Name: Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: למדו את שיטת הניתוח של מערכת העצבים המרכזית בזחלי Drosophila melanogaster. טכניקה זו מאפשרת חקירת מבנה ותפקוד עצבי תוך שימור רקמות לניתוח חלבונים ותבניות ביטוי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים 3 rd הזחלים instar, עוזב CNS מחוברת לציפורן. מקום צינור 1.5 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן של PBS (1x) המכיל פורמאלדהיד 2% עבור 40 דקות עם נדנדה. ; השתמש 250ul לכל CNS גזור 5-10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר פורמאלדהיד בקצרה לשטוף 3 פעמים עם PBS 0.1% + טריטון X-100 (PBST). השתמש משך דק פיפטה פסטר כדי למנוע אובדן של רקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלוק הלא ספציפית אתרי חלבון מחייב permeabilize קרום התא על ידי דוגרים 1-8 שעות רקמות PBST BSA + 5%, מתנדנד על 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגירים את הנוגדן העיקרי מדולל PBST + 5% BSA נדנדה ב 4 ° C למשך הלילה. דילול נוגדן אופטימלית ישתנו עבור נוגדנים שונים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף 3x ב PBST ואחריו שני שוטף 30 דקות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה של נוגדנים משני מדולל PBST BSA + 5% עבור שעות 1-3 נדנדה ב 4 ° C. לשטוף 3x ב PBST ואחריו שני שוטף 30 דקות ב 4 ° C. אם משני הוא מצומדות למתחם רגיש לאור, לעטוף את צינור בנייר אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח רקמות נוספות (במידת הצורך) ואת הר בשקופיות. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

וידאו זה מדגים כיצד לנתח את מערכת העצבים המרכזית של הזחלים third תסיסנית instar. לאחר דיסקציה, CNS יכול להיות מוכתם באמצעות פרוטוקול אימונוהיסטוכימיה סטנדרטי. נכון לעכשיו, עדיין לא ידוע הרבה על איך מערכת העצבים הבוגרת מופק וכן כיצד הוא מאחסן ומעביר מידע. מחקרים של מערכת העצבים המרכזית תסיסנית בפיתוח הזחל צריך לשפר את הידע שלנו על חיווט למערכת העצבים לתפקד. הזחלים תסיסנית התערוכה מספר התנהגויות stereotpyed, כגון בתגובה לאותות סביבתיים. כיצד התנהגויות אלה ...

<table><tbody><tr><td>פינצטה</td><td>בעלת קצה דק</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>זכוכית שעון בעלת 9 שקעים</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>צלחת פטרי מפלסטיק</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

מערכת העצבים המרכזית (CNS) של זחלי תסיסנית הוא מורכב הבינו היטב. אחת הדרכים לחקור את מערכת העצבים המרכזית היא להשתמש אימונוהיסטוכימיה לבחון את הביטוי של רומן שונים וחלבונים הסמן. הכתמה של הזחלים כל מעשי משום לציפורן קשה מונע נוגדנים לחדור בתוך חלל הגוף. על מנת כתם אלה רקמות יש צורך לנתח את הבהמה לפני תיקון ו מכתים. במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח הזחלים תסיסנית מבלי לפגוע במערכת העצבים המרכזית. בגין על ידי קורעת את הזחל במחצית עם זוג מלקחיים בסדר, ולאחר מכן להפעיל את הקוטיקולה &quot;מבפנים החוצה&quot; כדי לחשוף את מערכת העצבים המרכזית. אם הניתוח מבוצע בזהירות CNS תישאר מחוברת לציפורן. אנחנו בדרך כלל לשמור על מערכת העצבים המרכזית מחוברת לציפורן בכל הצעדים קיבעון ו מכתים, ורק להסיר לחלוטין את מערכת העצבים המרכזית של לציפורן ממש לפני הרכבה דגימות בשקופיות זכוכית. אנחנו גם להראות כמה תמונות של נציג CNS הזחל מוכתם וחוה, גורם שעתוק לידי ביטוי משנה של נוירונים במערכת העצבים המרכזית. המאמר מסתיים בדיון על כמה שימושים מעשיים של טכניקה זו ועל הקשיים הפוטנציאליים שעלולים להתעורר.

במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח את מערכת העצבים המרכזית של הזחלים third תסיסנית instar.

Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

מערכת העצבים המרכזית (CNS) של זחלי הדרוזופילה (Drosophila) היא מורכבת ומעט מובנת. דרך אחת לחקר מערכת העצבים המרכזית היא שימוש באימונוהיסטוכימיה כדי...

שמי נייט פר. אני סטודנט לתואר מתקדם כאן בפרינסטון. אוקיי. הדבר שעליכם לעשות הוא למצוא את התולעת ולאחר מכן להעביר אותה לצלוחית עם PBS.כך הם ייראו, ואתם קורעים אותם לשניים וכל האיברים הפנימיים נשפכים החוצה. זהו, יש לי כאן את הקוטיקולה עם הרבה מהמבנים הפנימיים, ואני מנסה לוודא שהיא הפוכה ושה-CNS עדיין מחובר, אז. קיבלתי את זה. כן. אז זה ממש שם.בדיוק שם. איזה מהם? ניתן לראות זאת בפינצטה הימנית שלי.יש לכם שתי אונות שונות, ואז יש את ה-CNS עצמו שסוג של נשך למטה כמו שורש נקיטתי, והוא נמצא כאן מימין לווחי הפה הכהים ושאר הקוטיקולה שם. תרצה להפריד את ה-CNS כך? כן, בטח.אני יכול להסיר זאת. וזה במבט מלמעלה למטה. כך שרואים את שתי האונות ואז רואים את ה-CNS עצמו.אם כך, מדוע מבצעים ניסוי זה? ובכן, אנו מעוניינים לבחון את ביטוי החלבון במערכת העצבים של הזחלים. ולכן, הדרך הטובה ביותר לעשות זאת היא פשוט לפרק את רקמת הזחליים.ומכיוון שנוגדנים מתקשים לחדור דרך הקוטיקולה ברקמה שלמה, אנו מבודדים תחילה את מערכת העצבים המרכזית (CNS) של הלרבה, ולאחר מכן משתמשים ברקמה המבודדת כדי לבצע את ניתוח צביעת החלבון הרצוי. ומדוע עושים זאת? מדוע ספציפית ב-re?ובכן, זה תלוי בעיקר בתחומי העניין שלך בכל הנוגע לניתוח. החלבון שאני חוקר מובע לאורך כל ההתפתחות, ואנו רוצים לראות כיצד משתנה המיקום של החלבון ולבדוק אילו סוגי תאים מביעי

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מדגים כיצד...

תסיסנית הזחל Dissection NMJ

הזחלים תסיסנית melanogaster לספק מערכת מודל אידיאלי לחקור את המנגנונים של תחבורה axonal בתוך העצבים סגמנטלי הזחל. באמצעות הליך זה, 3 rd הזחלים instar נושאת מוטציות שונות ניתן להשוות את הזחלים סוג בר.

ויזואליזציה של עצבים המגזרי הזחל ב 3 Rd Instar תסיסנית הכנות הזחל

אנו מתארים Flippase-Induced intersectional Gal80/Gal4 (FINGR) שיטת הדיכוי, המאפשר רקמות ספציפיות FLP לקבוע Gal80 דפוסי הביטוי. בכל מקום Gal4 חפיפה FLP, Gal4 הביטוי מופעלת (Gal80 התהפך החוצה) או לבטל (Gal80 התהפך ב). השיטה FINGR הוא תכליתי לניתוח המשובטים ומיפוי במעגל העצבי.

מיפוי יישומים הביטוי Flippase Enhancer-מלכודת הזחל וגם למבוגרים תסיסנית CNS

סרטון זה מתאר כיצד לנתח ולבודד את מוח הדרוזופילה הבוגר – הליך הכרחי לדמיון האיבר, שאחרת מוסתר על ידי הקוטיקולה, העין ורקמת קנה הנשימה. הפרוטוקול לדוגמה מראה הדגמה מפורטת המניבה תכשירים באיכות גבוהה שניתן להשתמש בהם לשיטות אימונוסטיין והדמיה בנוירוביולוגיה של דרוזופילה.

דרוזופילה דיסקציה מוחית של מבוגרים: שיטה בנוירוביולוגיה של זבובים

סרטון זה מדגים את הנתיחה וההרכבה של צמחי מוח מזחלי דרוזופילה. מערכת העצבים המרכזית (CNS), המחוברת לדיסקי עיניים, מופקת מהזחלים ולאחר מכן מורכבת על מגלשת זכוכית בתמיסת מלח פיזיולוגית.

דיסקציה והרכבה של זחלי זבוב פירות צמחי מוח

הפרדיגמה פציעה באמצעות כבל עצב גחון תסיסנית הזחל לחקור התחדשות במערכת עצבים מרכזיות ותיקון מתואר. דקירה ואחרי סריקת הליזר מיקרוסקופיה confocal בדגימות זמן לשגות וקבועים, בשילוב עם ניתוח הכמותי עם תוכנה שפותחה בתכליתיות וגנטיקה, משמשת כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים של התחדשות ותיקון מערכת עצבים מרכזיים.

פרדיגמה פגיעה לחקור תיקון של מערכת עצבים מרכזי ב<em&gt; דרוזופילה</em

פרוטוקול זה מפרט שיטה יעילה המשמשת לביצוע הדמיה תא חי בהקשר של מוח זחל בשלמותה. גישות הדמיה תא חי הן לא יסולא בפז לחקר חלוקות תא גזע עצביים סימטריות כמו גם תהליכים עצביים והתפתחותיות אחרים, לחשוף באופן עקבי מנגנונים שהתעלמו בעבר.

הדמיה חיה של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; הזחל Neuroblasts

פרוטוקול זה מתאר את הקרע של immunostaining של המבוגרים דרוזופילה melanogaster רקמות המוח. באופן ספציפי, פרוטוקול זה מדגיש את השימוש נוירונים הגוף, קולט אור פטריות דרוזופילה בתור דוגמה עצביים קבוצות משנה יכול לשמש באופן מדויק לחשוף את עקרונות כלליים שבבסיס היבטים רבים של ההתפתחות העצבית.

ניתוח Immunofluorescent מכתים של פטריות הגוף והנפש ומה קולט אור נוירונים במוח למבוגרים דרוזופילה melanogaster

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי להקליט את הפעילות החשמלית יורד של מערכת העצבים המרכזית דרוזופילה melanogaster כדי לאפשר את עלות-יעיל ונוח בדיקה של סוכנים תרופתי, מוטציות גנטיות של חלבונים עצבית, ו/או את התפקיד של מסלולים פיזיולוגיים נחקרו.

הקלטה אלקטרופיזיולוגיות של פעילות מערכת העצבים המרכזית השלישית-לחלל דרוזופילה Melanogaster

פרוטוקול זה מתאר שלושה שלבים להכנת אונות אופטיות דרוזופילה בוגרות של זחלים ובוגרים להדמיה: 1) דיסקציות מוחיות, 2) אימונוהיסטוכימיה ו-3) הרכבה. דגש מושם על שלב 3, שכן נדרשים כיווני הרכבה ברורים כדי לדמיין מבנים ספציפיים של האונה האופטית.

דיסקציה, אימונוהיסטוכימיה והרכבה של מוחות זחלים ודרוזופילה בוגרים להדמיית האונה האופטית

כאן, אנו דנים בתהליך עבודה להכנה, ניתוח, הרכבה ותמונה של מוחות צמחים חיים מזחלי Drosophila melanogaster Third instar כדי לצפות בדינמיקה התאית והתת-תאית בתנאים פיזיולוגיים.

הדמיה של תאים חיים של Drosophila melanogaster מוח זחל כוכב שלישי

למדו את שיטת הניתוח של מערכת העצבים המרכזית בזחלי Drosophila melanogaster. טכניקה זו מאפשרת חקירת מבנה ותפקוד עצבי תוך שימור רקמות לניתוח חלבונים ותבניות ביטוי.

Dissection של מערכת העצבים המרכזית הזחל ב תסיסנית melanogaster

גלה סרטונים נוספים