ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microtubes Axygen</td><td>Corning</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>6 well plate Falcon polystyrene microplate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Acetic acid, 60%&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Acrylamide 30%&nbsp; and bis-acrylamide solution, 29:1</td><td>Biorad</td><td>1610157</td><td></td></tr><tr><td>Aluminum fold</td><td>Reynolds&nbsp;</td><td>U07211R0</td><td></td></tr><tr><td>Amonium Persulfate (APS)</td><td>Merck</td><td>A3678</td><td></td></tr><tr><td>Binocular stereomicroscope</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)&nbsp;</td><td>Merck</td><td>&nbsp;A9418</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>DelltaVision microscope</td><td>Olympus</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Distilled H2O</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Disposable Filter Units with PES filters of 0.45 &mu;m pore</td><td>Thermo Fisher Scientific/Nalgene</td><td>09-740-63B</td><td></td></tr><tr><td>Fine forceps FST Dumont SS</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>11200-33</td><td></td></tr><tr><td>goat (IgG H+L) highly cross-adsorbed&nbsp; anti-rat labelled by AlexaFluor647</td><td>Invitrogen</td><td>A-21247</td><td></td></tr><tr><td>goat (IgG H+L) highly cross-adsorbed anti-rabbit labelled by AlexaFluor568</td><td>Invitrogen</td><td>A-21428</td><td></td></tr><tr><td>goat (IgG H+L) highly cross-adsorbed anti-guinea pig labelled by AlexaFluor488&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A-11073</td><td></td></tr><tr><td>Gloves</td><td>Merck</td><td>Z412392</td><td></td></tr><tr><td>Growing chambers / greenhouse / or field</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Merck</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Masking tape 3M</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-047-259</td><td></td></tr><tr><td>Maize seeds</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope 22 x 22 mm-1,5 glass coverslips&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Microscope 22 x 22 mm-H coverslips&nbsp;</td><td>Deckgläser, Zeiss</td><td>474030-9020-000</td><td></td></tr><tr><td>Microscopic glass slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Microscope slide box</td><td>Fisher Scientific,</td><td>03-448-9</td><td></td></tr><tr><td>Micropipets P20, P200, P1000</td><td>Merck</td><td>CLS4069</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Nail polish</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Paper towels</td><td>Merck</td><td>Z188956</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Merck</td><td>P7668</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 16% solution&nbsp;</td><td>Electron Microscopy Grade</td><td>&nbsp;15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>Plastic box with lid</td><td>Tupperware</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine</td><td>Merck</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>Primary antibodies (rat anti-ZmAFD1, rabbit anti-ZmASY1, guinea-pig anti ZmZYP1)</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolong Antifading</td><td>Molecular Probes</td><td>P36934</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish (D x H: 35 mm x 10 mm</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish regular size</td><td>Merck</td><td>P5731</td><td></td></tr><tr><td>PIPES</td><td>Merck</td><td>P1851</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (0.5-10 uL) sterile&nbsp;</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT300</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (200 uL) sterile</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT200Y&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet tips (1000 uL) sterile</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT1000BRS</td><td></td></tr><tr><td>Razor blade - single edged</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Rocking platform shaker</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Spermine</td><td>Merck</td><td>85590</td><td></td></tr><tr><td>Spermidine&nbsp;</td><td>Merck</td><td>S2626</td><td></td></tr><tr><td>Sorbitol</td><td>Merck</td><td>S8143</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Merck</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Ultra pure Acrylamide</td><td>Invitrogen</td><td>15512023</td><td></td></tr><tr><td>Vacuum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אימונולוקליזציה תלת-ממדית במיוציטים של תירס

Three-Dimensional Immunolocalization In Maize Meiocytes

During meiotic prophase I, the physical configuration of chromosomes varies widely across developmental stages, fortunately these stage-specific ...

המחקר שלנו מתמקד בפיתוח גישה תלת-ממדית (3D) לבדיקת מייוציטים זכריים בתירס ולהדמיות של חלבונים מייוטיים בתאים בודדים. מלבד תירס, ניתן להחיל פרוטוקול זה לבדיקת מייוציטים באורז, שיפון, שעורה וחיטה. כדי להתחיל, השג צמחי תירס בשלב V13, כאשר התפרחים עדיין גדלים בתוך הגבעול.במהלך השבוע של קיבוע האtoNumber המיאוטי, לחצו בעדינות על הגבעול המורחב באזור הבליטה תוך כדי חבישת כפפות, כדי לבדוק אם הוא רך מספיק לחיתוך. לאחר הכנת התמיסות המגבפות (buffers) הדרושות, הכינו תא לחות על ידי הנחת חמישה עד 10 מגבונים נייר לחים בתוך קופסת פלסטיק. הסירו עודפי מים מהתא.בעזרת להב תער, חתוך את הגבעול בגובה התפרח (inflorescence) כדי לחשוף את ענפי הנישוא (tassel) וענפים צדדיים. לאחר דיסקציה ואיסוף של הענפים הצדדיים, עטוף אותם במגבות של תא הלחות תוך שמירה על התא בטמפרטורת החדר. בעזרת מיקרוסקופ סטריאו, אסוף אבקנים טריים מהפרחים לתוך צלחת פטרי średnica 35 מילימטר המכילה שני מיליליטר של 1X buffer A או BA. זהה את שלבי המיוזה על סמך הגודל והצבע.לאחר העברת האבקנים לצחנית פטרי חדשה בקוטר 35 מילימטר, הוסיפו לאבקנים שלושה מיליליטר של תמיסת קיבוע. אטמו את צחנית הפטרי באמצעות פאראפילם כדי למנוע התאיידות של פורמלהיד. הניחו את צחנית הפטרי בקוטר 35 מילימטר על גבי צחנית פטרי גדולה יותר הממוקמת על שייקר סיבובי, והגדירו מהירות של 40 עד 60 RPM בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות.שטפו את האבקנים באמצעות 3 milliliters של 1XBA. לאחר העברת האבקנים לכלי פטרי קטן, אטמו את כלי הפטרי והניחו אותו על שייקר סיבובי בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות, כאשר המהירות מכוונת ל-40 עד 60 RPM. בעזרת פינצטה נקייה, העבירו את האבקנים לכלי פטרי קטן של 35 millimeter המכיל 3 milliliters של 1XBA.לאחר שסגרתם את צלחת הפטרי בחוזקה עם parafilm, הניחו את צלחת הפטרי הקטנה בתוך צלחת פטרי גדולה יותר. לאחר כיסויה בנייר אלומיניום, שמרו את הדגימה בטמפרטורה של 4°C עד למועד השימוש. ביום הראשון, הכינו 2 mL של תמיסת acrylamide על ידי ערבוב של נפחים שווים של acrylamide ו-2XBA.בצעו דגזינג (Degas) של תמיסת האקרילאמיד תחת ואקום למשך חמש עד 10 דקות לפני הוספת נתרבית סולפית ואמוניום פרסולפט. העבירו מנות של 100 µL של תערובת של אקרילאמיד ו-XBA בריכוז 2X ביחס של אחד-לאחד למבחנות של 1.5 mL, בהתאם למספר השקופיות שהוכנו. הניחו פיסות פאראפילם בגודל שני סנטימטר על שני סנטימטר מעל צלחת פטרי והמקמו אותן תחת סטריאומקרוסקופ.לאחר קיטום קצה הפיפטה בעזרת מספריים, העבירו בפיפטה 50 microliters של תמיסת BA עם אבקנים על גבי ה-parafilm. העבירו בפיפטה 25 microliters של תמיסת BA לאזור אחר של ה-parafilm. לאחר החזקת האבקנים בעזרת פינצטה, חתכו את קצותיהם בעזרת סכין מנתחים.לאחר סחיטת המיוציטים, השתמשו בפיפט כדי להעביר אותם אל טיפת BA של 25 µL וערבבו בעדינות. העבירו בפיפט 10 µL מתערובת המיוציטים אל לביש 유리 (cover slip) נפרד. הוסיפו במהירות 5 µL של sodium sulfite ו-5 µL של ammonium per sulfate למבחנה של 1.5 mL המכילה acrylamide ו-2XBA.טפטפו חמישה µL מתערובת זו על לביבת הזריקה וערבבו אותה עם המיוציטים. הניחו לביבת זריקה מצופה פולי-ליזין מעל, בזווית של 45 מעלות. לאחר המתנה של 30 עד 50 דקות לפולימריזציה מלאה בטמפרטורת החדר, הפרידו בזהירות בין לביבות הזריקה באמצעות להב תער.לאחר מכן, הניחו אותם כאשר צד הפד פונה כלפי מעלה בתוך צלחת פטרי. שטפו את כיסוי הזריקה (cover slip) ב-1 mL של 1XPBS מועשר ב-1 mM ethylenediaminetetraacetic acid, או EDTA, ו-1% Triton בטמפרטורת החדר למשך שעתיים. הכינו ושלבו נוגדנים ראשוניים ממינים מארחים שונים כדי להבטיח אותות מובחנים במהלך הגילוי.הוסיפו 50 µL של הנוגדן הראשוני המדולל למרכז זכוכית הכיסוי המכילה את הפד. לאחר מכן, הניחו את צלח הפטרי בתא לחות למשך לילה. ביום השני, הכינו 500 mL של בופר שטיפה המכיל 1× PBS, 0.1% Tween 20, ו-1 mM EDTA.בעזרת פיפטה, הסר את התמיסה לאחר דגירה לילה. שטוף את לבישת הזכוכית פעמיים עם 1 mL של בופר שטיפה. לאחר הסרת הבופר, הוסף שוב 1 mL של בופר שטיפה ודגור למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.חזור על שלב שטיפה זה שבע פעמים נוספות. לאחר השטיפה האחרונה, כסה את הצלחת והשאר אותה למשך הלילה בתא לחות. הכן את הנוגדנים המשניים על ידי דילולם ביחס של 1:50 בבuffer חסימה.לאחר הסרת תמיסת השטיפה, יש להוסיף 50 µL של הנוגדן המשני המדולל למרכזו של כל פד. לאחר מכן, יש להניח את צלחת הפטרי בתא לחות למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר הסרת התמיסה מהבאר, יש לשטוף ארבע פעמים עם 1 mL של בופר שטיפה, למשך שעה אחת בכל פעם, בטמפרטורת החדר.שטפו את הבאר עם 1 mL של PBS למשך 10 דקות וחזרו על תהליך זה פעמיים נוספות. הוסיפו לבאר 500 µL של DAPI, שהוכן בריכוז סופי של 1 µg/mL, והדגירו למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר הוצאת הזהב המוארך מטמפרטורה של 4 °C, הפשירו אותו עד שיגיע לטמפרטורת החדר.שטפו את השקופיות עם 1 mL של PBS למשך 30 דקות וחזרו על הפעולה פעמיים. לאחר הסרת תמיסת השטיפה האחרונה, הוסיפו שתי טיפות של prolonged antifade במרכז הרפידה. לאחר הרמת זכוכית הכיסוי מהבאר, הצמידו אותה לשקופיות המסומנות.באמצעות ואקום, הסירו עודפי גליצרין מקצות הזכוכית המכסה ואטמו בשתי שכבות של לק ציפורניים. בחנו את השקופיות תחת מיקרוסקופ תוך שימוש באורכי גל עירור ובמסננים מתאימים לצילום תמונות. צביעת DAPI הראתה גרעין ברור וצביעת כרומטין, לצד צביעה ציטופלזמית טבעית חלשה יותר של DNA פלסטידי ומיטוכונדריאלי.היעדר AFD1 (Absence of first division one), ASY1 (asynaptic one) ו-ZYP1 (Zipper1) על הכרומוזומים ובציטופלזמה במהלך שלב ה-preleptinema. בשלבים מאוחרים יותר, האות התרכז על הכרומוזום, בעוד שכמות ניכרת של ZYP1 נותרה בציטופלזמה לפני השלמת הסינפסיס. הקוהסין המיוטי AFD1 יצר מבנה ליניארי רק לאחר שלב ה-zygonema.במקביל להיווצרותם של חוטים ליניאריים של הקומפלקס הסינפטונמלי. אות ה-ASY1 הפך לחלש יחסית לאחר ש-ZYP1 ו-AFD1 נטענו למבנים ליניאריים. פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים לבחון קו-לוקליזציה ודינמיקה של חלבונים, לוקליזציה תת-תאית טבעית, ארכיטקטורה כרומוזומלית תלת-ממדית, התקדמות ומסגור של שלבי המיוזה.האתגר המרכזי בפרוטוקול זה הוא בחירה קפדנית של שילובים תואמים של נוגדנים ראשוניים ומשניים. ניתן להרחיב מחקרים על בסיס עבודה זו על ידי השוואת המיוזה בזכרים ובנקבות כדי לחקור את המנגנון המולקולרי העומד בבסיס ה-athelchasmi.

three-dimensional-immunolocalization-in-maize-meiocytes

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ב הכלאה באתרו עבור לוקליזציה המדויק של תמלילי בצמחים

דרך להשיג תובנות חדשות על המורכבות של התגובה הדלקתית במוח מוצגת. אנו מתארים פרוטוקולים מבוססי immunofluorescence אחרי ניתוח confocal תלת ממדים כדי לחקור את הדפוס של שיתוף ביטוי של סמני פנוטיפ מיקרוגליה / מקרופאג במודל של עכברים של איסכמיה מוקד.

ניתוח Confocal תלת ממדי של מרקרי Microglia / מקרופאג של קיטוב בניסויי פגיעה מוחית

ההדמיה intravital ברזולוציה גבוהה עם ניגודיות משופרת עד 120 מיקרומטר עומק בבלוטות הלימפה של עכברים בוגרים מושגת על ידי מרחבית ויסות דפוס העירור של מיקרוסקופ שני פוטונים רב המוקדים. ב100 עומק מיקרומטר מדדנו החלטות 487 ננומטר (לרוחב) ו551 ננומטר (צירי), ובכך לעקוף את מגבלות פיזור ועקיפות.

מיקרוסקופית Intravital הפסים תאורה נפתר מאוד של מרכזי ז&#39;רמינל

פרוטוקול immunofluorescence העקיף המתואר במאמר זה מאפשר זיהוי והלוקליזציה של חלבונים בבלוטת החלב עכבר. שיטה שלמה ניתן להכין דגימות בלוטת החלב, לבצע אימונוהיסטוכימיה, לתמונת סעיפי רקמות על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ולשחזר תמונות.

Immunofluorescence עקיף על סעיפים קפואים של עכבר בלוטת החלב

פיתוח cilia חיוני organogenesis נכונה. פרוטוקול זה מתאר שיטת אופטימיזציה תווית, דמיינו תאים ciliated של דג זברה.

להמחיש Multiciliated בתאים דג זברה באמצעות פרוטוקול משולב של פלורסנט הר שלמה בחיי עיר הכלאה, Immunofluorescence

פרוטוקול זה מציג כיצד לחיות התמונה ולנתח את meristems apical לירות מכל מיני צמחים שונים באמצעות סריקת מיקרוסקופיה קונפוקלית לייזר.

קונאפוקלית חי הדמיה של לירות Meristems הפסגה מ שונים זנים של צמחים

אנו מציגים כאן פרוטוקול משופר להכנה וחיסון של כל ההר של אשכי דרוזופילה, מתאים למיקרוסקופיה קונפוקלית וגם מאפשר תיוג ניתן לשחזור ואמין. אנו ממחישים פרוטוקול זה על ידי ייצוג תלת מימדי וכימות של ניסויי קולוקליזציה על זרעונים S4-S5 גדולים.

חיסון של אשכי דרוזופילה הר שלם לניתוח קונפוקלי תלת מימדי של זרעונים גדולים

פרוטוקול הזרקה מבוסס אגרובקטריום (אגרובקטריה) מוצג לחיסון של וירוס פסיפס זנב שועל ווירוסי פסיפס קני סוכר לשתילי תירס. חיסון באופן זה מוביל לזיהום ויראלי, השתקת גנים הנגרמת על ידי וירוס של גנים סמן, ו overexpression ויראלי של GFP.

אגרוינוקולציה ישירה של שתילי תירס על ידי הזרקה עם וירוס פסיפס זנב שועל רקומביננטי ווירוס פסיפס קנה סוכר שיבוטים זיהומיות

פרימורדיה של עלי תירס עטופה ומגולגלת עמוק, מה שמקשה על מחקרם. כאן, אנו מציגים שיטות להכנת חתכים רוחביים ותושבות שלמות של פרימורדיה של עלי תירס להדמיה פלואורסצנטית וקונפוקלית.

שיטות משופרות להכנת חתכים רוחביים ותושבות שלמות לא מגולגלות של פרימורדיה של עלי תירס להדמיה פלואורסצנטית וקונפוקלית

כתב יד זה מפרט פרוטוקול חיסון אופטימלי המשתמש בנדן עלי תירס מנותק למחקרים ציטולוגיים, פיזיולוגיים ומולקולריים הניתנים לשחזור של אינטראקציות תירס עם פתוגנים צמחיים פטרייתיים. מעטה העלים מאפשר תצפית בזמן אמת על אינטראקציות תאיות בין הצמח החי לפטרייה ברקמות לא מקובעות.

נדן תירס מנותק להדמיית תאים חיים של זיהום על ידי פתוגנים פטרייתיים של תירס פוליארי

תנועת כרומוזומים במהלך פרופאזה מיוטית היא תופעה לא מובנת היטב שהיא בסיסית להיווצרות נבגים. פרוטוקול זה מתאר שיטה לרכישה, ניתוח וכימות של תנועות צנטרומר במהלך פרופאזה מיוטית במיוציטים זכריים של Arabidopsis thaliana .

אפיון הדמיה חיה של תנועות צנטרומר במהלך פרופאזה מיוטית זכרית ב- Arabidopsis thaliana

255 Views.  National Autonomous University of Mexico (UNAM). המחקר שלנו מתמקד בפיתוח גישה תלת-ממדית לחקר מייקוציטים זכריים של תירס ולהדמיית חלבונים מיוטיים בתאים בודדים. מלבד תירס, ניתן ליישם פרוטוקול זה לחקר מייקוציטים באורז, שיפון, שעורה, חיטה. כדי להתחיל, השג צמחי תירס בשלב V13 עם תפרחות שעדיין גדלות בתוך הגבעול.במהלך השבוע של ק?...

אימונולוקליזציה תלת-ממדית במיוציטים של תירס

גלה סרטונים נוספים