Name: השיטה MODS לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 6 s
Description: למד את שיטת MODS לאבחון שחפת ושחפת עמידה לתרופות באמצעות תרבית נוזלית. שיטה זו מאפשרת זיהוי מהיר וזול במיוחד במקומות עם משאבים מוגבלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות שון Fitzwater וכרמן Giannina לונה קולומבו עבור קטע וידאו צמיחה שחפת זמן לשגות. אנו מודים מרטי רופר על המשוב יסודי מעולה שלה במהלך העריכה עריכה משותפת המדריך למשתמש, שממנו פרוטוקול הנוכחי נלקח בעיקר מילה במילה. הפקת וידאו זה מומן על ידי NIH / פוגארטי המרכז הבינלאומי <a href="http://www.fic.nih.gov/">http://www.fic.nih.gov/</a> דוד AJ מור תרם כמו עמית מחקר Wellcome Trust קליניים ברפואה Reader טרופי ועל מחלות זיהומיות באימפריאל קולג&#39; בלונדון (Fellowship פרס מספר 078067/Z/05). מארק פ בריידי תרמו כמו עמית NIH / פוגארטי מרכז המחקר הבינלאומי.

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו פתרונות מניות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוספט חיץ מניות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 950ml של תמיסת נתרן dibasic (9.47g של dibasic סודיום פוספט מומס במים מזוקקים 1000ml) עם 950ml של תמיסת אשלגן זרחתי monobasic (9.07g של פוספט monobasic אשלגן מומס במים מזוקקים 1000ml) ומערבבים; לשמור על הגב של 50 מ&quot;ל כל פתרון כדי להתאים pH במידת הצורך </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם ל-pH 6.8 ± 0.2: להוסיף נתרן זרחתי פתרון dibasic להעלות pH; להוסיף פתרון פוספט אשלגן monobasic ל-pH נמוך יותר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות לעקר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צלחת aliquot 100μl הפתרון פוספט חיץ על מדיום אגר מזין בצלחת פטרי לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות כדי לאשר עקרות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן במקרר ב 2-8 מעלות עד חודש הערה: כל דגימת כיח דורש 10 מ&quot;ל של תמיסת חיץ פוספט </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיהור מניות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב כרכים שווה של פתרון סודיום הידרוקסיד (8.0g של סודיום הידרוקסיד מומס במים מזוקקים 200 מ&quot;ל סטרילי) ו ציטראט פתרון נתרן (סודיום ציטרט 5.8g של מים מזוקקים 200 מ&quot;ל מזוקקים סטריליים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן במקרר ב 2-8 מעלות עד חודש הערה: כל דגימת כיח דורש 2ml של המניה טיהור </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות מניות התקשורת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Into 900ml של מים מזוקקים סטריליים להוסיף 3.1ml של גליצרול 1.25g של casitone ו 5.9g של אבקת בינוני 7H9, לערבב עם תסיסה מתמדת עד נמס לגמרי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגניב ולחלק את המדיום סטרילי לתוך aliquots 4.5ml ב סטרילי 16x 100 מ&quot;מ צינורות זכוכית להכנת המדגם, 10.8ml aliquots להכנת פתרונות אנטיביוטית בקרות פנימיות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות כדי לוודא סטריליות (חוסר עכירות) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות ב 2-8 ° C עם מכסה סגור היטב עד חודש הערה: כל דגימת כיח דורש אחד שפופרת המכילה 4.5ml של המדיום 7H9 </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניות פתרונות לאנטיביוטיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> א Isoniazid מניות (8 מ&quot;ג / מ&quot;ל) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמיס 20 מ&quot;ג isoniazid לחלוטין במים מזוקקים 2.5ml סטרילית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון עם מסנן מזרק 0.2μm עבור ממס מימית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן aliquots 20μl ב סטרילי צינורות צנטריפוגה מיקרו ב -20 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים הערה: כל aliquot 20μl מאוחסנים מספיקה עד 100 דגימות (כולל בזבוז) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב ריפמפיצין מניות (8 מ&quot;ג / מ&quot;ל) </li></ol><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים ריפמפיצין 20mg לחלוטין 1.25ml DMSO </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1.25ml מים מזוקקים לערבב סטרילית </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון עם מסנן מזרק 0.2μm עבור ממיס אורגני </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן aliquots 20μl צינורות microcentrifuge סטרילי ב -20 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים הערה: כל aliquot 20μl מאוחסנים מספיקה עד 100 דגימות (כולל בזבוז) </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכינו פתרונות עובד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיהור עובדים פתרון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים 0.1g של גבישים NALC בכל 20ml של תמיסת טיהור נדרש הערה: כל הצרכים מדגם 2ml של פתרון טיהור הערה: מחק כל פתרון NaOH-NALC טיהור כי נותר ללא שימוש לאחר 24 שעות כמו NALC מאבד פעילות mucolytic לאורך זמן </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות התקשורת עובדים פתרון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 שפופרת עם המדיום 7H9 למדגם כל כיח להיות מעובד, בתוספת 1 שפופרת נוספת עבור כל צלחת (עבור העמודה שליטה שלילי) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 צינורות של המדיום 7H9 עבור שולט חיובית (3 אם זנים monoresistant משמשים) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1-2 מבחנות עם 7H9 10.8ml להכנת פתרון אנטיביוטי </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 0.5ml OADC כדי 4.5ml של 7H9 בצינור כל המדגם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף OADC 1.2ml לצינורות עם 7H9 10.8ml </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים בצד 2 צינורות עם 5 מ&quot;ל 7H9-OADC עבור פקדי חיובית, שפופרת (ים) עם 12ml 7H9-OADC לשמש להכנת פתרון אנטיביוטיקה (אלה אינם דורשים פנטה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פנטה מחדש ולהוסיף 0.1ml אל צינור כל מדגם של צינורות בקרה שלילית (7H9-OADC-פנטה: הנפח הכולל = 5.1ml) הערה: בינוני מלא עם פנטה (7H9-OADC-פנטה) משמש דגימות כיח בקרות שלילי; להשתמש 7H9-OADC ללא פנטה עבור פקדי חיובית להכנת פתרון אנטיביוטי </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרונות עבודה לאנטיביוטיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1. ראה איור 1 עבור צעדים כדי להפוך את הפתרון עובד אנטיביוטי בצלחת 24-מנוצל היטב הערה: לקבלת התוצאות הרגישות מדויק, הריכוזים אנטיביוטי סופי הן קריטיות. ההליך הבא מתאים laboratories מצויד micropipettes. אם micropipettes אינם זמינים, מזרקים טוברקולין ניתן להשתמש בסדרת שונים של דילולים המתואר במדריך למשתמש נספח 3 ב modsperu.org הערה: אין להקפיא מחדש או שימוש חוזר לעבוד אנטיביוטיקה או פתרונות מניות כפעילות התרופה עלולים ללכת לאיבוד מחק את כל פתרונות אנטיביוטיקה בשימוש בסוף איור עיבוד יום 1.. ביצוע הפתרונות עובדים אנטיביוטי (מתוך מדריך למשתמש ב modsperu.org) </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כיח מדגם צלחת הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טהור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום 2ml המדגם כיח לתוך צינור צנטריפוגה 15 מ&quot;ל (אם פחות, לעשות עד 2ml עם חיץ פוספט, אם יותר, להשתמש רק 2ml) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2ml NaOH-NALC פתרון </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור שווי בחוזקה מערבולת למשך 20 שניות, להפוך הצינור כדי להבטיח NaOH-NALC המגעים לפתרון כל משטח הפנים של הצינור ואת המכסה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו לעמוד על מינימום של 15 דקות - יכול להאריך על ידי כמה דקות אם המדגם הוא צמיגה במיוחד. כדי למנוע את הטיפול, לא יעלה על 20 דקות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את הצינור כדי 14ml עם חיץ פוספט (pH 6.8) כדי לנטרל אלקלי לסיים את תהליך טיהור, ומערבבים היטב על ידי צינור היפוך 4 פעמים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב 3000 גרם במשך 15 דקות (ראה נספח 2 במדריך למשתמש ב modsperu.org עבור המשוואה של סיבובים לדקה צורך להגיע 3000 ז) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות לצקת את supernatant לתוך מיכל פסולת נוזלית עם hypochlorite נתרן 10% או חומר חיטוי מתאים אחר ולשמר את גלולה </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת מתלה מדגם גיבוי סופי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש ב-7H9-OADC פנטה (מהצינור המכיל 5.1ml), resuspend המדגם גלולה בהיקף כולל של 2ml בצינור צנטריפוגה עם פיפטה פסטר, ומערבבים היטב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר 1ml של השעיה מדגם חנות בתוך שפופרת microcentrifuge ב 2-8 מעלות צלזיוס כגיבוי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את 1ml השני של השעיה מדגם הצינור עם הנותרים 7H9-OADC-פנטה, ומערבבים היטב. זהו הפתרון הסופי מדגם מוכן ציפוי </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הצבת השעיות מדגם לתוך צלחת 24 גם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום 900μl ההשעיה המדגם הסופי לתוך כל אחד 4 בארות של עמודה בצלחת 24 הבאר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור עם דגימות נוספות עד שכל העמודות של צלחת, למעט טור 3, מלאים (או עד שכל הדגימות מצופה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום 900μl של המדיום 7H9-OADC ללא מדגם של 4 הבארות של טור 3 של כל צלחת מדגם (בקרות פנימיות שליליות) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת אנטיביוטיקה דגימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת טפטפת מרובת ערוצים, 4 טיפים למלא בקפידה עם 100μl מבארות עם פתרונות עובד 7H9-OADC ו אנטיביוטי (טור 2 בדילול אנטיביוטי צלחת ראה תרשים 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את aliquots 100μl ל 1 בארות טור עם פתרונות לדוגמה 900μl בלי לגעת בצלחת או מדגם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הפעולה עד שכל העמודות קיבלו את 100μl נוסף בינוני (נקי מסמים בארות) או פתרונות אנטיביוטי (כולל עמודה בקרה שלילית 3) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצלחת עם המכסה ומניחים שקית רב סגר (Ziplock) ניילון וסוגרים (תיק לא נפתח שוב מכאן ואילך) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 ° C (CO 2 העשרה לא הכרחי) </li></ol></li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרת איכות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרות שליליות הן לרוץ על כל צלחת. נוכחותם של צמיחה כלשהי בכל הבארות בטור הביקורת שלילי מעיד צולבות זיהום, ולכן את הצלחת כולה חייבת להיות מושלך לבין דגימות מחדש מצופה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שולטת חיובית מנוהלות על צלחת נפרדת בסוף היום. אחת מלאה סמים רגישים למתח מנוהלת בעמודה וגם עמידות להתאמץ כדי INH ו RIF מנוהלת בעמודה אחרת. אם קיים חשש לגבי הפעלת הלחץ MDR, הן זן monoresistant INH ו זן RIF monoresistant ניתן להפעיל במקום של זנים רגישים ו - MDR. כל שולטת חיובית צריך הצמיחה מסמים בארות להוכיח כי הצמיחה תמיכה בתקשורת. כדי להדגים כי ריכוזי התרופה נכונים, את המתח רגישים לא צריך לגדול INH או RIF בארות, אבל את המתח MDR צריך לגדול גם לגדול INH ו RIF בארות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלייט קריאה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם כל יום של ציפוי כמו &quot;יום 0,&quot; קריאה צלחת מתחיל ביום 5, ואם שלילית על יום 5 הקריאה נעשית כל יום (או לסירוגין, תלוי בעומס העבודה) עד 14 יום ולאחר מכן כל 2-3 ימים מיום 15 -21. פלטות נבחנים עלמיקרוסקופ אור הפוכה במטרה 10x </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות חיובית היא זו שבה יש שתי יחידות או יותר להרכיב המושבה (&gt; 2 CFU) הן ללא שימוש בסמים בארות. צמיחה mycobacterial מוקדם נראה כמו פסיקים קטן מעוקל או ספירלות (5-9 ימים). הקמת המושבה בדרך כלל מתקדמת כדי &quot;חבלים&quot; או &quot;הקשרים&quot; (ראו תמונה על ספריה modsperu.org) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום תרבות חיובית של 2 נקי מסמים בארות, הסמים המכילים בארות יש לקרוא. כל צמיחה בנוכחות התרופה מציין עמידות לתרופה זו. הערה: אם הקריאה של סמים המכילים בארות נעשה&gt; 1 שבוע אחרי תרבות חיובית הוא ציין את התרופה ללא בארות, זה לא יכול לייצג את ההתנגדות כמו פריצת דרך צמיחה נתפסת לעתים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דוגמאות שאינן חיוביות על ידי 21 יום נחשבים תרבויות שלילי </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכירות הבארות היא תוצאה של זיהום יתר, בעוד הצמיחה mycobacterial אינו תוצאה של עננות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם סיום 21 ימי התרבויות עשוי להיות מושלך. תרבויות להישאר שקיות אטום שלהם ממוקמות בתוך שקיות החיטוי ו autoclaved על 121-124 מעלות צלזיוס במשך 45-60 דקות </li></ol></li></ol>

<ol><li>Arias, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+detection+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis.</a> Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).</li>
<li>Caviedes, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+efficient+detection+and+drug+susceptibility+testing+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+sputum+by+microscopic+observation+of+broth+cultures.+The+Tuberculosis+Working+Group+in+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru.</a> J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).</li>
<li>Caviedes, L., Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+MODS%3A+a+low-cost%2C+low-tech+tool+for+high-performance+detection+of+tuberculosis+and+multidrug+resistant+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis.</a> Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).</li>
<li>Caws, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+MODS+culture+technique+for+the+diagnosis+of+tuberculous+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis.</a> PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).</li>
<li>Ejigu, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic-observation+drug+susceptibility+assay+provides+rapid+and+reliable+identification+of+MDR-TB%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Tuberc+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).</li>
<li>Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+occupational+tuberculosis+in+National+Tuberculosis+Programme+laboratories+in+Korea%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Tuberc+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).</li>
<li>Mello, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+resistance+to+isoniazid+or+rifampin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin.</a> J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+prospects+for+the+MODS+assay+in+multidrug-resistant+tuberculosis+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis.</a> Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrequent+MODS+TB+culture+cross-contamination+in+a+high-burden+resource-poor+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+the+diagnosis+of+TB%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB.</a> N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+observation+drug+susceptibility+assay%2C+a+rapid%2C+reliable+diagnostic+test+for+multidrug-resistant+tuberculosis+suitable+for+use+in+resource-poor+settings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings.</a> J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).</li>
<li>Moore, D. A., Roper, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+smear-negative+tuberculosis+in+people+with+HIV%2FAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS.</a> Lancet. 370, 1033-1033 (2007).</li>
<li>Oberhelman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+recovery+of+Mycobacterium+tuberculosis+from+children+using+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method.</a> Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).</li>
<li>Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MODS+assay+for+the+diagnosis+of+TB%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">MODS assay for the diagnosis of TB.</a> N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).</li>
<li>Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+in+drug+susceptibility+testing+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).</li>
<li>Shiferaw, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+multidrug-resistant+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).</li>
<li>Tovar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+diagnosis+of+pleural+tuberculosis+using+the+microscopic-+observation+drug-susceptibility+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique.</a> Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).</li>
<li>Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+sputum-scarce+HIV-associated+pulmonary+tuberculosis+in+Lima%2C+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru.</a> Lancet. 365, 150-150 (2005).</li>
</ol>

Assay MODS מיועד משאב מוגבל הגדרות. בפעם הראשונה, MODS מביא את היכולת לאיתור מהיר תרבות נוזלי של שחפת multidrug שחפת עמידים משאב מוגבל רק על הגדרות תחת 3 דולר הבדיקה. MODS הוא שאינה קניינית, איטרטיבי מתודולוגיה, והקהילה MODS מעוניינת תמיד שיפורים מעבדות אחרות הצליחו לעשות. החשש הוא חוזר biosafety של תרבות התקשורת נוזלי משחפת בגלל נוזלים יכול להיות שנשפך או aerosolized. אנו מאמינים כי assay MODS הוא biosafe יותר assay כל כך רגישות מעורב בעקיפין בדיקות סמי...

<table><tbody><tr><td>מקרר/מקפיא</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>לאחסון מצע דשחה (broth) שהוכן מראש ומלאי של אנטיביוטיקה</td></tr><tr><td>ערבוב במכשיר וורטקס (Vortex)</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>כדי לסייע בדה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>לריכוז ליחה; מסוגל להגיע ל-3000 g; d&amp;#8211;אין צורך בקירור, אך חובב שהדבר יהיה בטוח ביולוגית (ניתן לאטום את הדליים)</td></tr><tr><td>אינקובטור (37 מעלות צלזיוס)</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>לתרבית; אין צורך בהעשרה ב-CO2</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אור הפוך</td><td>מיקרוסקופ</td><td></td><td></td><td>לקריאת פלטות MODS</td></tr><tr><td>אוטוקלאב</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>לעיקור מצעים, PBS וצלחות משומשות</td></tr><tr><td>מאזניים</td><td>ציוד</td><td></td><td></td><td>לשקול isoniazid, rifampicin ו-NALC</td></tr><tr><td>ציר Middlebrook 7H9 (Difco)</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0713-17-9</td><td>500 גרם/בקבוק; בסיס למצע גידול</td></tr><tr><td>Casitone (קזאין שעבר עיכול פןקראטי)</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0259&amp;#8208;17&amp;#8208;9</td><td>500 גרם/בקבוק; בסיס למצע גידול</td></tr><tr><td>גליצרול (גליצרין) ליופיליזציה (lyophilized)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G&amp;#8208;33&amp;#8208;500</td><td>500 מ"ל לבקבוק; בסיס למצע גידול</td></tr><tr><td>PANTA (תערובת אנטיביוטיקה ליאופיליזציה BD) </td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>B4345114</td><td>6 בקבוקים למארז; תוסף אנטיביוטי למצע גידול</td></tr><tr><td>OADC (העשרה Middlebrook OADC של BD)</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11886</td><td>10 x 20 מ"ל למארז; תוסף למצע תזונתי</td></tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד (Hibri-Max)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-2650</td><td>100 מ"ל לבקבוק; להכנת תמיסת אם של rifampicin</td></tr><tr><td>תמיסות מאסף של אנטיביוטיקה: isoniazid</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-3377</td><td>50 גרם לבקבוק; בדיקת רגישות ישירה</td></tr><tr><td>מלאי אנטיביוטיקה: ריפמפיצין (rifampicin)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-3501</td><td>1 גרם/בקבוק; בדיקת רגישות ישירה</td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד (גרגירים)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>500 גרם/בקבוק; דה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>נתריום ציטראט (מלח טרי-נתריום דיהידראט)</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4641</td><td>500 גרם/בקבוק; דה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>N-acetyl-L-cysteine</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7250</td><td>50 גרם/בקבוק; דה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>גביש אשלגן פוספט מונובסי, KH2PO4</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>500 גרם/בקבוק; דה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי, אנहाइडראס. Na2HPO4</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>500 גרם/בקבוק; דה-קונטמינציה של ליחה</td></tr><tr><td>נתרן היפוכ לוריט</td><td>ריאגנט</td><td>מסיר כתמים ביתי המכיל כלור (אקונומיקה)</td><td></td><td>להשליך פסולת מזוהמת</td></tr><tr><td>מבחנות צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל (פוליפרופילן, 15 מ"ל Falcon 35)&amp;#8208;2096)</td><td>מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>14&amp;#8208;959&amp;#8208;49B</td><td>500 יחידות למארז; לדה-קונטמינציה וריכוז של ליחה</td></tr><tr><td>פלטות עם 24 בארות (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35)&amp;#8208;3047)</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td>50 צלחות למארז; לתרבית ולקריאה</td></tr><tr><td>שקיות פוליאתיל ניתנות לסגירה 6 X 6 &amp;#8220; (שקיות עם סגירה הרמטית)</td><td>מתכלה</td><td></td><td></td><td>עבור ביו-אבטחה, להכיל פלטה בעלת 24 בארות</td></tr><tr><td>מבחנות זכוכית עם מכסה (16 x 100 מ"מ ו-18 x 145 מ"מ)</td><td>חומר מתכלה</td><td>VWR international</td><td>47729-583</td><td>500 מבחנות למארז; לאחסון של מנות (aliquots) של מצע צמיחה נוזלי (broth) שהוכן</td></tr><tr><td>מבחנות מיקרוצנטריפוגה עם פקק הברגה (1.5 מ"ל)</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>05&amp;#8208;669&amp;#8208;22</td><td>1000 יחידות למארז; לאחסון מנות (aliquots) של תטירי אנטיביוטיקה</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;מסנני $\mu\text{m}$ (ממסים מימי) מסנן מזרקה Millex blue</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGL 025 OS</td><td>50 יחידות למארז; לסינון מלאי אנטיביוטיקה</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;מסנני מזרקה (ממסים אורגניים) Millex צהוב</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV 033 RS</td><td>50 יחידות למארז; לסינון מלאי אנטיביוטיקה</td></tr><tr><td>פיפטות פסטור חד-פעמיות, זכוכית בורוסיליקט 9&amp;#8243;</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>13&amp;#8208;678&amp;#8208;20°C</td><td>720 יחידות למארז; לערבב PANTA עם תערובת המצע</td></tr><tr><td>טיפים עם מחסום לארסול 1000&amp;#8208;1300&amp;mu;נראה כי לא סיפקת טקסט לתרגום. אנא הזן את הטקסט המדעי שברצונך לתרגם מאנגלית לעברית.</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>02&amp;#8208;707&amp;#8208;51</td><td>1000 יחידות למארז; להעברת מצע לתוך צלחת</td></tr><tr><td>USA Scientific Tips One 1&amp;#8208;200&amp;mu;טיפים צהובים (Yellow tips)</td><td>חומר מתכלה</td><td>Fisher Scientific</td><td>1111&amp;#8208;0006</td><td>1,000 טיפים לשקית; לדילול מלאי אנטיביוטיקה</td></tr></tbody></table>

השיטה mods לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug

The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

חולים עם שחפת ריאתית פעילה (TB) 10-15 להדביק אנשים אחרים בשנה, מה שהופך לאבחון שחפת פעילה חיוני הן לרפא את המטופל ומניעת זיהומים חדשים. יתר על כן, את הופעתה של multidrug שחפת עמידים (MDRTB) כלומר זיהוי של עמידות לתרופה הכרחי לעצור התפשטות של זנים עמידים לתרופה. תצפית מיקרוסקופית, רגישות לתרופות (MODS) assay היא בעלות נמוכה, low-tech כלי לגילוי בעל ביצועים גבוהים של שחפת MDRTB. Assay MODS מבוססת על שלושה עקרונות: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) גדל מהר יותר בתקשורת נוזל מאשר על התקשורת מוצק 2) צמיחה MTB מיקרוסקופי ניתן לאתר מוקדם יותר בכלי התקשורת נוזל מאשר לחכות להופעת מקרוסקופית של מושבות על התקשורת מוצק, כי הצמיחה האופיינית MTB, שמאפשר לו להבחין בין זיהום mycobacteria או פטרייתי או חיידקי טיפוסיות 3) התרופות isoniazid ו ריפמפיצין ניתן לשלב assay MODS כדי לאפשר זיהוי ישיר סימולטני של MDRTB, obviating את הצורך תת לבצע תרופה עקיף רגישות הבדיקה. אבחון הנוכחית מתחרים הם הקשו על ידי רגישות נמוכה למרוח עם כיח, עיכובים ארוכים עד לאבחון עם תרבות התקשורת מוצק, עלות גבוהה להחריד עם נוזל התקשורת השיטות הקיימות התרבות, צריך לעשות תת לבדיקת רגישות עקיף התרופה כדי לזהות MDRTB. לעומת זאת, שיטה שאינה קניינית MODS בעל רגישות גבוהה עבור שחפת MDRTB, היא שיטה התרבות מהירה יחסית, מספק בדיקות סימולטני הרגישות תרופה MDRTB, והוא נגיש מוגבל משאב הגדרות בבית רק תחת $ 3 עבור בדיקת שחפת MDRTB.

תצפית מיקרוסקופית, רגישות לתרופות (MODS) assay היא בעלות נמוכה, low-tech כלי לגילוי בעל ביצועים גבוהים של שחפת (TB) ו multidrug עמיד שחפת (MDRTB). וידאו זה מתאר את שיטת התקשורת MODS נוזלי תרבות.

השיטה MODS לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug

מטופלים עם שחפת ריאותית (TB) פעילה מדביקים 10–15 אנשים אחרים בשנה, מה שהופך את האבחנה של שחפת פעילה לחיונית הן לריפוי המטופל והן ל...

the-mods-method-for-diagnosis-tuberculosis-multidrug-resistant

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בדיקות רגישות Antimicrobial של Mycobacterium tuberculosis מאתגרת אך קריטי עבור הטיפול בחולה. מתכונת זו צלחת microtiter מציע בדיקה של 12 תרופות antimycobacterial ומספק ריכוז מעכבות המינימלי (MIC) ערכים, אשר יסייע הטיפול המתאים.

רגישות בדיקת Antimicrobial של קומפלקס שחפת Mycobacterium עבור תרופות הקו הראשון והשני על ידי דילול מרק בפורמט פלייט microtiter

בדיקת MTB / RIF אקספרט משלב טיהור המדגם, דיבורית המבצע, ב-Board עיבוד המדגם, ו-Ultra-רגיש חמי מקונן PCR לזיהוי בו זמני...

אבחון שחפת ריאתית עם מבחן אקספרט MTB / RIF

Microarray הגברה משלב הכלאת הגברה וmicroarray PCR אסימטרי לתוך תא בודד, אשר מייעל באופן משמעותי את זרימת עבודה microarray למשתמש הקצה. פישוט זרימת העבודה microarray הוא צעד ראשון הכרחי ליצירת אבחון מבוסס microarray שניתן להשתמש באופן שיגרתי בסביבות נמוכים יותר משאבים.

הוכחת סמים רבים עמידים<em&gt; חפת Mycobacterium</em&gt; Microarray ההגברה

פתחנו מערכת הקרנה מודולרית תפוקה גבוהה לגילוי תרכובות רומן נגד שחפת Mycobacterium, מיקוד תאי ב-המרק גובר חיידקים כמו גם רעילה לתאים נגד התא המארח היונק.

מערכת לסינון יעילות Cytotoxicity של מעכבי מיקוד תאי<em&gt; שחפת Mycobacterium</em

אנו מציגים שיטה אופטימלית למיצוי DNA מליחה מזוהמת באמצעות שיטת מיצוי מבוססת מטריצה בשילוב עם טיהור חרוזים מגנטיים לריצוף ממוקד במורד הזרם של Mycobacterium tuberculosis.

מיצוי DNA מבוסס מטריצה לריצוף ממוקד של הדור הבא על דגימות ליחה מטוהרות

כאן אנו מציגים פרוטוקול לזיהוי מועמדים פוטנציאליים לתרופות נגד שחפת באמצעות סקר פנוטיפי, הכולל סינתזה כימית של תרכובת 4-אמינוקווינולין, קביעת ריכוז המעכב המינימלי שלה נגד מיקובקטריום טוברקולוזיס, והערכת הציטוטוקסיות שלה בקווי תאים יונקים.

זיהוי מועמדים פוטנציאליים לאנטי-שחפת: מדריך שלב אחר שלב לסינתזה, קביעת MIC והערכת ציטוטוקסיות בתאי יונקים

אנופלס יתושים stephensi הם וקטורים עבור מלריה בהודו המאכלסים וברחבי אסיה. וידאו זה מדגים את הטכניקה לביצוע microinjections של מין זה עם transgenes כי יעניק התנגדות מלריה אל היתוש. הרבה המתודולוגיה הפגינו וידאו זה הוא ישים טכניקות microinjection של מינים יתושים אחרים.

הזרקת. עוברים stephensi ליצור מלריה עמידים יתושים

בפרוטוקול הזה אנחנו מדגימים את הביטוי, solubilization, וטיהור של חלבון קרום הביע recombinantly, MexB, כפי מורכב חלבון מסיס חומר ניקוי. MexB היא התנגדות הממברנה multidrug טרנספורטר מן החיידק Pseudomonas aeruginosa אופורטוניסטית הפתוגן.

הביטוי, solubilization דטרגנט, ועל טיהור Transporter ממברנה, חלבון ההתנגדות MexB Multidrug

טכניקה שלמים תרבות העובר מאפשר לנו עכבר התרבות עוברי...

שיטת התרבות העובר שלמים מכרסמים באמצעות Rotator מסוג התרבות מערכת בקבוק

אנו מספקים פרוטוקול חסכונית ומהירה genotyping מולקולרי מעסיקה מגוון ספציפיים primers ה-PCR כי ה-DNA היעד רצף ההבדלים בתוך אזור trnL-F הכלורופלסט spacer להבחין בין סוגים שונים...

PCR מבוסס genotyping שיטה להבחין בין זנים wild-type ו נוי של Imperata cylindrica</em

למד את שיטת MODS לאבחון שחפת ושחפת עמידה לתרופות באמצעות תרבית נוזלית. שיטה זו מאפשרת זיהוי מהיר וזול במיוחד במקומות עם משאבים מוגבלים.

השיטה MODS לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug

גלה סרטונים נוספים