Name: ההפרדה Electrophoretic של חלבונים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: למד הפרדה אלקטרופורטית של חלבונים באמצעות ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE). טכניקה זו מאפשרת הפרדת חלבונים מתערובות מורכבות לפי מטען וגודל, ומספקת כלי חיוני לחוקרים בתחומי הביוכימיה והפרוטאומיקה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1002a/current/abstract" target="_blank">הפרוטוקולים נוכחי בביולוגיה מולקולרית</a> .

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

ההפרדה electrophoretic של חלבונים

Electrophoretic Separation of Proteins

אלקטרופורזה משמש כדי להפריד תערובות מורכבות של חלבונים (למשל, מתאי, שברים subcellular, שברים עמודה, או immunoprecipitates), לחקור את יצירות למקטע, וכדי לאמת את ההומוגניות של דגימות חלבון. זה גם יכול לשמש כדי לטהר חלבונים לשימוש ביישומים נוספים. בשנת ג&#39;ל אלקטרופורזה polyacrylamide, חלבונים להעביר בתגובה שדה חשמלי דרך הנקבוביות במטריצה ​​ג&#39;ל polyacrylamide, גודל הנקבוביות יורדת עם הגדלת ריכוז acrylamide. השילוב של גודל הנקבוביות ולחייב חלבון, גודל, צורה קובע את קצב ההגירה של החלבון. ביחידה זו, השיטה תקן Laemmli מתואר על ג&#39;ל אלקטרופורזה רציפה בתנאים denaturing, כלומר בנוכחות של נתרן גופרתי dodecyl (SDS).

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה electrophoretic הפרדה של חלבונים באמצעות מרובה acrylimide ג&#39;ל אלקטרופורזה (עמוד).

ההפרדה Electrophoretic של חלבונים

אלקטרופורזה משמשת להפרדת תערובות מורכבות של חלבונים (למשל, מתאים, משברים תת-תאיים, שברי אלומות או משקעים אימונו-פרסיפיטטיים), כדי...

ניתן להפריד חלבונים בודדים מתערובות חלבונים מורכבות באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל, ובאופן ספציפי באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד, הידועה גם כ-PAGE; חלבונים נעים בתגובה לשדה חשמלי דרך נקבוביות במטריצת הג'ל. השילוב של גודל נקבוביות הג'ל, המטען, הגודל והצורה של החלבון קובע את קצב נתירותו של החלבון. בסרטון זה, נדגים שיטה להפרדה אלקטרופורטית של חלבונים.שלום, אני ד"ר Bobul Chakravarti מהמרכז לפרוטאומיקה של Keck Graduate Institute of Applied Life Sciences. היום אראה לכם הליך לביצוע אלקטרופורזה של ג'ל בממד אחד (1D gel electrophoresis). אז בואו נתחיל.ראשית, הרכיבו את מבנה הלוחות ("sandwich") של מכשיר האלקטרופורזה בהתאם להוראות היצרן, תוך שימוש בשתי לוחיות זכוכית נקיות ובשני ספייסרים של 1.5 millimeter. כעת, נעלו את מבנה הלוחות למעמד היציקה. לאחר מכן, הכינו את תמיסת ג'ל ההפרדה כפי שמתואר בפרוטוקולים הנוכחיים.הוסיפו לתמיסה את הכמות המצוינת של ammonium per sulfate 10% ו-teed וערבבו בעדינות לאיחוד. בשל הריכוז הגבוה של אקרילאמיד, אין צורך בניקוי גזים (degassing). באמצעות פיפטה פלסטית חד-פעמית של 10 מיליליטר, מרחו מיד את תמיסת ג'ל ההפרדה על ה"סנדוויץ'" לאורך קצהו של אחד המרווחים, עד שגובה התמיסה בין לוחות הזכוכית יהיה כ-11 סנטימטרים.בשלב הבא, השתמשו בפיפטה אחרת כדי לכסות לאט את החלק העליון ש

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרטון זה מדגים טכניקת הפרדה מבוססת פוליאקרילאמיד דנטורינג עבור חלבונים. טכניקה זו מסייעת בזיהוי ראשוני של חלבונים על בסיס משקלם המולקולרי.

נתרן דודציל סולפט פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה לניתוח חלבונים: טכניקה להפריד ולדמיין חלבונים על בסיס משקל מולקולרי

סרטון זה מתאר PAGE מולטימרי להפרדת קומפלקסים חלבוניים טבעיים מהומוגנאטים ברקמות. הטכניקה היא הכלאה של טכניקות כחולות-ילידיות-PAGE ו-SDS-PAGE. ניתן לאפיין ולחקור את המתחמים המופרדים על תפקידם בתפקוד התא.

Multimer-PAGE להפרדת קומפלקסים חלבוניים מקומיים: טכניקת הפרדה היברידית המורכבת מ- Blue Native-PAGE ו- SDS-PAGE להפרדת חלבונים מולטימריים שלמים מליזט רקמות

בסרטון זה אנו מדגימים שיטת אלקטרופורזה דו-ממדית בג'ל המפרידה חלבונים בודדים מתערובת חלבונים מורכבת המתקבלת מרקמות גידוליות של אדנומת יותרת המוח האנושית הלא תפקודית (NFPA). החלבונים מופרדים על בסיס המטען החשמלי שלהם בממד הראשון ובהמשך מופרדים על בסיס משקלים מולקולריים בממד השני.

אלקטרופורזה ג'ל פוליאקרילאמיד דו-מימדי: טכניקת הפרדה לניתוח חלבונים בתערובת חלבונים מורכבת המבוססת על מטען ומשקל מולקולרי

פרוטוקול זה מתאר כיצד להכין ולבצע אלקטרופורזה של לכידת שבר נוזלי מקורי ברור (CN-GELFrEE), טכניקת הפרדה מקורית עבור מכלולים ביומולקולריים לא קוולנטיים וחלבונים מדגימות הטרוגניות התואמת לטכניקות ניתוח חלבונים שונות במורד הזרם.

CN-GELFrEE - Native נקה ג&#39;ל eluted שבר נוזלי אלקטרופורזה מילכוד

בעקבות ההפרדה על ידי שיטות electrophoretic, חלבונים בג'ל ניתן להבחין באמצעות שיטות צביעה שונות. הכתמה של חלבונים עם Coomassie כחול, מכתים כסף, SYPRO אורנג', SYPRO רובי הם הפגינו וידאו.

מכתים חלבונים ג&#39;ל

הדפסה Microcontact נעשה שימוש נרחב על חלבונים ומולקולות אחרות דפוס על משטחי חומר. אנו מדגימים את השלבים הבסיסיים של תהליך זה, ביול דפוסים של פיברונקטין על זכוכית.

Microcontact הדפסה של חלבונים עבור ביולוגיה של התא

הזדווגות והפרדה הטטרדה נדרשים לניתוח...

הזדווגות והפרדה של הטטרדה Chlamydomonas reinhardtii עבור ניתוח גנטי

עכברוש MSCs נותקו מן עצמות הירך לבין tibias והעשירו מכן על ידי מיון התא מגנטי. תאים ממוין אושרו עבור ביטוי של סמני פני השטח על ידי cytometry הזרימה. תאים אלה בתרבית גם בצפיפות משובטים כדי ליצור מושבות אחת ואז מושבות אלה היו מופרדים על ידי שכפול צילינדרים.

בידוד והעשרה של תאים עכברוש mesenchymal גזע (MSCs) והפרדה של המושבה, סינגל נגזר MSCs

הפרוטוקולים מתארים את הצעדים החיוניים לקבלת איכות עקיפה גבישים של חלבון ממברנה החל הכינון מחדש של החלבון בשלב מעוקב lipidic (LCP), מציאת התנאים הראשוניים עם LCP-FRAP טרום התגבשות מבחני, הגדרת ניסויים התגבשות LCP וקריסטלים קציר .

התגבשות של חלבונים בממברנה ב Mesophases Lipidic

Calmodulin (רמ"א) הנפתח assay היא דרך יעילה לחקור את האינטראקציה של CAM עם חלבונים שונים. שיטה זו משתמשת Cam-sepharose חרוזים לצורך ניתוח יעיל ספציפי של Cam-binding חלבונים. זה מספק כלי חשוב לחקור איתות קאם פונקציה הסלולר.

הנפתח של calmodulin מחייב חלבונים

למד הפרדה אלקטרופורטית של חלבונים באמצעות ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE). טכניקה זו מאפשרת הפרדת חלבונים מתערובות מורכבות לפי מטען וגודל, ומספקת כלי חיוני לחוקרים בתחומי הביוכימיה והפרוטאומיקה.

ההפרדה Electrophoretic של חלבונים

גלה סרטונים נוספים