Name: פרוטוקול משולב להערכת לימפות מנינגיאל: הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה, כריתת מנינגיאל וצביעה שלמה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T14:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: למד פרוטוקול משולב להערכת כלי הלימפה המנינגיאליים בעכברים באמצעות הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה וצביעה שלמה. שיטה זו מאפשרת ניתוח תפקודי ומורפולוגי של מערכת העצבים המרכזית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Sandrone, S., Moreno-Zambrano, D., Kipnis, J., Van Gijn, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+(delayed)+history+of+the+brain+lymphatic+system.">A (delayed) history of the brain lymphatic system.</a> Nat Med. 25, 538-540 (2019).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+alzheimer's+disease.">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and alzheimer's disease.</a> Nature. 560, 185-191 (2018).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+regulate+brain+tumor+drainage+and+immunity.">Meningeal lymphatic vessels regulate brain tumor drainage and immunity.</a> Cell Res. 30, 229-243 (2020).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+mediate+neurotropic+viral+drainage+from+the+central+nervous+system.">Meningeal lymphatic vessels mediate neurotropic viral drainage from the central nervous system.</a> Nat Neurosci. 25, 577-587 (2022).</li><li>Rustenhoven, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+alterations+in+meningeal+immunity+drive+impaired+cns+lymphatic+drainage.">Age-related alterations in meningeal immunity drive impaired cns lymphatic drainage.</a> J Exp Med. 220, (2023).</li><li>Kodama, T., Hatakeyama, Y., Kato, S., Mori, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+fluid+drainage+pathways+in+lymphatic+vessels+and+lymph+nodes+using+a+mouse+model+to+test+a+lymphatic+drug+delivery+system.">Visualization of fluid drainage pathways in lymphatic vessels and lymph nodes using a mouse model to test a lymphatic drug delivery system.</a> Biomed Opt Express. 6, 124-134 (2015).</li><li>Banerjee, R., Knauer, L. A., Yang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+in+vivo+and+in+vitro+study+of+lymphatic+valve+formation+driven+by+shear+stress+signaling+pathway.">Protocol for in vivo and in vitro study of lymphatic valve formation driven by shear stress signaling pathway.</a> STAR Protoc. 4, 102141 (2023).</li><li>Akwii, R. G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+dermal+lymphatic+endothelial+cell+isolation.">Murine dermal lymphatic endothelial cell isolation.</a> J Vis Exp. (197), e65393 (2023).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> J Vis Exp. (135), e57378 (2018).</li><li>Hsieh, Y. T., Chen, S. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+neuromuscular+junctions+using+immunofluorescence.">Visualization and analysis of neuromuscular junctions using immunofluorescence.</a> Bio Protoc. 14, e5076 (2024).</li><li>Banerji, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyve-1,+a+new+homologue+of+the+cd44+glycoprotein,+is+a+lymph-specific+receptor+for+hyaluronan.">Lyve-1, a new homologue of the cd44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan.</a> J Cell Biol. 144, 789-801 (1999).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatics+affect+microglia+responses+and+anti-abeta+immunotherapy.">Meningeal lymphatics affect microglia responses and anti-abeta immunotherapy.</a> Nature. 593, 255-260 (2021).</li><li>Betsholtz, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+controversies+in+meningeal+biology.">Advances and controversies in meningeal biology.</a> Nat Neurosci. 27, 2056-2072 (2024).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathol. 137, 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+eeg+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high eeg delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Sci Adv. 5, eaav5447 (2019).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+posture+on+brain+glymphatic+transport.">The effect of body posture on brain glymphatic transport.</a> J Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>ACSF (Artificial Cerebrospinal Fluid)</td><td>Tocris &nbsp;</td><td>Cat# 3525</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rat IgG (1:1000 dilution)</td><td>Invitrogen</td><td>Cat# A-21208</td><td></td></tr><tr><td>Antifade Mounting Medium</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0126</td><td></td></tr><tr><td>Blunt-tipped forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F12011-10</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST023</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Curved sharp forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F11003-11</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# D9542</td><td></td></tr><tr><td>Depilatory cream</td><td>Veet</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dish-10 cm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# 150464</td><td></td></tr><tr><td>Disposable intravenous (IV) infusion needle</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices </td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol-75%</td><td>Sinopharm Chemical Reagent </td><td>Cat# 80176961</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Excell</td><td>Cat# FSD500</td><td></td></tr><tr><td>Filter-0.22 &micro;m</td><td>Merck Millipore </td><td>Cat# SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Glass slides</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Isoamyl alcohol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent </td><td>Cat# 10003218</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro forceps</td><td>Shinva Medical Instrument </td><td>Cat# ZD372RB </td><td></td></tr><tr><td>Micro scissors</td><td>Shinva Medical Instrument </td><td>Cat# ZO13056R</td><td></td></tr><tr><td>Microinjection needle (25 &micro;L)</td><td>Shanghai Gaoge Industry &amp; Trade </td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microinjection pump</td><td>Voyage Power</td><td>Cat# QHZS-001A</td><td></td></tr><tr><td>Mouse: C57BL/6 wild-type, 8 weeks old, male </td><td>Cavens</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Needle-30G</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices </td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST341</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin, Alexa Fluor&trade; 647 Conjugate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# O34784</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde Fix Solution-4%</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 tubing</td><td>Shanghai Qiujing Biochemical Reagent and Instrument</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (1x PBS)</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST447</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti-LYVE-1 (1:200 dilution)</td><td>Santa Cruz</td><td>Cat# sc-65647</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Jonec</td><td>Cat# JSZ6</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic frame</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# 68030</td><td></td></tr><tr><td>Straight scissors</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# S12007-10</td><td></td></tr><tr><td>Syringe-1-mL </td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices </td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Adhesive I</td><td>3M Vetbond</td><td>Cat# 1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# T48402</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 </td><td>Sigma-Aldrich </td><td>Cat# T8787</td><td></td></tr><tr><td>VS120 High-throughput fluorescence imaging system</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול משולב להערכת לימפות מנינגיאל: הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה, כריתת מנינגיאל וצביעה שלמה

Integrated Protocol for Assessing Meningeal Lymphatics: Cisterna Magna Injection, Lymph Node Imaging, Meningeal Dissection, and Whole-Mount Staining

Meningeal lymphatic vessels (MLVs) have emerged as critical regulators of central nervous system (CNS) homeostasis, and MLVs dysfunction has been ...

integrated-protocol-for-assessing-meningeal-lymphatics-cisterna-magna

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

כאן נתאר פרוטוקול לבצע cisterna מגנה תעלות (CMc), דרך פולשנית כדי לספק קליעים נותבים, מצעים, מולקולות איתות לתוך נוזל מוחי שדרתי (CSF). CMc בשילוב עם שיטות הדמיה שונות, מאפשרת המערכת glymphatic CSF dynamics הערכה, וכן משלוח המוח ברוחב של תרכובות שונות.

השרשה בצינורית לתוך המלון Cisterna של מכרסמים

פרוטוקול זה מתאר טכניקה לתמונה אוכלוסיות תאים שונות בבלוטות לימפה ניקוז ללא שינויים במבנה האיברים.

חזותי מבנה צומת לימפה ולוקליזציה לסלולר באמצעות Ex-Vivo Confocal מיקרוסקופ

אנו מתארים הזרקה תאיים כי מעסיקה מחט כפוף בקצה כי ניתן לייצב את הגולגולת, ובכך לחסל את הסיכון של נזק על הבסיס הבסיסי. הגישה יכולה לשמש למיפוי הגורל הגנטי ומניפולציות של תאים לטומאנעיים ולמעקב אחר תנועת נוזל מוחי שדרתי.

אינדוקציה של שינוי תאי לטומנאנואל באמצעות הזרקה בתוך החלק האחר

פרוטוקול מוצג שילוב של ניקוי רקמות עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי גיליון אור (LSFM) כדי לקבל תמונות רזולוציה תלת מימדית ותאי של כלי הלימפה ובלוטות הלימפה (LNs) איסוף נוזל המוח השדרה (CSF) ונוזל אפידורל השדרה.

הדמיה תלת מימדית של כלי הדם והניקוז הלימפטיים החולייתיים באמצעות iDISCO+ ומיקרוסקופית פלואורסצנטית גיליון אור

מאמר זה מציג שני פרוטוקולים אופטימליים לבחינת תאי חיסון חיים ופריפריאליים במערכת העצבים המרכזית, כולל המוח, חוט השדרה וקרומי המוח. כל אחד מהפרוטוקולים הללו מסייע לוודא את תפקודם והרכבם של התאים המאכלסים תאים אלה בתנאים יציבים ודלקתיים.

בידוד רקמות מערכת העצבים המרכזית וקרומי המוח הקשורים לניתוח במורד הזרם של תאי מערכת החיסון

כדי לחקור את ויסות זרימת הדם במוח in vivo, שיטות פרמקולוגיות מסורתיות הן פולשניות, ולעתים קרובות פוגעות בגולגולת, בדורה ובלפטומנינג. בעבודה זו, פיתחנו טכניקה זעיר פולשנית המשלבת הזרקת מגנה תוך-ציסטרנלית מונחית ננו-מזרק (ICM) עם הדמיית ניגודיות כתמי לייזר, תוך שמירה על שלמות הגולגולת והלפטומנינגים.

בדיקת ננו-הזרקת Cisterna Magna מזווגת ובדיקת הדמיית ניגודיות כתמי לייזר לחקר ויסות זרימת הדם במוח in vivo

הפרוטוקול מתאר שיטה להזרקת תאי גידול דרך מסלול הניקוב המלעורי לתוך ציסטרנה מגנה הגורמת בעוצמה לגרורות לפטומנינגיאליות בעכברים, ומפחיתה את הטראומה ואת עומס הגידול החוץ-גולגולתי.

מודל הזרקת Cisterna Magna זעיר פולשני למחקרי גרורות לפטומנינגיאליות בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להגדרה ברורה של השלבים לאנסטומוזה של בלוטת הלימפה הצווארית העמוקה או כלי הלימפה הנכנס שלה עם וריד הפנים האחורי בחולדה, כדי למזער את השפעתם של משתנים אחרים ולתקנן את ביצוע המחקר מבוסס הניתוח.

פרוטוקולים כירורגיים לאנסטומוזה לימפה ורידית עמוקה בצוואר הרחם במודל חולדה: אנסטומוזה של בלוטות לימפה וכלי לימפה

פרוטוקול ניסויי זה מדגים מודל עכברוש מחובר לצינור לימפה צווארי עמוק, המאפשר הערכה ישירה וכמותית של ניקוז לימפה מאזור הראש. המודל מאפשר ניתוח מפורט של מומסים שמקורם במערכת העצבים המרכזית (CNS), אוכלוסיות תאי חיסון, והפצה וניקוי של טיפולים ממוקדים במערכת העצבים המרכזית.

מודל עכברוש בצינור הלימפה הצווארי להערכת הובלה לימפה מהראש ומהמוח

פרוטוקול זה מעריך ניקוז לימפה לאחר שבר על ידי שילוב הדמיה אינדוציאנית ירוקה (ICG) קרובה לאינפרא-אדום עם אולטרסאונד, כדי לכמת את ניקוי ה-ICG הפלנטרי ואת הגדלת בלוטות הלימפה הפופליטאלית בעכברים.

הערכת ניקוז לימפה באמצעות הדמיית ICG אינפרא-אדום קרובה ואולטרסאונד לאחר השבר

למד פרוטוקול משולב להערכת כלי הלימפה המנינגיאליים בעכברים באמצעות הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה וצביעה שלמה. שיטה זו מאפשרת ניתוח תפקודי ומורפולוגי של מערכת העצבים המרכזית.

פרוטוקול משולב להערכת לימפות מנינגיאל: הזרקת סיסטרנה מגנה, הדמיית בלוטות לימפה, כריתת מנינגיאל וצביעה שלמה

גלה סרטונים נוספים