Name: שיטה מבוססת פלואורסצנציה להמחשת דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: חקור דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה באמצעות שיטת פלואורסצנציה מתקדמת. פרוטוקול זה מאפשר חקר התנהגות טיפות שומן במחזור התא ומספק כלי חשוב לביולוגיה של אברונים ומחקר סרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Wang, G., Jiang, Q., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitotic+kinases+in+coupling+the+centrosome+cycle+with+the+assembly+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of mitotic kinases in coupling the centrosome cycle with the assembly of the mitotic spindle.</a> J Cell Sci. 127 (Pt 19), 4111-4122 (2014).</li>
<li>Asteriti, I. A., De Mattia, F., Guarguaglini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+AURKA+and+PLK1+in+mitotic+entry+and+spindle+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between AURKA and PLK1 in mitotic entry and spindle assembly.</a> Front Oncol. 5, 283(2015).</li>
<li>Gavet, O., Pines, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+activation+of+Cyclin+B1-CDK1+coordinates+entry+to+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Progressive activation of Cyclin B1-CDK1 coordinates entry to mitosis.</a> Dev Cell. 18 (4), 533-543 (2010).</li>
<li>Mardin, B. R., Agircan, F. G., Lange, C., Schiebel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plk1+controls+the+NEK2A-PP1%CE%B3+antagonism+in+centrosome+disjunction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Plk1 controls the NEK2A-PP1γ antagonism in centrosome disjunction.</a> Curr Biol. 21 (13), 1145-1151 (2011).</li>
<li>Taguchi, N., Ishihara, N., Jofuku, A., Oka, T., Mihara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+phosphorylation+of+dynamin-related+GTPase+DRP1+participates+in+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitotic phosphorylation of dynamin-related GTPase DRP1 participates in mitochondrial fission.</a> J Biol Chem. 282 (15), 11521-11529 (2007).</li>
<li>Mitra, K., Wunder, C., Roysam, B., Lin, G., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hyperfused+mitochondrial+state+achieved+at+G1-S+regulates+cyclin+E+buildup+and+entry+into+S+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A hyperfused mitochondrial state achieved at G1-S regulates cyclin E buildup and entry into S phase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (29), 11960-11965 (2009).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trafficking+of+acetyl-C16-ceramide-NBD+with+long-term+stability+and+no+cytotoxicity+into+the+Golgi+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Traffic%22%5BJournal%5D)">Trafficking of acetyl-C16-ceramide-NBD with long-term stability and no cytotoxicity into the Golgi complex.</a> Traffic. 16 (5), 476-492 (2015).</li>
<li>Tang, D., Yuan, H., Vielemeyer, O., Perez, F., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+phosphorylation+of+GRASP65+during+mitotic+Golgi+disassembly%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Sequential phosphorylation of GRASP65 during mitotic Golgi disassembly.</a> Biol Open. 1 (12), 1204-1214 (2012).</li>
<li>Xia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+ste20-type+kinase+TAOK1+confers+protection+against+hepatocellular+lipotoxicity+through+metabolic+rewiring%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">Silencing of ste20-type kinase TAOK1 confers protection against hepatocellular lipotoxicity through metabolic rewiring.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0037(2023).</li>
<li>Makishima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+inhibitors+induce+formation+of+cholesterol+ester-rich+lipid+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Translation inhibitors induce formation of cholesterol ester-rich lipid droplets.</a> PLoS ONE. 7 (8), e42379(2012).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+correlation+profiles+identify+lipid+droplet+proteins+with+high+confidence%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Protein correlation profiles identify lipid droplet proteins with high confidence.</a> Mol Cell Proteomics. 12 (5), 1115-1126 (2013).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucagon+regulates+intracellular+distribution+of+adipose+differentiation-related+protein+during+triacylglycerol+accumulation+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Glucagon regulates intracellular distribution of adipose differentiation-related protein during triacylglycerol accumulation in the liver.</a> J Lipid Res. 51 (9), 2571-2580 (2010).</li>
<li>Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perilipins%3A+A+diversity+of+intracellular+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins.</a> Lipids Health Dis. 16 (1), 83(2017).</li>
<li>Herker, E., Vieyres, G., Beller, M., Krahmer, N., Bohnert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+contact+sites+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet contact sites in health and disease.</a> Trends Cell Biol. 31 (5), 345-358 (2021).</li>
<li>Krahmer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organellar+proteomics+and+phospho-proteomics+reveal+subcellular+reorganization+in+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organellar proteomics and phospho-proteomics reveal subcellular reorganization in diet-induced hepatic steatosis.</a> Dev Cell. 47 (2), 205-221.e7 (2018).</li>
<li>Ramosaj, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+availability+affects+neural+stem%2Fprogenitor+cell+metabolism+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet availability affects neural stem/progenitor cell metabolism and proliferation.</a> Nat Commun. 12 (1), 7362(2021).</li>
<li>Cruz, A. L. S., Barreto, E. A., Fazolini, N. P. B., Viola, J. P. B., Bozza, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplets%3A+Platforms+with+multiple+functions+in+cancer+hallmarks%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Lipid droplets: Platforms with multiple functions in cancer hallmarks.</a> Cell Death Dis. 11 (2), 105(2020).</li>
<li>Mashek, D. G., Khan, S. A., Sathyanarayan, A., Ploeger, J. M., Franklin, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+lipid+droplet+biology%3A+Getting+to+the+root+of+fatty+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Hepatic lipid droplet biology: Getting to the root of fatty liver.</a> Hepatology. 62 (3), 964-967 (2015).</li>
<li>Minami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+lipophagy+ameliorates+nonalcoholic+steatohepatitis+through+extracellular+lipid+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Liver lipophagy ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through extracellular lipid secretion.</a> Nat Commun. 14 (1), 4084(2023).</li>
<li>Makiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavior+of+intracellular+lipid+droplets+during+cell+division+in+Huh7+hepatoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Behavior of intracellular lipid droplets during cell division in Huh7 hepatoma cells.</a> Exp Cell Res. 433 (2), 113855(2023).</li>
<li>Makiyama, T., Higashi, S., Sakane, H., Nogami, S., Shirataki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B3-taxilin+temporally+regulates+centrosome+disjunction+in+a+NEK2A-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">γ-taxilin temporally regulates centrosome disjunction in a NEK2A-dependent manner.</a> Exp Cell Res. 362 (2), 412-423 (2018).</li>
<li>Aizawa, R., Ibayashi, M., Mitsui, J., Tsukamoto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+formation+is+spatiotemporally+regulated+in+oocytes+during+follicular+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet formation is spatiotemporally regulated in oocytes during follicular development in mice.</a> J Reprod Dev. 70 (1), 18-24 (2024).</li>
<li>Ohsaki, Y., Maeda, T., Fujimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+and+permeabilization+protocol+is+critical+for+the+immunolabeling+of+lipid+droplet+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fixation and permeabilization protocol is critical for the immunolabeling of lipid droplet proteins.</a> Histochem Cell Biol. 124 (5), 445-452 (2005).</li>
<li>Helps, N., Luo, X., Barker, H., Cohen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nima-related+kinase+2+%28NEK2%29%2C+a+cell-cycle-regulated+protein+kinase+localized+to+centrosomes%2C+is+complexed+to+protein+phosphatase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Nima-related kinase 2 (NEK2), a cell-cycle-regulated protein kinase localized to centrosomes, is complexed to protein phosphatase 1.</a> Biochem J. 349 (Pt 2), 509-518 (2000).</li>
<li>O'Regan, L., Blot, J., Fry, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+regulation+by+nima-related+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Div%22%5BJournal%5D)">Mitotic regulation by nima-related kinases.</a> Cell Div. 2, 25(2007).</li>
<li>Xie, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MDT-28%2FPLIN-1+mediates+lipid+droplet-microtubule+interaction+via+DLC-1+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">MDT-28/PLIN-1 mediates lipid droplet-microtubule interaction via DLC-1 in Caenorhabditis elegans.</a> Sci Rep. 9 (1), 14902(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.25% Trypsin/EDTA</td><td>Wako</td><td>201-16945</td><td>Cell dissociation</td></tr><tr><td>10 cm dish</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>35 mm tissue culture dish</td><td>IWAKI</td><td>3000-035</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>6 cm tissue culture dish</td><td>IWAKI</td><td>3010-060</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Anti-PLIN2 (ADRP) antibody</td><td>Proteintech</td><td>15294-1-AP</td><td>Lipid droplet marker</td></tr><tr><td>Anti-PLIN3 (TIP47) antibody</td><td>Proteintech</td><td>10694-1-AP</td><td>Lipid droplet marker</td></tr><tr><td>Anti-α-tubulin antibody</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6199</td><td>Mitotic spindle marker</td></tr><tr><td>BODIPY 493/503</td><td>Invitrogen</td><td>D3922</td><td>Neutral lipid staining</td></tr><tr><td>Bottle-top filter (0.22 μm)</td><td>NEST</td><td>WNB343001</td><td>Sterile filtration of OA–BSA solution</td></tr><tr><td>Bovine serum albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8022</td><td>Blocking reagent</td></tr><tr><td>Clear nail polish</td><td>Commercially available</td><td>Not applicable</td><td>Sealing coverslips</td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td>High-resolution imaging</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Dojindo</td><td>340-07971</td><td>Nuclear staining</td></tr><tr><td>D-PBS (–)</td><td>Wako</td><td>049-29793</td><td>Cell culture</td></tr><tr><td>Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)</td><td>Wako</td><td>041-30081</td><td>Cell culture medium</td></tr><tr><td>Ethanol (99.5%)</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Solvent for oleic acid</td></tr><tr><td>Fatty acid–free BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030</td><td>Carrier protein for oleic acid</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Medium supplement</td></tr><tr><td>Fluorescent secondary antibodies (Alexa Fluor–conjugated)</td><td>Commercially available</td><td>Not applicable</td><td>Species-specific secondary antibodies for immunofluorescence</td></tr><tr><td>FV10-ASW software</td><td>Olympus</td><td>Not applicable</td><td>Image acquisition and processing</td></tr><tr><td>Glass coverslips (ϕ15 mm)</td><td>Matsunami</td><td>2-176-03</td><td>Cell seeding for microscopy</td></tr><tr><td>Glass microscope slides</td><td>Matsunami</td><td>SFF-001</td><td>Glass slides for mounting coverslips</td></tr><tr><td>Glutaraldehyde (25% solution)</td><td>Wako</td><td>073-00536</td><td>Alternative fixation for PLIN3</td></tr><tr><td>HuH7 cells</td><td>JCRB Cell Bank</td><td>JCRB0403</td><td>Human hepatoma cell line</td></tr><tr><td>LipidTOX Red Neutral Lipid Stain</td><td>Invitrogen</td><td>H34476</td><td>Alternative lipid droplet stain</td></tr><tr><td>Nitrogen gas (N2)</td><td>Commercially available</td><td>Not applicable</td><td>Evaporation of ethanol</td></tr><tr><td>Oleic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1383</td><td>For preparation of oleic acid–BSA conjugates</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde, 4% in PBS</td><td>Nacalai Tesque</td><td>09154-85</td><td>Fixation</td></tr><tr><td>Penicillin–Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Antibiotics</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (×10)</td><td>Not applicable</td><td>Not applicable</td><td>Can be substituted with any vendor</td></tr><tr><td>RO-3306</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0569</td><td>CDK1 inhibitor for G2/M synchronization</td></tr><tr><td>SlowFade Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>S36963</td><td>Mounting medium</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>Preparation of 150 mM NaCl</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>Wako</td><td>080-01061</td><td>Used for saponification of oleic acid</td></tr><tr><td>Tali Cellular Analysis Slides</td><td>Thermo</td><td>T10794</td><td>Used for cell cycle analysis</td></tr><tr><td>Tali Image-based Cytometer</td><td>Thermo</td><td>Not applicable</td><td>Used for cell cycle analysis</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Cell permeabilization</td></tr><tr><td>Widefield fluorescence microscope</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-9000</td><td>Rapid screening of mitotic cells</td></tr></tbody></table>

שיטה מבוססת פלואורסצנציה להמחשת דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה

A Fluorescence-Based Method To Visualize Lipid Droplet And Organelle Dynamics During Mitosis in Hepatoma Cells

סנכרון תאי הפטומה בגבול G2/M באמצעות RO-3306
כדי לחקור את הדינמיקה של האברונים התוך-תאיים במהלך מיטוזה, RO-3306, מעכב CDK1 סלקטיבי, שימש לסנכרון התאים בגבול G2/M 20,21. כאשר תאים טופלו במעכב CDK1 במשך 20 שעות ואחריו עוד שעה במדיום טרי, מעל 50% מהתאים היו מסונכרנים בגבול G2/M (איור 1). על ידי הסרת RO-3306, התאים מורשים להיכנס למחזור התא. לפני שטיפלו את התגובה, תאי HuH7 הציגו מורפולוגיה דמוי...

Intracellular lipid droplets (LDs) are ubiquitous in several cell types. LDs store neutral lipids such as triacylglycerol and cholesteryl ester and play ...

a-fluorescence-based-method-to-visualize-lipid-droplet-organelle

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ניתוח הקשר בין מבנה המיטוכונדריה לתפקוד נדרש להבנה מעמיקה של מנגנוני הרגולציה של פונקציונליות המיטוכונדריה. שיטות ספציפיות לחקר המבנה והתפקוד המיטוכונדריאלי בשחלות דרוזופילה חיות וקבועות מתוארות ומודגמות במאמר זה.

לימוד מבנה ותפקוד מיטוכונדריאלי תסיסנית שחלות

כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט של יישום rhodamine 123 לזהות את מיטוכונדריאלי קרומית אפשרית (MMP) וללמוד CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס בתוך חוץ גופית. תחת מיקרוסקופ פלורסצנטיות נפוצות לייזר קונפוקלי סריקה קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ, נרשם השינוי בזמן אמת של MMP.

זיהוי של המיטוכונדריה פוטנציאל ממברנה לימודים CLIC4 נוקאאוט-induced HN4 תא אפופטוזיס במבחנה

פרוטוקול זה מתאר את התצורה של היווצרות droplet (LD) של השומנים במבנה המעי האנושי על גירוי עם חומצות שומן. אנו דנים כיצד משתמשים באותה שיטת לכימות היווצרות LD, וכיצד ניתן להשתמש בה עבור הקרנת תפוקה גבוהה עבור תרופות המשפיעות על היווצרות LD.

שיטת פלואורסצנטית מבוססת על האפיון והקוונפיקציה של היווצרות Droplet ליפיד בגוף מעיים אנושי

מיטופגיה היא המנגנון העיקרי של בקרת איכות מיטוכונדריאלית. עם זאת, ההערכה של mitophagy in vivo הוא הפריע על ידי היעדר בדיקות כמותיות אמין. מוצג כאן פרוטוקול לתצפית על מיטופגיה בתאים חיים באמצעות צבע מיטוכונדריה ירוק-פלואורסצנטי המיועד לתאים וצבע ליזוזום אדום-פלואורסצנטי.

הדמיה של מיטופגיה עם צבעים פלואורסצנטיים למיטוכונדריה וליזוזום

במסמך זה, אנו מדגימים פרוטוקול מותאם BODIPY 493/503 מבוסס פלואורסצנטיות לאפיון טיפות שומנים ברקמת הכבד. באמצעות שימוש בהקרנות אורתוגונליות ושחזורים תלת-ממדיים, הפלואורופור מאפשר הבחנה מוצלחת בין סטאטוזיס מיקרו-שלפוחית וסטאטוזיס מקרו-שלפוחית ועשוי לייצג גישה משלימה לפרוטוקולים ההיסטולוגיים הקלאסיים להערכת סטאטוזיס בכבד.

ניתוח טיפות שומנים מוכתמות פלואורסצנטיות עם שחזור תלת ממדי להערכת סטאטוזיס בכבד

הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד להשתמש בשמן אדום O כדי לצבוע טיפות שומנים (LDs), לחשב את הגודל והמספר של LDs במודל הפטוציטים שומניים המושרה על ידי חומצות שומן, ולהשתמש ב- BODIPY 493/503 כדי לצפות בתהליך של LDs קטנים המתמזגים ל- LDs גדולים על ידי הדמיה של תאים חיים.

הערכת גודל טיפות שומנים ואיחוי בתאי כבד בקר

טכניקה זו מתארת זרימת עבודה יעילה כדי להמחיש ולמדוד כמותית את פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית ואת רמות הסופראוקסיד בתוך תאי HeLa באמצעות הדמיה חיה מבוססת פלואורסצנטיות.

כימות מבוסס פלואורסצנטיות של פוטנציאל הממברנה המיטוכונדריאלית ורמות הסופראוקסיד באמצעות הדמיה חיה בתאי HeLa

ליפופגיה היא צורה סלקטיבית של אוטופגיה הכוללת פירוק של טיפות שומנים. תפקוד לקוי בתהליך זה קשור להתפתחות סרטן. עם זאת, המנגנונים המדויקים עדיין לא מובנים במלואם. פרוטוקול זה מתאר גישות הדמיה כמותית כדי להבין טוב יותר את יחסי הגומלין בין אוטופגיה, מטבוליזם של שומנים והתקדמות סרטן.

חקר הוויסות של קטבוליזם טיפות שומנים באמצעות ליפופגיה

GFP-Fusion חלבונים נמצאים בשימוש נרחב כדי להמחיש האברונים ידי מיקרוסקופיה confocal. אולם, ההקרנה של מוטציות המשפיעות על המורפולוגיה של האברונים בדרך כלל דורש mutagenesis הפרט היא זמן רב. הנה, אנחנו מדגימים שיטה לשלב בו זמנית אברון-GFP סמנים כמעט 5,000 שאינם חיוניים גנים בשמרים.

שיטת תפוקה גבוהה ברחבי העולם כדי ללמוד את המורפולוגיה של אברון cerevisiae ס

שיטת Hi-C מאפשר זיהוי משוחדת, גנום רחב של אינטראקציות הכרומטין (1). Hi-C זוגות קשירת סמיכות וסדר מקבילי מאסיבי. הנתונים וכתוצאה מכך ניתן ללמוד אדריכלות גנומית בקני מידה מרובות: התוצאות הראשוניות זיהו תכונות כגון בשטחים כרומוזום, הפרדה של הכרומטין פתוח, סגור, מבנה הכרומטין בקנה מידה megabase.

Hi-C: שיטה לחקר ארכיטקטורה תלת ממדי של הגנום.

חקור דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה באמצעות שיטת פלואורסצנציה מתקדמת. פרוטוקול זה מאפשר חקר התנהגות טיפות שומן במחזור התא ומספק כלי חשוב לביולוגיה של אברונים ומחקר סרטן.

שיטה מבוססת פלואורסצנציה להמחשת דינמיקת טיפות שומן ואברונים במהלך מיטוזה בתאי הפטומה

גלה סרטונים נוספים