November 9th, 2006
במאמר זה אנו מדגימים כיצד לנתח את מערכת העצבים המרכזית של הזחלים third תסיסנית instar.
שמי נייט פר. אני סטודנט לתואר שני כאן בפרינסטון.אוקיי. הדבר שאתה רוצה לעשות הוא לקחת את התולעת ואז להעביר אותה לצלחת עם קצת PBS.
אז ככה הם ייראו ואתה קורע אותם לשניים וכל המעיים עפים החוצה. זהו, אז יש לי את הקוטיקולה כאן עם חבורה, כל המבנים הפנימיים ומנסה לוודא שהיא הופכת מבפנים החוצה ולוודא שמערכת העצבים המרכזית עדיין מחוברת, אז הבנתי. כן. אז זה ממש שם.
ממש שם. איזה? אתה יכול לראות על המלקחיים הימניים שלי.
יש לך שתי אונות שונות ואז יש את מערכת העצבים המרכזית עצמה שמשתרעת למטה כמו שורש ברז והיא ממש כאן לצד הימני של הפה הכהה ושאר הקוטיקולה שם. האם תרצה להפריד את מערכת העצבים המרכזית ככה? כן, בטח.
אני יכול לעשות את זה. וזה מסתכל מלמעלה למטה. אז אתה רואה את שתי האונות ואז אתה רואה את מערכת העצבים המרכזית עצמה.
אז למה אתם עושים את הניסוי הזה? ובכן, אנו מעוניינים להסתכל על ביטוי החלבון במערכת העצבים, בזחלים. ולכן הדרך הטובה ביותר לעשות זאת היא פשוט לפרק את רקמת הזחל.
ומכיוון שקשה לנוגדנים לחדור דרך הקוטיקולה ברקמה שלמה, אנו מנתחים תחילה את מערכת העצבים המרכזית של הזחל ולאחר מכן משתמשים ברקמה המנותחת, כדי לבצע את הניתוח שאנו רוצים לעשות עד לכתם החלבון. ולמה אתה עושה את זה? למה דווקא למה?
ובכן, כי זה באמת תלוי מה האינטרסים שלך מבחינת הניתוח. החלבון שאני חוקר מתבטא לאורך כל ההתפתחות, ואנחנו רוצים לראות איך לוקליזציה של החלבון משתנה ולראות אילו סוגי תאים מבטאים את החלבון שלנו. ולכן אנחנו רוצים לקבל קורס זמן לאורך כל הפיתוח.
מה הבעיה הספציפית בניסוי הזה? ובכן, אחת הבעיות, כפי שציינתי קודם, היא שצריך לנתח את הרקמה. וכך יש הרבה, בערך, לפחות בהתחלה, המומחיות הטכנית של השגה, היכולת להחזיק את הזחלים יציבים, לפרק אותם בזהירות ולבצע את הטכניקה ההפוכה.
כדי לחשוף את מערכת העצבים המרכזית, תצטרך מלקחיים עדינים בקצוות. כי אם אתה, המלקחיים שלך לא מספיק בסדר, אתה באמת כמעט מנסה לעבוד עם כפפות במקום עם האצבעות שלך. אז זה קצת מסובך ללמוד את הטכניקה בהתחלה, אבל אחרי זה, זה לא כל כך נורא.
וכן, והצביעה באמת לא כל כך קשה. זה רק כתם נוגדנים סטנדרטי. אבל אתה צריך להיות זהיר בזמן שאתה מזריק את התמיסות שלך למעלה ולמטה בצינור שלך, אבל אתה לא מאבד את הרקמה כי היא יכולה להיות די קטנה.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מאמר זה מדגים את ניתוח מערכת העצבים המרכזית מהזחלים של Drosophila בגיל השלישי. הנוהל כולל טיפול זהיר כדי להבטיח שמערכת העצבים המרכזית תישאר שלמה במהלך תהליך הניתוח.
Dissection of the Drosophila larval CNS enables high-fidelity tissue preparation for immunohistochemistry, addressing a key bottleneck in neurobiological target validation. This method supports mechanistic de-risking by preserving structural integrity during protein expression analysis, which is critical for early discovery workflows. It provides a scalable, reproducible approach for generating disease-relevant neural models in invertebrate systems.
This dissection method fits within the early discovery continuum, specifically supporting target validation and assay readiness for neurobiological programs. It bridges phenotypic observation with molecular readout generation in invertebrate systems.