הניתוח (POI) הוא סיבוך של ניתוח בטן מוביל לתחלואה ואשפוז ממושך. בגלל אסטרטגיות מניעות או טיפול חסרות מחקר התעצם הוא הכרחי. לכן הקמנו מודל עכבר סטנדרטי וריאלי כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של POI וללמוד אפשרויות טיפוליות פוטנציאליות.

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בתכשירי רקמת מעיים שנכרתו או "שקי מעיים" כמודל ex vivo של תפקוד מחסום המעי. מודל זה עשוי לשמש להערכת שלמות מחסום האפיתל ושכבת הג'ל הרירית באתרי מעיים ספציפיים במודלים של מחלות עיכול בבעלי חיים.

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

מחקר זה מפרט את תהליך gavaging כמויות מדויקות של פרוביוטיקה לעכברים neonatal. הסידור ניסיוני אופטימלי כדי לכלול, אך אינה מוגבלת פרוביוטיקה מינון, שיטות ניהול, כימות של חיידקים במעיים.

פרוביוטיקה מחקרים בעכברים Neonatal באמצעות Gavage

תוך ניצול של מיקרוסקופ תוך-ויטאל, השיטה המוצגת כאן מאפשרת הדמיה בזמן אמת של שפיכת תאי אפיתל במעיים בבעלי חיים חיים. לכן, רירית מעיים מוכתמת topically (acriflavine ו rhodamineB-dextran) של עכברים מרדימים הוא תמונה עד רזולוציה של תא יחיד באמצעות מיקרוסקופית confocal.

גישה תוך-ויטאלית המבוססת על מיקרוסקופיה להערכת חמלה במעיים וביצועי שפיכת תאים אפיתל

תפקוד מחסום אפיתל מעיים Dysregulated ותגובות חיסוניות הם סימני היכר של מחלות מעי דלקתיות שנותרו נחקרות בצורה גרועה בשל מחסור במודלים פיזיולוגיים. כאן, אנו מתארים מודל לולאת מעיים של עכברים המעסיק מקטע מעיים בעל כלי דם וחיצוניים כדי לחקור חלחיליות רירית וגיוס לויקוציטים ב- vivo.

הערכה תפקודית של חלחיליות מעיים ונדידה טרנס-אפיתלית נויטרופילית בעכברים באמצעות מודל לולאת מעיים מתוקננת

אפיתל מעיים מעניק לא רק ספיגה תזונתיים אלא הגנה מפני חומרים מזיקים. הצומת הבין-תאי האפיתל ביותר אפיתל, כלומר, הצומת ההדוק, מווסת חדירה פרה-תאית וחדירות יונים. כאן מתואר פרוטוקול להכנת יריעות הרירית והערכה של הסלקטיביות היונית של צמתים הדוקים באמצעות טכניקת תא ברית המועצות.

הערכה פונקציונלית של מחסום צומת הדוק מעיים וחדירות יון ברקמה המקומית על ידי טכניקת הקאמרית של ברית המועצות

נמק enterocolitis (NEC) היא המחלה הקשה ביותר במערכת העיכול (GI) המתרחשת לעתים קרובות אצל פגים, במיוחד תינוקות במשקל לידה נמוך מאוד, עם תמותה גבוהה ופתוגנזה לא ברורה. הגורם ל- NEC עשוי להיות קשור לחריגות במערכת הרגולציה החיסונית הדלקתית. מודל בעלי חיים NEC הוא כלי הכרחי למחקר חיסוני מחלות NEC. מודלים בעלי חיים NEC בדרך כלל להשתמש C57BL / 6J עכברי יילודים; עכברי יילודים BALB / c משמשים לעתים רחוקות. מחקרים קשורים הראו כי כאשר עכברים נגועים, בידול התא Th2 הוא דומיננטי בעכברים BALB / c לעומת עכברי...

מודל עכבר BALB /c יילודים של דלקת אנטרוקוליטיס נמק

כדי לחקור כיצד המעי הדק מטפל בחלקיקים בגדלים שונים, שינינו שיטת in vivo מבוססת כדי לקבוע את המעבר במעי הדק.

חקר מורין מעיים קטנים מכנוסנס של חלקיקים לומינליים

במחקר הנוכחי, דקסטרן פלואורסצאין-איזותיוציאנט-מסומן (FITC) מנוהל לעכברים דרך הפה כדי להעריך את חדירות המעי הן in vivo והן בדגימות פלזמה וצואה. מכיוון שתפקוד מחסום המעי מושפע בתהליכי מחלה רבים, ניתן להשתמש בבדיקה ישירה וכמותית זו בתחומי מחקר מגוונים.

הערכה של שלמות מחסום המעי בעכברים באמצעות דקסטרן עם תווית פלואורסצאין-איזותיוציאנט

פרוטוקול זה מתאר מודל עכבר יילודים של דלקת מעיים נמקית (NEC) ובידוד לאחר מכן של תאי חיסון למינה פרופריה מהמעי הדק של עכברי היילוד.

מודל עכבר יילודים של דלקת מעיים נמקית ובידוד למינה פרופריה לפרופיל תאי חיסון

מטרת הפרוטוקול היא לספק גישה סטנדרטית להערכה כמותית של שלמות מחסום האפיתל החניכיים בעכברים על ידי יישום מקומי של דקסטרנים מסומנים בפלואורסצנציה בגדלים מולקולריים משתנים על פני החניכיים ב-vivo, ואחריהם הדמיה אקס-ביבו באמצעות מערכת מיקרוסקופיה של פוטון יחיד.

הערכה פונקציונלית של מחסום אפיתל חניכיים בעכברים באמצעות מעקבים פלואורסצנטיים

למדו הערכת שלמות מחסום המעי בגורי עכברים יילודים באמצעות גוואג' אורלי ותאי שימוש. פרוטוקול זה מאפשר חקירת השפעת מולקולות כמו microRNA על תפקוד מחסום המעי בתקופת ההתפתחות המוקדמת.

גוואג' אורלי בגורי עכבר יילודים והערכה תפקודית של שלמות מחסום המעי באמצעות תאי שימוש

גלה סרטונים נוספים