Name: פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: למד פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים באמצעות עיכול אנזימטי ברצף. השיטה מספקת תאים בעלי חיות גבוהה ושלמות RNA מצוינת לניתוח scRNA-seq וציטומטריית זרימה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
<li>Delmonte, D. W., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the cornea.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+management%3Atargeting+the+ocular+surface+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).</li>
<li>Dou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identity+of+human+limbal+heterogeneity+involved+in+corneal+homeostasis+and+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege.</a> Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).</li>
<li>Adan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3Abasic+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry:basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Altshuler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+limbal+epithelial+stem+cell+populations+mediate+corneal+homeostasis+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).</li>
<li>Kaplan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+transcriptome+helps+define+the+limbal%2Fcorneal+epithelial+stem%2Fearly+transit+amplifying+cells+and+how+autophagy+affects+this+population%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).</li>
<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
<li>Espana, E. M., Birk, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition%2C+structure+and+function+of+the+corneal+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Composition, structure and function of the corneal stroma.</a> Exp Eye Res. 198, 108137(2020).</li>
<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>אלקסה פלואר 594 נגד ארנב לחמור</td><td>אבקאם</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>אנטיקרטין</td><td>אבקאם</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-פנציטוקרטין</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>סטריליזר אוטוקלב</td><td>אן שן</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין V. סרום בקר</td><td>סולרביולוגיה</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>מסנן תא</td><td>NEST</td><td>258369</td><td>40 & mu; m</td></tr><tr><td>מכונה צנטריפוגלית</td><td>אפנדורף AG</td><td>22331 המבורג</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז A</td><td>רוש</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ קונפוקלי</td><td>&nbsp; אוברכוכן</td><td>צייס LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>לוח ספירה</td><td>מריינפלד</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגלי</td><td>NEST</td><td>620611</td><td>2 מ"ל, 50 מ"ל</td></tr><tr><td>קאברסליפ</td><td>מריינפלד</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>סולרביולוגיה</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ ניתוח</td><td>קרל צייס</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; מדיה</td><td>גיבקו</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>סולרביולוגיה</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fetal&nbsp; bovine&nbsp; סרום</td><td>גיבקו</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סולרביולוגיה</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>גיבקו</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה אפידרמלי בעכבר</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>כירורגי עיניים&nbsp; מלקחיים</td><td>דומוט</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים עיניים</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>תנור</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין & סטרפטומיצין</td><td>גיבקו</td><td>15070063</td><td>100 מ"ל</td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>NEST</td><td>705201</td><td>60 מ"מ</td></tr><tr><td>מלח עם בופר עם פוספט</td><td>סולרביולוגיה</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>חממה תרמוסטטית</td><td>תרמו פישר סיינטיפיק</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>טריטון-X 100</td><td>סולרביולוגיה</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue&nbsp;</td><td>סולרביולוגיה</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין/EDTA&nbsp;</td><td>גיבקו</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>שולחן ניקוי אולטרה-</td><td>יו צ'י</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4% פאראפורמלדהיד</td><td>סולרביולוגיה</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מתאר פשוטים, חוסך זמן טכניקה ניתוק אוטומטי רקמות באמצעות Dissociator gentleMACS להכין תא בודד השעיות של splenocytes העכבר.

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים aggitation רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi Dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת nerual הוא הסביר.

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

בסרטון זה נדגים כיצד לבודד בתאי גזע הרשתית מן אפיתל ריסי העין העכבר לגדל אותם בתרבית כדי ליצור כדורים רשתית משובט. התחומים כי הם מבודדים להחזיק את המאפיינים העיקריים של בתאי גזע: התחדשות עצמית multipotentiality.

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

סרטון זה מדגים את הרבייה של תאי גליה מולר (MG) שבודדו מרשתיות עכבר. הרשתית מנותקת לתרחיף חד-תאי באמצעות אנזימי עיכול. לאחר מכן מגדלים תאים בתווך עם גורם גדילה המקדם התרבות תאי MG ותמותת תאים עצביים. תאי עצב מתים מוסרים תוך כדי מעבר, ותאי MG גדלים לניתוח נוסף.

הקמת תרבית תאי גליה מולר המתקבלת מרשתיות עכבר

סרטון זה מדגים את ההליך לבידוד תאי גנגליון רשתית ראשוניים (RGCs) באמצעות ציטומטריית זרימה. שיטה זו מאפשרת מחקר עתידי של RGCs, במטרה להבין טוב יותר את הירידה הגדולה בחדות הראייה הנובעת מאובדן RGCs פונקציונליים במחלות נוירודגנרטיביות.

בידוד תאי גנגליון רשתית מורין באמצעות מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות

העור הוא ביתה של רשת תאי חיסון מורכבת. אנו מתארים מתודולוגיה יעילה לעיכול עור עכבר, מחלקים שונים בגוף החיה, על מנת לקבל תרחיף חד-תאי ולנתח את אוכלוסיות הלויקוציטים השונות השוכנות בעור על ידי זרימה ציטומטרית.

הכנת תא בודד השעיות עבור ניתוח Cytofluorimetric מאזורים העור עכבר שונים

מיליוני אנשים סובלים ממחלות ניוונית של הרשתית הגורמות עיוורון בלתי הפיך. מרכיב נפוץ של רבים ממחלות אלה הוא אובדן תאי הגנגליון ברשתית (RGCs). פרוטוקול מפורט זה מתאר את הבידוד של RGCs Murine העיקרי על ידי בחירה חיובית ושלילית עם cytometry הזרימה.

בידוד של תאים ראשיים Murine הרשתית גנגליון (RGCs) על ידי זרימת cytometry

אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE) הוא אפיתל רב תפקודי של העין. כאן אנו מציגים פרוטוקול ליצירת תרביות תאים ראשי נגזר RPE מאתר...

התא העיקרי של אפיתל הפיגמנט ברשתית העכבר תרבויות

המטרה של פרוטוקול זה היא לבודד keratinocytes עוריות מן העור העורבי של עכברים מבוגרים עבור מגוון של יישומים במורד הזרם כגון ביולוגיה מולקולרית, ביוכימיה, מיון תא מופעל פלואורסצנטית, ו העיקרי בשימוש בלתי מתורבת (למשל, clonogenic keratinocytes).

בידוד של העכבר Keratinocytes באפידרמיס ושלהם בתרבות הclonogenic של מבחנה

פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד תאי אנדותל רשתית לאחר הלידה הממוטבת לתפוקת התאים, טוהר וכדאיות. תאים אלה מתאימים לגישות ריצוף מהדור הבא.

בידוד תאי אנדותל רשתית מורין לריצוף הדור הבא

אפיתל פיגמנט ברשתית (RPE) פועל כמחסום מכריע בין הכורואיד לרשתית, ומקדם את בריאותם ותפקודם של סוגי תאי רשתית, כגון פוטורצפטורים. במאמר זה אנו מתארים פרוטוקול פשוט ויעיל לבידוד וטיפוח RPE של מורין בוגר.

שיטה פשוטה לבידוד ותרבית של תאי אפיתל פיגמנט ברשתית מעכברים בוגרים

למד פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים באמצעות עיכול אנזימטי ברצף. השיטה מספקת תאים בעלי חיות גבוהה ושלמות RNA מצוינת לניתוח scRNA-seq וציטומטריית זרימה.

פרוטוקול לאיסוף תלייה חד-תאית מקרנית עכברים

גלה סרטונים נוספים