גישה טכנית לניתוח מבני של תרכובת לא ידועה בנוזל פה של Huoxiang Zhengqi בהתבסס על ספקטרומטריית מסה של מלכודת יונים ליניארית

פותחה שיטת פיצול ספקטרומטריית מסה רב-שלבית לזיהוי ואפיון רכיבים מורכבים בנוזל הפה של Huoxiang Zhengqi. ספקטרומטריית מסה טנדם מסורתית אינה יכולה לפתור מבנים מורכבים לא ידועים. ספקטרומטריית מסה רב-שלבית מספקת פיצול עמוק יותר להבהרה מבנית מקיפה.

להכנת כרומטוגרפיה נוזלית בביצועים גבוהים, התחל בלחיצות כפולות על תוכנת Xcalibur כדי לפתוח אותה. לחץ על מוכן להורדה, ואז על שליטה ישירה. בחלון הקופץ, לחץ על עמודת מודול המשאבה והגדר אחוז B ל-50, אחוז C לאפס ואחוז D לאפס.

לחץ על כפתור המנוע כדי לעבור למצב הפעלה. לחצו על אפשרויות נוספות, הגדרו את הזרימה לחמישה מיליליטר לדקה ואת הזמן ל-180 שניות בחלון הקופץ. לחץ על מחיקה, ואז לחץ על ביצוע למרות האזהרה בחלון הקופץ.

חזור לחלון התוכנה הראשי ולחץ על תצוגת הגדרת רצף. לחץ על פתח כדי לייבא את התבנית הערוכה. לחץ קליק ימני על שם המתוד ולחץ על Open File כדי לפתוח את קובץ המתודה.

בחלון הראשי של התוכנה, הגדר את המסה הראשונה ליחס מסה למטען של 100 ואת המסה האחרונה ליחס מסה למטען של 1200. לחץ על שמור כדי לשמור את השיטה. לחץ על Run Sequence, בחר Standby במערכת ה-After Sequence, ואז לחץ על OK בחלון הקופץ.

חכה שהזרקת הדגימה תסתיים. לחץ על תצוגת מפת הדרך, ואז לחץ על אייקון דפדפן Qual כדי לפתוח את חלון דפדפן Qual. לחץ על 'פתח', בחר את קובץ הנתונים בפורמט RAW ולחץ כפול כדי לפתוח אותו.

לחץ קליק ימני על חלון הכרומטוגרמה ולחץ על טווחים. בחלק מסנן הסריקה, בחר ESI full MS. ובחלק של סוג העלילה, בחר TIC, ואז לחץ על אוקיי. התבונן בכרומטוגרמה היונית הכוללת המוצגת.

לחץ על כפתור הלחיצה בחלון ספקטרום המסה. בחלון הכרומטוגרמה, לחץ והחליק כדי לבחור אזור זמן עם השפע היחסי החזק ביותר. התבוננו ביוני ספקטרום המסה המתאימים ורשמו את ערכי יחס המסה למטען.

פתח את חלון ההגדרה של הכלים. מאתר את עמודת המסה ההורה של N שווה לשתי שורות והזן את ערך יחס המסה למטען שנרשם קודם. לחץ על שמור כדי לשמור את השיטה.

חזור לתצוגת הגדרת הרצף בחלון התוכנה, שנה את שם הקובץ ולחץ על שמור כדי לשמור את הרצף. לחץ על Run Sequence, ואז לחץ על OK בחלון הקופץ. חכה שהזרקת הדגימה תסתיים.

לך לחלון הדפדפן של Qual, לחץ על פתיחה, בחר את קובץ הנתונים RAW ולחץ פעמיים כדי לפתוח אותו. לחץ קליק ימני על חלון הכרומטוגרמה ולחץ על טווחים. בחלק מסנן הסריקה, בחר ESI מלא MS.In חלק סוגי הגרף, בחר TIC ולחץ על אישור כדי להציג את הכרומטוגרמה.

בחלון ספקטרום המסה, לחץ על כפתור הדחיפה. בחרו אזור זמן עם השפע היחסי החזק ביותר והתבוננו ביוני ספקטרום המסה. רשמו את ערכי יחס המסה למטען לשלב הבא של ספקטרומטריית המסה.

בחלון הגדרת המכשיר, מקם את עמודת המסה האב של ה-N שווה לשלוש שורות והזן את ערך יחס המסה למטען שנרשם קודם. לחץ על שמור כדי לשמור את השיטה. כפי שהודגם קודם, יש לחזור על תהליך צפייה בנתונים להשלמת הזרקת הדגימה והניתוח.

לאחר פתיחת קובץ הנתונים הגולמי, לחץ על כפתור הלחיצה בחלון ספקטרום המסה וצפה בשיא היונים המשתנים. בחלון הגדרת הכלים, לך לעמוד סוג הפעולה ולחץ על CID. לאחר מכן בחר PQD או ETD כדי לשנות את מצב ההתנגשות.

בעמודת אנרגיית ההתנגשות המנורמלת, לחץ על 35 ושנה אותה ל-50 כדי להתאים את אנרגיית ההתנגשות. צייר את יון ההורה ויוני הפרגמנטציה בתוכנת שרטוט, כולל מבנה היונים ההוריים, שם המורכבות ויחס מסה למטען. לדוגמה, זהה את השבר ביחס מסה למטען 461.15, ובחן את היון הקדום עם יחס מסה למטען 623.21 בספקטרום ספקטרומטריית המסה הטנדם.

חשב את הפרש המסה. נתח את הפיצול הנוסף של היון הביניים עם יחס מסה למטען 461.15. כדי ליצור יון מוצר עם יחס מסה למטען 315.09 בקוביית MS, יש לחשב את הפרש המסה בהתבסס על מיקום הקשר וניתוחי קישור של כל המקטעים.

הסיק את המבנה הסופי של התרכובת הלא ידועה עם יחס מסה למטען של 623.21. התרכובת הלא ידועה עם יחס מסה למטען של 623.21 איבדה יחידת הקזוזה אחת והניבה יון קטע עם יחס מסה למטען של 461.15. פיצול ספקטרומטריית מסה שלישונית של הביניים יצר ניאוביאכנגליקול עם יחס מסה למטען של 315.09 לאחר אובדן יחידת רמנוז אחת.

ספקטרומטריית מסה מרובעת של ניאוביאכנגליקול ייצרה יון קטע עם יחס מסה למטען של 135.09. מבנה התרכובת הלא ידועה הוסקה מדפוס השברים הרב-שלבי. התרכובות הלא ידועות עם יחס מסה למטען של 545.41 ו-365.12 הוסקו באותה שיטת פיצול.

פרוטוקול זה מאפשר ניתוח מפורט ואפיון מבני של תרכובות לא מוכרות יותר בעשבי מרפא ובתרופות פטנט סיניות. הבנה ברורה של מבנה הליבה של הרכיבים העיקריים חיונית לפיצול וניתוח מדויקים באמצעות פרוטוקול זה. הליך זה מאפשר פיתוח מאגר נתונים רב-שלבי לפיצול ספקטרומטריית מסה לשיפור זיהוי התרכובות וניתוח השוואתי.