Name: בדיקת חסמים פיזיולוגיים להעברת נגיפי ב כנימות שימוש Microinjection (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:16:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: למד טכניקת מיקרו-הזרקה לנגיפים בכנימות, המאפשרת מעבר ישיר לדם הפתוח ועקיפת מחסום המעי. שיטה זו מסייעת לחוקרים לחקור מנגנוני העברת נגיפים לצמחים ולהבין את השפעתם על בריאות הגידולים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבדוק אם כנימה מסוגל וקטור וירוס, אנו להאכיל את הכנימות על רקמות נגועים עבור 2 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, אנו מאפשרים את זה כדי להאכיל במפעל בריאה למשך 5 ימים. המפעל חיטוי אז אחרי 3 שבועות אנחנו מתחילים לחפש את התסמינים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר אנו מוצאים כי הכנימה לא יכול וקטור וירוס, אנחנו יכולים להעריך מי מבין 2 מחסומים היא לעצור את הנגיף באמצעות הליך microinjection. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הווירוס מוזרק ישירות לתוך hemocoel, ובכך לעקוף את מחסום המעיים הילוכים. </li></ol> בקר <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">ביקורות שנתי של ביולוגיה הצמח</a> לקבלת מידע נוסף על חסינות פרוטוקול צמח זה herbivory חרקים.

למחברים אין ניגודים ענייניים להצהיר עליהם.

בדיקת חסמים פיזיולוגיים להעברת נגיפי ב כנימות שימוש microinjection

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

תפוחי אדמה loafroll וירוס (PLRV), מן Luteoviridae משפחה מדביק צמחים solanaceous. זה מועבר על ידי כנימות, בעיקר, את הכנימה ירוק אפרסק. כאשר כנימה נגוע ניזון הצמח נגוע זה החוזים וירוס דרך השיפה המפעל. לאחר ingested, הנגיף חייב לעבור מהבטן חרקים hemolymph (דם החרקים) ולאחר מכן צריך לעבור דרך בלוטת הרוק, על מנת להיות מועבר בחזרה למפעל חדש. כנימה עשוי להימשך עד וירוסים שונים כאשר לועס צמח, אולם רק חלק קטן יעבור דרך המעי בלוטת הרוק, שני המחסומים העיקריים להעברת להדביק צמחים ועוד. במעבדה, נשתמש בצמחים physalis ללמוד הילוכים PLRV. ב לארח זו, התסמינים מתאפיינים ירקון המגבילה ו interveinal (הצהבה של העלים בין הוורידים עם הוורידים הנותרים ירוק). וידאו אנו מציגים מדגים שיטה לביצוע microinjection כנימה על חרקים שאינם PLVR וקטור וירוסים בדיקות אם במעיים מונעת העברת נגיפי. וידאו אנו מציגים מדגים שיטה לביצוע microinjection כנימה על חרקים שאינם PLVR וקטור וירוסים בדיקות אם הבטן או בלוטות הרוק שמונע העברת ויראלי.

כנימות הם משדרים יעיל של וירוסים הצמח. Microinjection כנימה של הנגיף, ההליך נוכל להראות לכם היום, היא טכניקה המאפשרת לחוקרים להזרים וירוס ישירות hemocoel של הכנימה, לעקוף את המעיים, אחד 2 המחסומים העיקריים להעברת הנגיף באופן circulative. באותה טכניקה משמשת גם להזריק dsRNA עבור RNAi.

בדיקת חסמים פיזיולוגיים להעברת נגיפי ב כנימות שימוש Microinjection

נגיף גלגול עלי תפוח האדמה (PLRV), ממשפחת Luteoviridae, מדביק צמחים מסדרת הסולנאיים (solanaceous plants). הוא מועבר על ידי כנימות, ובעיקר על ידי הכנימה הירוקה של האפרסמון. כאשר...

אם הן משמשות כמנחלי וירוסים של צמחים יעילים, ובמידה ומדובר בהזרקה זעירה של וירוס, הפרוצדורה שנגלה לכם היום היא טכניקה המאפשרת לחוקרים להזריק וירוס ישירות לתאי ההמוlyמפה (hemos cell) של ה-AFib, ובכך לעקוף את מערכת העיכול, אחד משני המחסומים העיקריים להעברת וירוסים באופן מחזורי. שלום, אני ססיליה טמרין דהי, פוסט-דוקטורנטית במחלקה לפתולוגיה של צמחים באוניברסיטת קורנל. היום אראה לכם כיצד להזריק וירוס לתאי ההמוlyמפה של ה-AFI, וירוס שניתן לאחר מכן להנחילו למיני צמחים שונים.לדוגמה, צמח FE זה נגוע ב-PLRV, נגיף העלה של תפוח האדמה. ניתן לראות את ההבדל בין צמח בריא לצמח נגוע. התסמין הבולט ביותר הוא סקלרוזיס של הגבעול.PLRV הוא נגיף מסוג luthier המועבר על ידי APHIS בלימפה של החרק (hemolymph), המקבילה לדם ביונקים. כאשר APHIS שאינו נגוע ניזון מצמח נגוע, הוא נדבק בנגיף דרך נוזלי הצמח, כפי שניתן לראות כאן. לאחר הבליעה, הנגיף חייב לעבור ממערכת העיכול של החרק אל הלימפה, ולאחר מכן לעבור דרך בלוטות הרוק כדי שיועבר חזרה לצמח ה-ESE.ואם כי כך עשויים להיקלט וירוסים רבים בעת התזינות מצמח ESE, עם זאת, רק חלק קטן יותר יעבור דרך מערכת העיכול ובלוטת הרוק. אלו הם שני המחסומים העיקריים להעברה לצורך הדבקת צמחים נוספים לבדיקה. אם ה-AFI אינו מסוגל להוות וקטור לווירוס, אנו מאכילים את הכנימות ברקמה נגועה למשך יומיים, ולאחר מכן אנו מאפשרים להן להזין בצמח בריא למשך חמישה ימים.לאחר מכן מעשנים את הצמח, ולאחר שלושה שבועות אנו מתחילים לחפש תסמינים. כאשר אנו מוצאים AFib שאינו מסוגל להעביר את הנגיף כווקטור, אנו יכולים להעריך איזה מהשני המחסומים עוצר את הנגיף באמצעות הליך מיקרו-הזרקה, אותו אראה לכם היום. בהליך זה, הנגיף מוזרק ישירות לתוך תאי ההמולימפה שם, ובכך עוקפים את מחסום ההעברה במעי.אם כך, נתחיל, ואני אראה לכם כיצד לבצע מיקרו-הזרקה לחלקים של apex. אלו הן מחטי הזכוכית שבהן אנו משתמשים. אנו מושכים מחטי זכוכית ממגני זכוכית אלו באמצעות APU.זהו המיקרו-מזרק. לביצוע מיקרו-הזרקה של וירוס, אני אתחיל להכניס את המחט למחזיק המחטים.כעת אני פשוט מכניס את המחט וממקם אותה. עכשיו אטען את הנגיף לתוך המחט עד לקצה העליון של המזרק. כעת עלינו למקם את ה-AFI להזרקה מיקרוסקופית.כעת אני אקח כנימה (AFI) עם לחץ כאב ואני אניח אותה במחזיק הכנימות. באופן אידיאלי, אנסה להניח את גב הכנימה כנגד המחזיק כדי שתהיה לי גישה לחלק הבטני של הכנימה. אוקיי, מצוין.כעת ניתן להמשיך להזרקה מיקרוסקופית. אקבע כעת את מיקום המחט ואקרב אותה אל ה-AFib. כעת אבצע מגע בין המחט ל-AFib, וכדי לנקב את השלד החיצוני, הדבר הנכון ביותר הוא לנסות לנקב בין הסגמנטים בבסיס הרגליים.כעת אבצע את ההזרקה. אני לוקח את ה-AFI באמצעות המברשת ומעביר אותו אל נייר ההשחזור, שם אשאיר אותו להתאושש לרגע. עלינו לבצע גם הזרקה מיקרוסקופית של AFI ביקורת.הזרקה זעירה (micro injection) של ביקורת זו מבוצעת עם התמיסוף בלבד, ללא הווירוס. התמיסוף שבו אנו משתמשים הוא phosphate buffer בריכוז 0.1 וב-pH 7. אני אמקם את ה-A fit בצמח בריא, שבו אאפשר לו להתבסס למשך חמישה ימים, לאחר מכן אטפל בצמח ואמתין להופעת סימפטומים. לאחר ההזרקה הזעירה של ה-NA בעלי הגדיל התחתון, במהלך שבוע, נמדוד בכל יום את רמת הביטוי של הגן המטרה ב-afi.בצענו כעת מיקרו-הזרקה לכינקס שלא היה מסוגל להעביר את הנגיף. אם לאחר המיקרו-הזרקה הכינקס יהיה מסוגל להעביר את הנגיף, המשמעות היא שלכינקס זה היה מחסום במעי שחסם את הנגיף. מאידך, אם לא יתפתחו תסמינים, המשמעות היא שלכינקס זה יש מחסום חזק בבלוטות הרוק.כך הצגנו כיצד לבצע מזריקה מיקרוסקופית של נגיפים לתוך הכנימות. אותו הליך משמש להזרקה מיקרוסקופית של RNA גדילי לתוך הכנימות לצורך ביצוע RNAi (השתקה גנטית), שהיא טכניקה מעניינת המסייעת בחקר תפקוד גנים בכנימות. זהו כל התהליך של ההזרקה המיקרוסקופית.אני מקווה שתיהנו מכך ושהדבר יעזור לכם בניסוייכם. תודה רבה.

testing-physiological-barriers-to-viral-transmission-aphids-using

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה assay הוא הוכיח כי הבדיקות סובלנות של ניקוטין שני סוגים של כנימות אחד פושט צמחי טבק בתחום ואחד לא.

בדיקת סובלנות ניקוטין ב כנימות באמצעות ניסוי דיאט מלאכותית

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את שתי טכניקות microapplicator נהג להדביק של הזחלים lepidopteran עם baculovirus על מנת לקבוע יעילות חרקים.

הפרוטוקולים של זיהום Microapplicator בסיוע של הזחלים Lepidopteran עם Baculovirus

בסרטון זה, אנו מתארים הליך לביצוע ננו-הזרקה של נגיף RNA חד-גדילי בעל חוש חיובי לזבובי דרוזופילה זכרים בוגרים ולאחר מכן חוקרים את התגובות האנטי-ויראליות שיזמו עקב הזיהום. ניתוח תגובת שרשרת פולימראז מזהה את הרגולציה של גנים ספציפיים בזבובים הנגועים המצביעים על הפעלת מסלולי תגובה חיסונית, כולל הפרעות RNA ואיתות JAK/STAT.

ננו-הזרקה נגיפית תוך-חזה לחקר אינטראקציות בין וירוס מארח בזבובים בוגרים

מוצג פרוטוקול של צביעה חיסונית שלמה על עוברי כנימות, בו מטופלים תנאים קריטיים להפחתת צביעת רקע והגברת חדירות הרקמות. תנאים אלה פותחו במיוחד לזיהוי יעיל של ביטוי חלבונים ברקמות העובריות של כנימות.

זיהוי של תנאים קריטיים לImmunostaining באפונה בכנימות עוברים: הגדלת רקמות חדירות והפחתת מכתים רקע

מימדיה Aphis nerii והצנרות על הגן מאוד צמחים ממשפחת dogbane (Apocyanaceae), ומספק הזדמנויות רבות ללמוד אינטראקציות צמח-חרקים. כאן, אנו מציגים סדרת פרוטוקולים עבור שמירה על צמח, כנימות עלה תרבויות, ואת הדור ניתוח של מולקולרית ונתונים - omic עבור nerii א.

שמירה על תרבויות ביולוגי מדידה ביטוי גנים ב Aphis nerii: מערכת Non-מודל עבור אינטראקציות צמח-חרק

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה microinjection לנו יש סטנדרטית, ומשמש מזה מספר שנים כדי לספק כמויות מסוימות של חומצות גרעין ישירות hemolymph של יתושים וזבובים הבית. פרוטוקול זה תוצאות בתמותה הזרקת מינימלית ומאפשר במינון בקורלציה מדידות של פוריות.

DsRNA לשחזור Microinjection, ההטלה Bioassay של יתושים וזבובים הבית

פרוטוקול זה מתאר כיצד להקים זיהום ויראלי ויוו דרוזופילה melanogaster באמצעות שיטת ננו-הזרקת טכניקות בסיסיות כדי לנתח וירוס-פונדקאי אינטראקציה.

הקמתה של זיהום נגיפי וניתוח של התערבות מארח-וירוס דרוזופילה Melanogaster

כאן אנו מתארים שני פרוטוקולים: ראשית להפצה, חילוץ, טיהור וכימות כמויות גדולות של חלקיקי נגיף שאינם עטופים בדבורי דבש, כולל שיטה להסרת גלמי דבורת הדבש ושנית לבדיקת ההשפעות של זיהום נגיפי באמצעות בדיקה ביולוגית של כלובים בתפוקה גבוהה הניתנת לחזרה גבוהה.

הכנת אינוקולום מועשר בנגיף לזיהום אוראלי של דבורי דבש (Apis mellifera)

מתודולוגיה זו, שכללה הזנה דרך הפה וזיהום בהזרקה תוך חזה, יכולה להעריך ביעילות את ההשפעה של מחסומי המעי התיכון ו / או בלוטת הרוק על זיהום arbovirus.

זיהום ויראלי ניסיוני ביתושים בוגרים על ידי האכלה אוראלית ומיקרו-הזרקה

אנו מתארים שיטה לאיסוף המולימפה הניתנת לכימות ביעילות מפרוקי רגליים קטנים לצורך ניתוח לאחר מכן.

שיטה מדויקת וניתנת לכימות לאיסוף המולימפה מפרוקי רגליים קטנים

פרוטוקול זה מציג מערכת ביו-אסאי אופטימלית של עלים מנותקים להערכת היעילות של פטריות אנטומופתוגניות (EPF) נגד כנימת החרדל (Lipaphis erysimi (Kalt.)), חרק פרתנוגנטי. השיטה מתארת את תהליך איסוף הנתונים במהלך ניסויים בצלוחית פטרי, ומאפשרת לחוקרים למדוד באופן עקבי את האלימות של EPF נגד כנימות חרדל וחרקים פרתנוגנטיים אחרים.

הערכת ההשפעה של פטריות אנטומופתוגניות נגד חרק פרתנוגנטי, כנימת חרדל, Lipaphis erysimi (Kalt.)

למד טכניקת מיקרו-הזרקה לנגיפים בכנימות, המאפשרת מעבר ישיר לדם הפתוח ועקיפת מחסום המעי. שיטה זו מסייעת לחוקרים לחקור מנגנוני העברת נגיפים לצמחים ולהבין את השפעתם על בריאות הגידולים.

בדיקת חסמים פיזיולוגיים להעברת נגיפי ב כנימות שימוש Microinjection

גלה סרטונים נוספים