Name: ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה Vivo ויראלי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-17T19:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 28 s
Description: למד שיטה יעילה להיסטוקלטורה ולשתל גן בזקיקי שיער באמצעות חלבון GFP זוהר. טכניקה זו מסייעת לחוקרים לעקוב אחר פעילות מקדמים וליישם טיפולי גן לטיפול באלופסיה ושינוי צבע שיער.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

לקבלת מידע נוסף על ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות transductionplease vivo לשעבר ויראלי, בקר <a href="http://www.springerprotocols.com/">הפרוטוקולים שפרינגר</a> .

לכותבים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

A correction was made to: <a href="http://www.jove.com/video/708">Targeted expression of GFP in the hair follicle using ex vivo viral transduction</a>. A revised abstract was republished due to a publisher error. The correct abstract is:
There are many cell types in the hair follicle, including hair matrix cells which form the hair shaft and stem cells which can initiate the hair shaft during early anagen, the growth phase of the hair cycle, as well as pluripotent stem cells that play a role in hair follicle growth but have the potential to differentiate to non-follicle cells such as neurons. These properties of the hair follicle are discussed. The various cell types of the hair follicle are potential targets for gene therapy. Gene delivery system for the hair follicle using viral vectors or liposomes for gene targeting to the various cell types in the hair follicle and the results obtained are also discussed. 
This replaced:
The hair follicle is a highly complex appendage of the skin containing a multiplicity of cell types. The follicle undergoes constant cycling through the life of the organism including growth and resorption with growth dependent on specific stem cells. The targeting of the follicle by genes and stem cells to change its properties, in particular, the nature of the hair shaft is, discussed. Hair follicle delivery systems are described, such as liposomes and viral vectors for gene therapy. The nature of the hair follicle stem cells is discussed, in particular, its pluripotency.

A correction was made to: <a href="http://www.jove.com/video/708">Targeted expression of GFP in the hair follicle using ex vivo viral transduction</a>. A revised abstract was republished due to a publisher error.

Erratum: Targeted Expression of GFP in the Hair Follicle Using Ex Vivo Viral Transduction

ביטוי ממוקד של ה-gfp ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה vivo ויראלי

Targeted Expression of GFP in the Hair Follicle Using Ex Vivo Viral Transduction

זקיק שיער הוא האיבר המורכב ביותר של העור המכילה ריבוי של סוגי תאים. הזקיק עובר אופניים קבוע דרך החיים של האורגניזם, כולל צמיחה resorption עם צמיחה תלויה בתאי גזע מסוים. המיקוד של זקיק ידי גנים בתאי גזע כדי לשנות את המאפיינים שלה, ובמיוחד את האופי של השערה הוא דן. זקיק שיער מערכות אספקת מתוארים, כגון ליפוזומים ו וקטורים ויראליים עבור ריפוי גנטי. האופי של זקיק השיער תאים גזע נדון, בפרט, pluripotency שלה.

ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה Vivo ויראלי

בזקיק השערה קיימים סוגי תאים רבים, כולל תאי מטריקס של השערה המכוונים ליצירת מוט השערה ותאי גזע שיכולים להוות את התחלה של מוט השערה...

זקיק השערה הוא נספח עור מורכב המורכב משישה גלילים קונצנטריים עם מספר סוגי תאים נבדלים המייצרים חלבונים ייעודיים ביותר. המחזוריות המתמשכת של זקיק השערה דרך שלבי הגדילה המובחנים שלו הופכת את הנספח למתאים לטיפול גנטי ממוקד, אשר עשוי לתקן התקרחות ואובדן פיגמנטציה של השיער. בסרטון זה, אנו מדגימים שיטה לתרבית היסטולוגית של שיער, גידול עור, והעברה של חלבון פלואורסצנטי ירוק לתוך זקיקי שערה ex vivo.טכניקת הטרנסדוקציה היעילה הזו שימושית למעקב אחר פעילות הפרומוטור של גנים שונים שמעניינים את החוקר באזורים שונים של הזקיק לאורך מחזור הצמיחה שלו. שמי רוברט הופמן. אני נשיא חברת Anti-Cancer Inc.היום נדגים בפניכם פרוצדורות עוצמתיות מאוד לטיפול גנטי בזקיקי שיער. פרוטוקול זה מתחיל בתרבית היסטו (histo culture) של עור, ולאחריה טיפול בקולגנאז. ראשית, מקריבים את העכברים שישה ימים לאחר הדילול, ועור הגב מוסר ברמת תת-העור (subcu).לאחר הסרת העור, מוסר הרקמה התת-עורית. לאחר מכן, שוטפים את העור ב-PBS נטול סידן ומגנזיום. בשלב זה, מועבר העור שנשחט למצע לאחר השטיפה ב-PBS.דגימות עור נחתכות לחתיכות קטנות של כ-one millimeter cubed. חלק מהדגימות מופרשות ומגודלות ב-RPMI 1640 וב-10% fetal bovine serum כביקורות לא מטופלות. שאר הדגימות מדוגרות ב-two mg per mil.תמיסת קולגנאז (Collagenase). לאחר עיכול הדגימות במצע RPMI למשך 45 דקות עד 3.75 שעות בטמפרטורה של 37°C, שוטפים אותן ב-PBS נטול סידן ומגנזיום. ניתן להדביק תרביות היסטולוגיות בנגיף לצורך טרנסדוקציית GFP. כעת, לאחר שהקולגנאז הפך את זקיקי השיער לנגישים יותר לנגיף, ניתן להשרות את זקיקי השיער.כדי לבטא GFP, הם נדבקים תחילה בנגיף אדנווירוס. לאחר מכן, פלסמיד הנושא GFP מתווסף לעור שעובד עם קולגנאז. תרביות היסטו בריכוז של 2.4 מיליון עד 5 מיליארד יחידות פלטפורמה למילי.לאחר הוספת הווירוס, התרביות מועברות לאינקובטור למשך שעה אחת עד שש שעות לאחר טרנסדוקציה ויראלית של GFP בתרביות רקמת עור (histo cultures), ובערך 24 שעות לאחר הקציר, ניתן להשתיל את הדגימות בעכברים מסוג nude או C 57 black six. לאחר מכן, ניתן להעריך את ביטוי ה-GFP באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית המבוצעת על תרביות הרקמה או על ידי הדמיה in vivo של העור המשתול. כדי לקבוע את יעילות הטרנסדוקציה של GFP, נקבע מספרם הכולל של זקיקי השיער ומספרם של זקיקי השיער החיוביים ל-GFP תחת מיקרוסקופיה בשדה בהיר ובפלואורסצנציה.מנותחים חמישה שדות מיקרוסקופ שנבחרו באופן אקראי המכסים שטח של 0.581 millimeters squared. עבור ביטוי GFP, נספרים לפחות 500 שערות לכל דגימה כדי לחשב את אחוז זקיקי השערה החיוביים ל-GFP. זקיקי שערה שבהם GFP מזוהה בכל חלק בבצל השערה או בגזע השערה נספרים כחיוביים ל-GFP.הצגנו בפניכם שיטה יעילה ביותר להחדרה של GFP לזקיקי שיער, שתהיה שימושית ביותר עבור טיפול גנטי. ידע זה הוא בעל חשיבות קלינית כיוון שיש לו השלכות על ריפוי אלפציה (הקרחה), מניעת אלפציה הנגרמת מחסמי כימותרפיה, ושינוי קבוע של צבע השיער. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

targeted-expression-gfp-hair-follicle-using-ex-vivo-viral

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מציגים טכניקה lentiviral מניפולציה גנטית להדמיה של האקסון נוירון יחיד חושי הריח arborization מסוף...

Lentivirus בתיווך ויזואליזציה מניפולציה גנטית של עצב סנסורי חוש הריח In vivo</em

ברזולוציה של זמן ומרחב של מניפולציות גנטיות קובע את הספקטרום של תופעות ביולוגיות כי הם יכולים להפריע. כאן אנו משתמשים ובזמן מרחבית...

מיקוד Bulb נוירונים חוש הריח שימוש משולב In vivo Electroporation ו Gal4 מבוסס Enhancer מלכודת קווי דג הזברה

ניתוח רקמות ספציפית של מודל התחדשות זקיקי שיער באמצעות lentivirus לתווך רווח או פסד--of-פונקציה.

ניתוח גנטי מהיר של איתות אפיתל-mesenchymal במהלך התחדשות שיער

כאן אנו מפתחים את הכלים הדרושים...

Ex vivo הדמיה חיה של חלוקות תא יחיד בNeuroepithelium מאוס

Source: Tang, N., et al. Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the clonal isolation and PCR-based screening of recombinant herpesvirus following site-specific excision of a GFP marker. Fluorescence-activated cell sorting is used to isolate non-fluorescent infected cells, and junction PCR confirms retention of the target gene in GFP-negative clones.

Clonal Isolation and PCR Screening of GFP-Excised Recombinant Herpesvirus Retaining the Target Gene

אנו מתארים שיטה לאפיון הטופוגרפיה התפקודית והתכונות הסינפטיות של מעגלי המוח הקדמי באמצעות גישה אופטוגנטית לגירוי אוכלוסיות עצביות במבחנה.

Photostimulation לייזר לסריקת של מעגלים מוח קדמי ממוקדים Optogenetically

העור הוא רקמת מטרה אחת של הפתוגן האנושי הרפס סימפלקס וירוס סוג 1 (HSV-1). כדי לחקור את מסלול הפלישה של HSV-1 לרקמה, הקמנו מודל זיהום ex vivo של יריעות אפידרמיס של עכברים המייצגות את שכבת העור החיצונית ביותר.

זיהום Ex Vivo של Murine אפידרמיס עם סוג וירוס הרפס סימפלקס 1

אנו מתארים טכניקה לתייג נוירונים והתהליכים שלהם באמצעות זריקות אנטרוגרדית או נותב מדרדר לגרעיני מוח באמצעות הכנה במבחנה. אנחנו שונה בשיטה הקיימת שלי n המבחנה electroporation נותב על ידי ניצול של שכותרתו fluorescently מוטציות עכבר וציוד אופטי בסיסי כדי להגדיל את דיוק תיוג.

Explants מוח מונחי לייזר עצבי איתור ב

הציגו כאן היא שיטת צינור רולר ששונה culturing, לסירוגין דימות ברזולוציה של המוח מכרסמים פרוסות בשבועות רבים עם שינוי מיקום מדויק על photoetched coverslips. הכדאיות עצביים, מורפולוגיה פרוסה מתוחזקים היטב. יישומים של השיטה במלואו סגור באמצעות וירוסים עבור ביטוי מסוים סוג התא הינם מסופקים.

רולר ששונתה שיטת צינור לדימות לסירוגין במדויק לשפות אחרות וחוזר על עצמו במהלך תרבות לטווח ארוך של פרוסות המוח בכל מערכת סגורה

תוך הזרקה של recombinase תלויה רקומביננטי adeno-הקשורים וירוס (rAAV) ניתן להשתמש כדי לטפל בכל סוג התא גנטית שכותרתה בחוט השדרה. כאן נתאר כיצד מגלי נוירונים ב הצופר הגבי של חוט השדרה המותני. טכניקה זו מאפשרת פונקציונלי חקירתו של המשנה נוירון מניפולציה.

הביטוי Adeno-הקשורים Transgene וירוס בתיווך בנוירונים מבחינה גנטית מוגדרים של חוט השדרה

כאן, אנו מציגים שיטה להעברת נגיפי ביטוי וקטורים למוח באמצעות סרטי משי fibroin. שיטה זו מאפשרת משלוח ממוקד של וקטורים ביטוי באמצעות סיבים אופטיים מצופים משי/AAV, סיבים אופטיים מחודדות וחלונות הגולגולת.

אין ויוו יישוב ביטוי של חלבונים Optogenetic באמצעות סרטי משי/AAV

למד שיטה יעילה להיסטוקלטורה ולשתל גן בזקיקי שיער באמצעות חלבון GFP זוהר. טכניקה זו מסייעת לחוקרים לעקוב אחר פעילות מקדמים וליישם טיפולי גן לטיפול באלופסיה ושינוי צבע שיער.

ביטוי ממוקד של ה-GFP ב זקיק השיער באמצעות אקס התמרה Vivo ויראלי

גלה סרטונים נוספים