Name: הפרוטוקולים של זיהום אוראלי של הזחלים Lepidopteran עם Baculovirus (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-03T23:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: למד שיטות זיהום אוראלי של זחלי Lepidopteran עם Baculovirus להערכת יעילות חומרי הדברה ביולוגיים. הפרוטוקולים כוללים ביואסיי האכלה בטיפות ותוספי מזון לקביעת מינונים קטלניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

בקר <a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">שפרינגר הפרוטוקולים</a> כדי ללמוד עוד על baculovirus ההנדסה כסוכן insecidical ואת טכניקות זיהום אוראלי בשימוש assay זה.

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

הפרוטוקולים של זיהום אוראלי של הזחלים lepidopteran עם baculovirus

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

Baculoviruses נמצאים בשימוש נרחב הן וקטורים ביטוי חלבון כסוכני השליטה חרקים מזיקים. וידאו זה מראה כיצד הזחלים lepidopteran יכול להיות נגוע polyhedra על ידי האכלה אגל ותזונה התוספת מבוססת bioassays. זה ליווי שפרינגר הפרוטוקולים בסעיף מספק סקירה של מחזור החיים של baculovirus ושימוש baculoviruses כסוכני חרקים, כולל דיון על היתרונות והחסרונות לשימוש baculoviruses כמו חומרי הדברה, וכן התקדמות שיפור גנטי של baculoviruses ליעילות משופרת חרקים.

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את הטכניקות זיהום אוראלי של הזחלים lepidopteran עם baculovirus על מנת לקבוע יעילות חרקים.

הפרוטוקולים של זיהום אוראלי של הזחלים Lepidopteran עם Baculovirus

באקולו-וירוסים (Baculoviruses) נמצאים בשימוש נרחב הן כווקטורים לביטוי חלבונים והן כסוכנים להדברת מזיקי חרקים. סרטון זה מדגים כיצד ניתן להשתמש בזחלים של סדרית הפרפרים (lepidopteran larvae) כדי...

נגיף ה-Balo משמש בדרך כלל כווקטור DNA המשולב עם שורות תאי חרקים לצורך ביטוי חלבונים. עם זאת, העובדה שנגיף זה מדביק חרקים ביעילות עם השלכות קטלניות הופכת אותו גם לסוכן קוטל חרקים יעיל. בברזיל, לדוגמה, נגיף Balo מסוג פרא מרושש מדי שנה על פני יותר ממיליון הקטרים של גידולי סויה לצורך הדברת זחל פולת השעורה (velvet bean caterpillar). כדי להגביר את יעילותם כקוטלי חרקים, נגיפי Balo הונדסו גנטית עם גנים המקודדים לרעלים ספציפיים לחרקים הפעילים בתוך ה-HemosIL של החרק.בסרטון זה, אנו מדגימים שיטות להדבקה אוראלית של זחלי סדרי הפרפרים (lepidopteran) בנגיף bacao במטרה לנתח את היעילות הקטרנית לחרקים. שלום, אני מהמעבדה של Blind Boning במחלקה לאופתלמולוגיה באוניברסיטת מדינת איווה, ואני וונדי ספארקס, גם אני מהמעבדה של boning. היום נראה לכם שני הליכים להדבקת זחלי פרפר בנגיף VA.ראשית, אראה לכם כיצד להדביק זחליים בניו-בון (neonate) באמצעות בדיקת ביו-אסיי של הזנה בטיפה. ולאחר מכן, אראה לכם כיצד להדביק זחליים בשלבי גדילה בינוניים עד מאוחרים באמצעות בדיקת ביו-אסיי של דם בתזונה. אז בואו נתחיל.ניתן להשתמש בבדיקות ביולוגיות של הזנה בטיפות לקביעת המינון הקטלני של abacavir והישרדות זחלים נגועים בבלו-וירוס (balo virus). בבדיקה זו נעשה שימוש בדרך כלל בזחלים בשלב התפתחותי מוקדם או בזחלים בניוnatal.לפני התחלת העבודה, ודאו כי כוסות התזונה עם התזונה המתאימה זמינות לכם. כמו כן, הכינו את דילוציות הנגיף המתאימות, הכוללות צבע מאכל ירוק בריכוז של 4% מהנפח. על מנת לקבוע את ריכוז הנגיף הקטלני, הדילוציה צריכה להניב טווח תמותה שבין 1% ל-99%. ייתכן שיהיה צורך בבדיקות ביולוגיות ראשוניות (bioassays) כדי לקבוע טווח מתאים של ריכוזי נגיף. לאחר ערבוב השפופרת במכשיר vortex כדי למנוע שקיעה של הפוליהדרה, צרו שני מעגלים קונצנטריים של טיפות קטנות של תמיסת הנגיף בתוך צלחת פטרי בקוטר 60 מילימטר.עבור כל ריכוז של נגיף שנעשה בו שימוש, זכרו להכין גם בקרת השלילה של הדמיה של זיהום (mock infection). לשלב הטיפול, העבירו 25 עד 30 זחלים רכים למרכז המעגלים המקבילים באמצעות מכחול סטרילי. הניחו את המכסה על הצלחת ואטמו עם פאראפורם כדי למנוע מהזחלים לברוח.באידיאליזציה, יש להשתמש במברשות צבע שונות עבור ההעברה של כל סוג נגיף כדי למנוע זיהום בין הטיפולים. יש להשאיר את הצלחת בטמפרטורת החדר למשך 10 עד 15 דקות, זמן שבו הזחלים שותים. ניתן לזהות את הזחלים שנסעו לפי הצבע הירוק של המעי הקדמי, הנובע מצבע המאכל הירוק; יש להעביר רק את הזחלים שנסעו לכוסות פלסטיק של אונקיה אחת המכילות תזונה, ולהעביר זחל אחד לכל כוס.לאחר העברת הזחלים, כסו את הכוסות במכסים והדגירו בטמפרטורה של 28 degrees Celsius למשך 24 שעות לאחר ההדבקה. הסירו כוסות המכילות זחלים מתים. מקרי מוות מוקדמים אלו נובעים ככל הנראה מפגיעות בעת הטיפול.בעת שימוש בבדיקה ביולוגית זו לקביעת המינון הקטלני, יש לבדוק את הזחלים מדי יומיים עד שלושה ימים, עד שהזחלים בקבוצת הביקורת (mock infected) וכל הזחלים ששרדו את הטיפול בנגיף יעברו בערה (pupation) או יתחילו לחפור לצורך בערה; זחלים שנדבקו בנגיף יישארו על פני השטח של המצע המזון וימותו לאחר מספר ימים. זחלים מתים יתכווצו לעיתים ויהפכו לשחורים; זחלים שמתים כתוצאה מזיהום הופכים למעשה לשקיות של polyhedra, אשר יתפרקו לחלוטין אם יסבלו מהפרעה מכנית בשלב זה. רשמו את שיעור תמותת הזחלים בכל טיפול.יש לשחזור בדיקות ביולוגיות של ריכוז קטלני שלוש או ארבע פעמים במועדים נפרדים. השתמש ב-30 פרטים לכל מינון עבור כל טיפול בנגיף או טיפול ביקורת. השתמש בתוכנה מתאימה לניתוח פרוביט, כגון polo או SAS, כדי לחשב ערכי lc 50, רווחי סמך של 95% ואת הסטטיסטיקות המתאימות.ניתן להשתמש בבדיקת הזנה בטיפות זו גם לקביעת ערכי זמן הישרדות ST 50. במקרה זה, תמותת הזחלים נמדדת מדי ארבע עד שמונה שעות עם תצפיות תכופות יותר. אם שיעור התמותה גבוה, בדיקות ביולוגיות של זמן הישרדות מבוצעות באמצעות מינון lc 99 של הנגיף; זמני הישרדות חציוניים וגבולות סמך של 95% מחושבים באמצעות אומדן Kaplan Mayer באמצעות תוכנית s plus או SAS.כעת, לאחר שהאראנג הראה לכם את הבדיקה הביולוגית של הזנה באמצעות טיפות, אני אראה לכם את הבדיקה הביולוגית של פתיל תזונה. בבדיקה הביולוגית של פתיל תזונה, זחלים בשלבי גיל ביניים עד מאוחרים מוזנים מפתיל תזונה שעובד במינון ידוע של נגיף, וזאת כדי לקבוע את המינון הקטלני או ה-LD 50. ביום שלפני ביצוע בדיקה זו, הוציאו את התזונה מהכוס כדי להרעיב את הזחלים למשך הלילה.שלב זה יגביר את המהירות שבה הזחלים צורכים את הנגיף. להכנת קוביית תזונה מוחדרת ליום למחרת, חתכו את התזונה לקוביות קטנות של כ-2 מילימטרים מעוקב. אם קוביות התזונה יהיו קטנות מדי, הן יתייבשו.אם קוביית המצע גדולה מדי, הזחלים לא יוכלו לצרוך את כל הקובייה במהלך הלילה. כעת הוסיפו 1-2 µL של תמיחת פולידרה לכל קוביית מצע. התמיחה מכילה 4% צבע מאכל מהנפח.הניחו לתמיחה להיספג בתזונה למשך חמישה עד 15 דקות. זכרו להכין גם קוביית תזונה שטופלה בנגיף דמי (mock virus) כביקורת שלילית. לאחר מכן, העבירו קוביית תזונה אחת לכל זחלי גיל רביעי (fourth instar) בכל כוס.לאחר מכן, הניחו את הכוסות באינקובטור למשך הלילה בטמפרטורה של 28 °C. למחרת, השליכו כל זחלים שלא אכלו את קוביית התזונה באופן מלא. לאחר מכן, הוסיפו חתיכה גדולה של תזונה לכל כוס עבור הזחלים שנותרו. תחזקו את הזחלים בטמפרטורה של 28 °C, והוסיפו תזונה נוספת לפי הצורך, עד שהזחלים במקבץ הביקורת (mock infected) והזחלים ששרדו את ההדבקה בנגיף יסיימו לאכול או יתחילו לעבור לבשלב הגולם (pupate).בשלב זה, רשמו את מספר החרקים המתים והשרדים. נדגים בפניכם שתי שיטות להדבקת חרקים בנגיף ה-back: דימום (bleeding), ביופסיית האכלה (feeding biopsy), וביופסיית לוח תזונה (diet plaque biopsy). בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור שגופות הזחלים שהורגו על ידי נגיף ה-vao הן בדרך כלל שבירות ועלולות להיקרע בקלות, ובכך לשחרר את הנגיף.לכן, יש לעקר את משטחי העבודה ולהשליך כפפות מזוהמות וחומרים חד-פעמיים באופן מתאים כדי למנוע זיהום. זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

protocols-for-oral-infection-of-lepidopteran-larvae-with-baculovirus

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את שתי טכניקות microapplicator נהג להדביק של הזחלים lepidopteran עם baculovirus על מנת לקבוע יעילות חרקים.

הפרוטוקולים של זיהום Microapplicator בסיוע של הזחלים Lepidopteran עם Baculovirus

השיטה המתוארת כאן מנצלת הזרקה ישירה של חיידקי entomopathogenic לhemocoel...

גידול והזרקה של<em&gt; Manduca סקסטה</em&gt; זחלים להערכה ארסית קטריאלי

זיהום haemocolic אוראלי ותוך של זחלים של עש השעווה הגדולה...

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

סרטון זה מדגים שיטה לביסוס מודל זיהום Mycobacterium bovis בזחלים של עש השעווה הגדול, Galleria mellonella. זן ביולומינסנטי של Mycobacterium bovis BCG מוזרק לתוך המולימפה של הזחל כדי ליצור זיהום, והביולומינסנציה נמדדת במרווחי זמן מוגדרים מראש כדי לחקור את התקדמות הזיהום.

טכניקה לביסוס מודל זיהום חיידקי בזחלי חרקים

זבוב הפירות הים תיכוני (Diptera: Tephritidae) הוא מזיק חקלאי עולמי. הבנה מעמיקה יותר של הביולוגיה שלו היא המפתח לשליטה באוכלוסיות הזבוב הים-תיכוני ובכך להפחית את ההשפעה הכלכלית. מיקרו-הזרקת עובר היא כלי בסיסי המאפשר הן טרנספורמציה של קו הנבט והן מחקרי גנטיקה הפוכה במין זה.

משלוח חומצות גרעין דרך Microinjection העובר חרקי ההדברה החקלאיים ברחבי העולם,<em&gt; זבוב הפירות הים תיכוני</em

פרוטוקול זה מתאר חום חלבון הנוצרות על-ידי הלם ביטוי מערכת (pDHsp/V5-שלו/sf9 תא מערכת), אשר יכול לשמש עבור המבטאים חלבונים זרים או הערכת אנטי-אפופטוטיים להיפגע הפעילות של חלבונים זרים פוטנציאליים ו שלהם קטום אמינו חומצות בתאי חרקים.

הביטוי ארעית של גנים זרים בתאי חרקים (sf9) עבור שיטת פונקציונלי

ב פרוטוקול זה, baculovirus המיוצר על ידי תרביות תאים ארעית של baculovirus פלסמיד לתאים Sf9, הגביר בתרבות ללא סרום ההשעיה. תגובת שיקוע מטוהרת על-ידי הפארין כרומטוגרפיית זיקה, עוד יותר מרוכז על-ידי ultracentrifugation. פרוטוקול זה שימושי עבור ייצור וטיהור של baculovirus עבור יישום טיפול גנטי.

ייצור, טיהור של Baculovirus עבור יישום ריפוי גנטי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר בית carboxylesterase לעוף חלבונים במבחנה עם מערכת ביטוי תא חרקים baculovirus מתווכת, מאוחר יותר פונקציונלית לאפיין את תפקידיהם פרמתרין חילוף חומרים, ובכך, היוועצות pyrethroid התנגדותם מבוססת תא MTT assay, במבחנה מטבולית מחקרים.

אפיון פונקציונלי Carboxylesterases הבית בקוטלי חרקים עמידים בזבובים, דומסטיקה זבוב

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקולים עבור ניצול של חרקים תא baculovirus חלבון ביטוי ומערכת לייצר כמויות גדולות של חלבונים צמח מופרש על התגבשות חלבון. וקטור ביטוי baculovirus השתנה עם GP67 או hemolin חרקים פפטיד אות לביטוי הפרשת חלבון צמחי בתאי חרקים.

שינוי Baculovirus וקטורים ביטוי לייצר מופרש צמח חלבונים בתאי חרקים

מערכת וקטור הביטוי של baculovirus (BEVS) היא פלטפורמה איתנה להקרנת ביטוי וייצור של חלבון ארגינין מתילטרנספראזים (PRMTs) שישמשו למחקרים ביוכימיים, ביופיזיים ומבניים. כמויות מיליגרם של חומר יכול להיות מיוצר עבור רוב PRMTs וחלבונים אחרים של עניין הדורש פלטפורמת ביטוי eukaryotic.

ייצור חלבוני PRMT רקומביננטיים באמצעות מערכת וקטור הביטוי של Baculovirus

מחקרים מבניים וביוכימיים של מובילי ממברנות אנושיים דורשים כמויות מיליגרם של חלבון יציב, שלם והומוגני. כאן אנו מתארים שיטות ניתנות להרחבה לסינון, ביטוי וטיהור מובילי מומסים אנושיים באמצעות גנים ממוטבים לקודון.

ביטוי וטיהור בתפוקה גבוהה של נשאי מומסים אנושיים למחקרים מבניים וביוכימיים

למד שיטות זיהום אוראלי של זחלי Lepidopteran עם Baculovirus להערכת יעילות חומרי הדברה ביולוגיים. הפרוטוקולים כוללים ביואסיי האכלה בטיפות ותוספי מזון לקביעת מינונים קטלניים.

הפרוטוקולים של זיהום אוראלי של הזחלים Lepidopteran עם Baculovirus

גלה סרטונים נוספים