Name: ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-03T14:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: למד סימון בתאי גזע עובריים אנושיים באמצעות כלוריד מנגן לצורך דימות תהודה מגנטית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים חיים באמצעות אות חיובי ב-MRI, בניגוד לחלקיקי תחמוצת ברזל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

תיוג מנגן של בתאי גזע עובריים אנושיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize נובעת עובריים אנושיים אשר היו בתרבית מזין ללא תנאי למשך 5 דקות. לנטרל את טריפסין על ידי הוספת אמצעי התקשורת והתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין את התאים על ידי centrifuging בסל&quot;ד 800 במשך 5 דקות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס. לאחר מחדש השעיית תא גלולה, לספור את מספר התאים על ידי מכתים trypan כחול. בהתבסס על ספירת התאים המתקבלים, לחלק את התאים לארבע aliquots של 3 מיליון תאים לתוך צינורות חרוטי. גלולה התאים שוב על ידי צנטריפוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיוק לפני תחילת תיוג מנגן, מנגן כלורי מתמוססים טרי עם פתרון 0.9% נתרן כלוריד לעשות פתרון 0.1mm כלוריד ומגנזיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לצפות בערוץ פעילות סידן, ארבע דגימות היו מוכנים. הדוגמה הראשונה היא השליטה שלנו המכיל תאים מודגרות ב 0.9% נתרן כלוריד לבד. המדגם השני מכיל תאים מודגרות מ&quot;מ 0.1 MnCl 2. לדוגמה 3 ו 4 מכילים תאים מודגרות ב 0.1 מ&quot;מ MnCl עם 2 או 5 מיקרומטר של Ca 2 + ערוץ אגוניסט, (ים )-(-)- מפרץ K8644, או 250 מיקרומטר של Ca 2, ערוץ + אנטגוניסט verapamil. דגירה ארבע דגימות ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 30 דקות, לסובב את התאים ב 800 סל&quot;ד במשך 5 דקות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס. ואז לשאוב supernatant לשטוף את התאים שכותרתו פעמיים עם PBS. לאחר כביסה, מחדש להשעות כל גלולה עם 200 PBS μL ולהעביר לתוך צינורות PCR. כדורי אלה הם בדרך כלל לבן. </li></ol> הברזל תיוג של בתאי גזע עובריים אנושיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים קליני כיתה סולפט protamine עם מים מזוקקים כדי לקבל 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​פתרון המניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתוך שפופרת המכילה אדם בתאי גזע עובריים מדיה, תרבות, להוסיף ferumoxides על 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​ואחריו תוספת של 12 מיקרוגרם / סולפט protamine מ&quot;ל. מערבבים את הפתרון נמרצות במשך חמש דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף פתרון מעורב לסכום השווה של התקשורת בתרבות התא כדי להשיג ריכוז סופי של 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​של ferumoxides ו 6 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​של סולפט protamine לתאי התווית. דגירה תאים בפתרון זה למשך 12 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים פעמיים עם PBS, עם לשטוף האחרון המכילה הפרין 10U/ml לפזר את מורכבות תאי ferumoxides-protamine סולפט. לאחר כביסה, trypsinize תאים כדי לקבל השעיה תא בודד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים aliquot למספר הנדרש של דגימות. לאחר כביסה, מחדש להשעות כל גלולה עם 200 PBS μL ולהעביר לתוך צינורות PCR. כדורי אלה צריכים להיות כתום כהה בצבע חום. </li></ol> ביצוע תהודה מגנטית נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך רפאים כדי לייצב את צינורות המכילים את כדורי תא וגם כדי למנוע חפצים מהאוויר שמסביב במהלך סריקה. כדי לעשות זאת, תערובת של אגר 0.8% ו -1% של נחושת גופרתית במים מזוקקים ולהביא לרתיחה על ידי במיקרוגל במשך 5-7 דקות. מצננים את התערובת למשך שעה לפחות לפני 1 של סריקה להשיג ג&#39;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות המכילים את כדורי תא שכותרתו ממוקמים הפנטום לסריקה. במבחנה הסלולר MRI מבוצעת Signa HDX 3T MRI (GE Medical Systems) באמצעות סליל הברך קליניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את התאים שכותרתו מנגן על כל אחד משלושת הדגימות באמצעות הד ספין רצף: TR: זמן החזרה = 800 msec. TE; זמן אקו = מינימום, FOV, שדה הראיה = 12 x 12 ס&quot;מ; מטריצה ​​= 256x256, NEX 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את התאים ברזל שכותרתו באמצעות רצף הדרגתי-echo. אנו משתמשים בפרמטרים הבאים עבור הדמיה זו: TR = 100 msec; TE = 10 msec, FA, זווית להעיף = 30 °; FOV = 12 x 12 ס&quot;מ; מטריצה ​​= 256 x 256, NEX 1. </li></ol> ניתוח תוצאות ה-MRI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח תמונות של MRI בסריקה מתוך 4 מדגמים שונים של תאים מנגן שכותרתו: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמה מס &#39;1 היא השליטה שלנו המכיל תאים מודגרות ב 0.9% נתרן כלוריד לבד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמה מס &#39;2 מכיל תאים מודגרות מ&quot;מ 0.1 MnCl 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא # 3 מכיל תאים מודגרות ב 0.1 מ&quot;מ MnCl 2 עם 5 מיקרומטר של Ca 2 + ערוץ אגוניסט, (ים )-(-)- מפרץ K8644. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדוגמא # 4 מכיל תאים מודגרות ב 0.1 מ&quot;מ MnCl 2 עם 250 מיקרומטר של Ca 2, ערוץ + אנטגוניסט verapamil. </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כצפוי, ההבדלים בעוצמות אות מתאי שכותרתו מנגן גלויים. בהשוואה לתאי שכותרתו טהורה עם מנגן, את עוצמת האות בצורה ברורה עליות בנוכחות אגוניסט ערוץ הסידן פוחתת בנוכחות של אנטגוניסט תעלות סידן. האזור שבו עוצמת האות גדלה עבור תאים שכותרתו מנגן נמדדים באמצעות תמונה J (NIH, Bethesda, MD, ארצות הברית). התוכנה אותה משמש לניתוח שטח של האות מחוץ תהודה כהה מתאי שכותרתו ברזל. גודל האות האפל של ברזל שכותרתו התאים תלוי במספר התאים או את מספר חלקיקי ברזל הכיל ידי התאים. במקרה זה, 1,000,000 תאים מראה שטח קטן יותר של האות האפל לעומת האות מ 3,000,000 תאים. </li></ol>

<ol><li>Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manganese-calcium+interactions+with+contrast+media+for+cardiac+magnetic+resonance+imaging%3A+a+study+of+manganese+chloride+supplemented+with+calcium+gluconate+in+isolated+Guinea+pig+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Radiol%22%5BJournal%5D)">Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts.</a> Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).</li>
<li>Aoki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+for+magnetic+resonance+imaging+with+the+T1+agent+manganese+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride.</a> NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).</li>
<li>Arbab, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+cell+labeling+with+protamine+sulfate+complexed+to+ferumoxides+for+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.</a> Blood. 104, 1217-1223 (2004).</li>
<li>Arbab, A. S., Frank, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+MRI+and+its+role+in+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular MRI and its role in stem cell therapy.</a> Regen Med. 3, 199-215 (2008).</li>
</ol>

תוצאות אלו מצביעות כי אינו מנגן להיכנס דרך ערוץ מתח מגודרת סידן, מנגן יכול לשמש חומר ניגוד MRI, אשר יכול גם להציג את כדאיות התא. לכן, אנו ממליצים מנגן מונחה MRI יכול להיות שימושי כדי לפקח על כדאיות התא לאחר ההשתלה של בתאי גזע עובריים אנושיים לתוך שריר הלב.

<table><tbody><tr><td>מנגנז כלוריד טטרהידרט</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8054</td><td></td></tr><tr><td>(S)-(-)-Bay K8644 </td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B133</td><td></td></tr><tr><td>(+)-Verapamil hydrochloride, תיטור מינימלי 99.0%</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4629</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלוריד 0.85-0.90% W/V</td><td>ריאגנט</td><td>VWR international</td><td>VW 3257-1</td><td></td></tr><tr><td>Feridex I.V. </td><td>ריאגנט</td><td>Berlex Laboratories</td><td>NDC 59338-7035-5</td><td>תמיסת ferumoxides להזרקה 11.2mg ברזל/mL</td></tr><tr><td>פרוטמין סולפט</td><td>ריאגנט</td><td>American Pharmaceutical Partners</td><td>NDC 63323-229-05</td><td>50 mg (10 mg/mL)</td></tr><tr><td>Knockout SR (תחליף סרום לתאי ES)</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>2- mercapt&amp;#8211;thanol 98+%</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 3148</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine 200mM 100x</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומייצין 10,000 units/ml</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>MEM חומצות אמינו לא חיוניות, תמיסה 100x</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>Signa HDx 3T MRI</td><td>כלי</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>סליל ברך קליני</td><td>כלי</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr></tbody></table>

ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) הדגימו את היכולת לשקם את שריר הלב הפגוע. דימות תהודה מגנטית (MRI) התפתחה כאחד שיטות הדמיה משתלט על מנת להעריך את שיקום שריר הלב הפגוע. יתר על כן, לשעבר vivo סוכנים תיוג, כגון תחמוצת ברזל חלקיקים, להיות מועסק לעקוב בתרגום בתאי גזע המושתלים. עם זאת, שיטה זו אינה לפקח על נכס מהותי ביולוגיה תאית לגבי הכדאיות של התאים המושתלים. זה כבר ידוע כי כלוריד ומגנזיום (MnCl 2) נכנס לתאים באמצעות סידן מתח מגודרת (Ca 2 +) תעלות כאשר התאים הם פעילים ביולוגית, ומצטברים intracellularly לייצר T 1 אפקט התקצרות. לכן, אנו ממליצים מנגן מונחה MRI יכול להיות שימושי כדי לפקח על כדאיות התא לאחר ההשתלה של hESC לתוך שריר הלב. בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית hESC עם MnCl 2 ואיך תאים אלה ניתן לראות בבירור באמצעות MRI במבחנה. במקביל, הפעילות הביולוגית של Ca 2 + ערוצים תהיה מווסתת ניצול הן Ca 2 + ערוץ אגוניסט אנטגוניסט וגם כדי להעריך את השינויים אותות במקביל.

בסרטון הזה, אנו מראים כיצד תווית בתאי גזע עובריים אנושיים (hESC) מנגן עם כלוריד (MnCl<sub&gt; 2</sub&gt;) אשר יכול להיכנס לתאים באמצעות מתח מגודרת ערוצי סידן כאשר התאים הם פעילים ביולוגית. בנוסף, אנו מציגים את השימוש MnCl<sub&gt; 2</sub&gt; כסוכן הסלולר לעומת MRI כדי לקבוע את הכדאיות במבחנה של hESC.

תאי גזע עובריים אנושיים (hESC) הדגימו יכולת לשקם את השריר הלבבי הפגוע. דימות בתהודה מגנטית (MRI) הפך לאחד מ...

דימות בתהודה מגנטית, או MRI, הפך לאמצעי דימות דומיננטי לאיתור תאי גזע מושתלים ולהבנה טובה יותר של מנגנון ההתחדשות. מחקרי MRI אלו משתמשים בדרך כלל בננו-חלקיקי תחמוצת ברזל כחומר ניגוד לדימות. עם זאת, חלקיקי ברזל עלולים להישאר ברקמה לאחר מות תאי הגזע ועלולים להיספג על ידי מקפגוים, מה שיוצר תנאים שאינם אופטימליים למעקב אחר התאים המושתלים החיים.סרטון זה ידגים כי מנגנז כלוריד הוא חלופה יעילה. סימון של חומר ניגוד באמצעות מנגנז כלוריד מציע מספר יתרונות על פני סימון בתחמוצת ברזל. לדוגמה, מנגנז מעניק אות חיובי, בעוד שחלקיקי יון מייצרים אות שלילי.בנוסף, ידוע כי יוני מנגן חודרים לתאים דרך תעלות סידן תלויות-מתח. לכן, הופעתם ב-MRI מעידה על קיום תאים חיים ופעילים ביולוגית. שלום, אני Uni mother מהמעבדה של Philip Yang בחטיבה לרפואה קרדיווסקולרית באוניברסיטת סטנפורד.היום אראה לכם כיצד לסמן תאי גזע עובריים אנושיים במנגנז עבור דימות בתהודה מגנטית. הליך זה כולל את השלבים הבאים: סימון תאי גזע עובריים אנושיים באמצעות חומרי ניגוד, ביצוע דימות בתהודה מגנטית תאית in vitro וניתוח תוצאות ה-MRI. בואו נתחיל.השלב הראשון בהליך הסימון הוא הכנת תאי גזע עובריים אנושיים, אשר תורגלו בתנאים נטולי עוברי. לצורך כך, בצעו טריפסין לתאים למשך חמש דקות, ולאחר מכן נטרלו את הטריפסין על ידי הוספת מצע תרבית. לאחר מכן, שקעו את התא

in-vitro-labeling-human-embryonic-stem-cells-for-magnetic-resonance

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

להערכת טיפולים בתאי גזע חדש חשוב הלא פולשני המסלול התאים מוזרקים in vivo. סרט הווידאו הזה יראה לכם כיצד לתייג אדם בתאי גזע mesenchymal ו עובריים עם סוכני תחמוצת ברזל מבוסס בניגוד in vivo עבור הבאים MR הדמיה in vivo.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

וידאו זה מציג טכניקות תיוג של אדם בתאי גזע עובריים ותאי גזע mesenchymal עם צבעי ניאון. טכניקה זו יכולה לשמש in vivo מעקב בתאי גזע המושתלים עם הדמיה אופטית עבור מתאמים histopathological עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

תיוג בתאי גזע עם צבעי ניאון על איתור פולשני עם דימות אופטי

עם העניין הגובר טיפולים בתאי גזע, טכניקות הדמיה מולקולרית הם אידיאליים עבור התנהגות בתאי גזע ניטור לאחר ההשתלה. הגנים כתב בלוציפראז אפשרו פולשני, הערכה חוזרת של הישרדות התא, מיקום התפשטות in vivo. וידאו זה יהיה להדגים כיצד לעקוב אחר התפשטות hESC בעכבר חי.

במבחנה פליטת אור הדמיה vivo ג&#39;ין הכתב של בתאי גזע עובריים אנושיים

המטרה של המצגת היא להדגים שיטה לשחזור מאוד ליצור מטריצה ​​תא הקשורים שתלים גזע פגמים הסחוס, אשר יכול להיות דמיינו עם MR הדמיה. בתאי גזע מסומנים עם ה-FDA Ferumoxides, מעורבב עם agarose, מושתלים לתוך פגמים סחוס צילמו עם סורק 7T MR.

השרשה של Ferumoxides תווית אדם בתאי גזע mesenchymal ב פגמים סחוס

אנו מתארים טכניקה תיוג ומעקב בתאי גזע עם ה-FDA, תחמוצת ברזל פאראמגנטי (SPIO), ferumoxytol (Feraheme). זו טכניקת דימות הסלולר אשר מנצל מגנטית (MR) תהודה להדמיה, הוא נגיש לניטור ארוך טווח האבחנה של להצליח או להיכשל engraftments תא גזע לחולים.

תיוג בתאי גזע עם Ferumoxytol, ה-FDA אוקסיד Nanoparticle ברזל

מאמר זה מתאר רצף של אירועים אופטימיזציה עבור דימות multimodal של שתלי הסלולר מכרסם במוח באמצעות: (i) ביולומינציה vivo ו הדמיה באמצעות תהודה מגנטית, ו (ב) הודעה מורטם ניתוח היסטולוגית. השילוב בין שיטות הדמיה על חיה אחת מאפשר הערכה שתל נייד עם רגישות גבוהה רזולוציה, וספציפיות.

Multimodal הדמיה של השתלת תא גזע במערכת העצבים המרכזית של עכברים

מעקב של תאים באמצעות MRI זכה לתשומת לב ראויה לציון בשנים האחרונות. פרוטוקול זה מתאר את התיוג של תאים דנדריטים עם פלואור...

נדידת תאים דנדריטים ניטור באמצעות<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H דימות תהודה מגנטית

אנו מתארים פרוטוקול כללי לin vivo מעקב תא באמצעות MRI במודל של עכברים עם תאי שכותרתו לשעבר vivo. פרוטוקול טיפוסי לתיוג תא, עיבוד רכישת תמונה וכימות כלול.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

אנו מתארים סדרה של שיטות להזריק צבעים, וקטורי DNA, וירוסים, ותאים במטרה לעקוב אחר שני גורל התא והפנוטיפ של תאי אנדוגני והמורכבים שמקורם בתאים עובריים או pluripotent בעוברי עכברים ביום עוברי (E) 9.5 ושלבים מאוחרים יותר של פיתוח.

תיוג תא והזרקה בפיתוח לבבות עכבר עוברי

Chondrogenesis מתאי גזע דורש כוונון עדין תנאי התרבות. כאן, אנו מציגים גישה מגנטית עבור עיבוי תאים, צעד חיוני ליזום chondrogenesis. בנוסף, אנו מראים כי התבגרות דינמית בתוך bioreactor חלה גירוי מכאני כדי המבנים הסלולר ומשפרת ייצור תאי מטריקס סחוסים.

צבירת Cell מגנטי גזע 3D והתבגרות Bioreactor להתחדשות סחוס

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור משלוח של תאי גזע mesenchymal לא פולשנית (MSC) ומעקב במודל העכבר של פציעה מוחית טראומטית. ברזל פאראמגנטי תחמוצת הברזל מועסקים כהדמיה תהודה מגנטית (MRI) בדיקה עבור התיוג MSC ו פולשני ב vivo מעקב אחר משלוח intranasal באמצעות MRI בזמן אמת.

מעקב על תחמוצת ברזל פאראמגנטית-מתויג תאי גזע Mesenchymal באמצעות ה-MRI לאחר Intranasal משלוח ב מודל טראומטי פציעה במוח

למד סימון בתאי גזע עובריים אנושיים באמצעות כלוריד מנגן לצורך דימות תהודה מגנטית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר תאים חיים באמצעות אות חיובי ב-MRI, בניגוד לחלקיקי תחמוצת ברזל.

ב סימון במבחנה של בתאי גזע עובריים אנושיים עבור דימות תהודה מגנטית

גלה סרטונים נוספים