Name: קבלת ביצים Xenopus laevis נקבות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: למד כיצד לקבל ולהכין ביצים מנקבות Xenopus laevis לשימוש ניסויי. הפרוטוקול כולל הזרקת הורמונים, איסוף ביצים ומיון להסרת פגומים. שיטה זו חיונית למחקר בתאית ופיתוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">הפרוטוקולים נוכחי בביולוגיה של התא</a> .

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

קבלת ביצים xenopus laevis נקבות

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

הביצים של Xenopus laevis שלם, lysed, ו / או מופרדים שימושיים עבור מגוון רחב של ניסויים. פרוטוקול זה מראה כיצד לגרום הנחת ביצה, לאסוף את הביצים dejelly, ולמיין את הביצים כדי להסיר ביצים פגומות.

קבלת ביצים Xenopus laevis נקבות

ביצי *Xenopus laevis* שלמות, מולסות (lysed) ו/או מופרדות לפרקציות הן יעילות למגוון רחב של ניסויים. פרוטוקול זה מדגים כיצד להשרות הנחת ביצים, ...

תמציות ביצים של Xenopus laevis שימושיות כמקורים לחומר ציטופלזמי ולחומר של אברונים עבור שחזור in vitro של אירועים תאיים, כגון הרכבת הגרעין ויבוא חלבונים לגרעין. כמובן, לפני שניתן להשתמש בתמציות ביצים, יש להשיג תחילה את הביצים מנקבות צפרדעים. שלום, שמי מארי קרוס ואני סטודנטית לתואר מתקדם במעבדתה של ד"ר מורין פאוור במחלקה לביולוגיה של התא באוניברסיטת אמורי באטלנטה, ג'ורג'יה.היום נראה לכם כיצד להשיג ולבודד ביצי ג'לי מנקבות בוגרות של *Xenopus laevis*. הליך זה כולל את השלבים הבאים: הכנת הצפרדעים להטלת ביצים באמצעות מרסקרין (marelin), השראה של הטלת ביצים באמצעות גונדוטרופין כוריוני אנושי (hCG), ומיון ביצים או ציטובלסטים פגומים. אז בואו נתחיל.כדי להפיק ביצים, נקבות בוגרות של צפעעים עוברות תחילה הכנה באמצעות גונדוטרופין מסרום של סוסיות הרמיות. כדי להתחיל בהליך ההכנה, הכינו מיכל המכיל נתרן כלורי בריכוז של מאה מילימולר להוואת הצפעעים. לאחר ההזרקה, יש להחזיק את הצפעעים העוברים הכנה בצפיפות של כצפעע אחד לליטר.ייצור ביצים אופטימלי נשמר על ידי השכנת הצפרדעים בטמפרטורה של 18 °C. באמצעות מחט בנב במידה 27 המחוברת למזרק של 1 mil, מזריקים לצפרדע תת-עוריתית אל תוך שקיק הלימפה הגבי 0.5 mils של 200 units per mil של Pregnant mare serum gonadotropin.החזירו את הצפרדעים הראשוניות למכל המכיל sodium chloride בריכוז מאה מילימולר. לאחר יומיים עד שלושה ימים, גרמו להטלת ביצים על ידי הזרקת 0.5 mils של מאה יחידות למיל Human chorionic gonadotropin שוב תת-עוריתית אל תוך שקיק הלימפה הגבי.לאחר ההזרקה, הניחו כל צפרדע בחמישה ליטרים של sodium chloride בריכוז מאה millimolar. מומלץ להניח כל צפרדע במיכל נפרד, שכן איכות הביציות משתנה מצפרדע לצפרדע. כ-16 עד 22 שעות לאחר ההזרקה של human chorionic gonadotropin, העבירו את הצפרדע למכל מים נקיים ושפכו את הביציות לכלי כימי.מומלץ לעקוב אחר הצפעונים במשך יום עד יומיים כדי לזהות סימני זיהום באתר ההזרקה. בשלב זה, מעטפת ג'ל שקופה מקיפה כל ביצה, דבר המונע מהן לגעת זו בזו. כדי להסיר את הג'ל מהביצים, שטפו את הביצים פעם אחת ב-2%L cysteine pH H שמונה, ולאחר מכן המשיכו להדגיר ב-100 bills של תמיסת 2%L cysteine לכל צפער למשך כחמש דקות. בטמפרטורת החדר, סובבו בעדינות את הביצים באופן מחזורי לאחר חמש דקות.שפכו את תמיסת הציסטאין מהביצים של ה-deje ושטפו אותן שלוש פעמים בתמיסת ringer modified בריכוז 0.25 x. כדי להסיר שאריות, שפכו את הביצים אל תוך צלחת פטרי זכוכית של מאה מילימטר בעבודה תחת מיקרוסקופ דיסקציה. הסירו את הביצים הפגומות מצלחת הפטרי באמצעות פיפטת פסטור.לביצים בשלות של xip יש חצי עליון בעל פיגמנטציה כהה וחצי תחתון בהיר. נקודה לבנה בגודל של סיכה, המעידה על הבשלת התא הביצית (oocyte), צריכה להיות גלויה במרכז ההמיספירה בעלת הפיגמנטציה הכהה של הביצה הבשלה. ביצה טובה היא כזו בעלת פיגמנטציה אחידה ומודגשת.כל ביצית ללא נקודה לבנה זו היא אווציט ויש להסירה. יש להסיר גם ביצים לבנות, מוגדלות או בעלות פיגמנטציה לא אחידה. ביצה פגומה במיוחד תיראה ככדור לבן ונפוח שבו הגבול בין ההמיספרים מטושטש לחלוטין. שטפו את הביצים הממוינות שתיים עד שלוש פעמים על ידי מזיגת egg lys buffer עליהן, ולאחר מכן שפכו בזהירות את הבאפר, תוך מזעור מספר הביצים שנשפכות החוצה.כעת ניתן לבלס את הביציות ולהכין תמריות. הרגשנו לכם כיצד להשיג ביציות מנקבות בוגרות של *Xenopus laevis* ולהסיר מהן את השכבה הג'לטינית. הקפידו לצפות בשני הסרטונים הנוספים שלנו, המדגימים כיצד להכין תמריות ביצים גולמיות וכן כיצד לבצע הרכבה גרעינית in vitro באמצעות תמריות ביצים מופרדות לפרקציות.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסוייכם.

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

הפריה של Xenopus ביציות באמצעות שיטת העברה מארח

Xenopus עובריים epithelia הם מערכת מודל אידיאלי ללמוד התנהגויות התא כגון פיתוח הקוטביות ולשנות צורה במהלך המורפוגנזה אפיתל. היסטולוגיה מסורתית של דגימות קבוע ויותר כהשלמה הדמיה לחיות תאים confocal. כאן אנו מדגימים שיטות לבודד ברקמות הצפרדע לדמיין לתאי האפיתל לחיות לחיות cytoskeleton שלהם באמצעות תאים מיקרוסקופיה confocal.

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

Xenopus ביצת התמצית היא מערכת מודל שימושית לחקור מחסום הניזק לדנ"א. פרוטוקול זה מיועד להכנת תמציות ביצת Xenopus ריאגנטים ישכנעו מחסום ניזק לדנ"א. טכניקות אלה הן התאמה למגוון של גישות מזיקות DNA במחקר של איתות מחסום הניזק לדנ"א.

חקר מחסום הניזק לדנ&quot;א באמצעות<em&gt; Xenopus</em&gt; תמציות ביצה

אנו מתארים את האוסף של...

ייצור של<em&gt; Xenopus tropicalis</em&gt; ביצה מחלץ לזהות RNAs microtubule הקשורים

שיטה מתוארת לניתוח פירוק חלבונים באמצעות רדיואקטיבי וחלבונים לוציפראז-Fusion בתמצית ביצי Xenopus והתאמת להקרנת תפוקה גבוהה למאפנני מולקולה קטנים של פירוק חלבונים.

הכינון מחדש של השפלה β-catenin ב<em&gt; Xenopus</em&gt; חלץ ביצה

אנו מתארים שיטות למניפולציה של ביציות לא בשלות Xenopus laevis, הבשלת ביציות במבחנה לביציות והזרקת זרע תוך ציטופלזמית. פרוטוקול זה מאפשר פירוק של כמה חלבונים אימהיים וביטוי יתר של גנים מעניינים בעת ההפריה, ולכן הוא בעל ערך לחקר תפקידים של גורמים ספציפיים בהתפתחות עוברית מוקדמת.

ומניפולציה<em&gt; במבחנה</em&gt; ההבשלה של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; ביציות, ואחריו הזרקת Intracytoplasmic זרע, לחקר התפתחות העוברית

בקרת סינתזת חלבונים מתרחשת בעיקר בשלב התחלת התרגום, ליקויים בו קשורים להפרעות מגוונות. כדי להבין טוב יותר את האטיולוגיה שלהם, תיארנו כאן פרוטוקול המשתמש בביציות Xenopus laevis המעריך את התרגום של תעתיק mos בנוכחות מוטציה של גורם התחלת התרגום eIF4G1.

Xenopus laevis כמודל לזיהוי תרגום ירידת ערך

מנגנונים של קנה מידה תאי ותוך-תאי נותרו חמקמקים. השימוש בתמציות עוברי קסנופוס הפך נפוץ יותר ויותר כדי להבהיר מנגנונים של ויסות גודל האברונים. שיטה זו מתארת הכנת תמצית עובר ובדיקת קנה מידה גרעינית חדשה שבאמצעותה ניתן לזהות מנגנונים של ויסות גודל גרעיני.

Assay חינם-נייד באמצעות<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; עוברי מחלץ לחקור מנגנונים של תקנת גודל גרעינית

פרוטוקול זה מדגים שיטה מבוססת הקרינה לדמיין את כלי הדם וכדי לכמת את המורכבות שלה tropis Xenopus . כלי הדם ניתן הדמיה דקות לאחר הזרקת צבע פלואורסצנטי לתוך הלב הפועם של עובר לאחר מניפולציות גנטיות ו / או תרופתי ללמוד התפתחות הלב וכלי הדם in vivo .

ויזואליזציה וניתוח כמותי של אנגיוגנזה עובריים ב<em&gt; Xenopus טרופי</em

אנו מתארים שיטה להכנה והדמיה חיה של תמציות ציטופלסמיות לא מדוללות מביצי Xenopus laevis .

קסנופוס לאוויס הכנת תמצית ביצים ושיטות הדמיה חיות להדמיית ארגון ציטופלסמי דינמי

כאשר שינוי גורם גדילה ß חלבונים מבשר המשפחה באים לידי ביטוי חוץ רחמי בעוברים קסנופוס laevis, הם עמעם, לקבל מבקעים ומופרשים לתוך blastocoele, אשר מתחיל בפיצוץ מאוחר לשלב gastrula מוקדם. אנו מתארים שיטה לשאיפה של מוצרי מחשוף מחלל הפיצוץ לניתוח אימונובלוט.

ניתוח של שינוי גורם גדילה ß מוצרי מחשוף משפחתי מופרש לתוך Blastocoele של קסנופוס laevis עוברים

למד כיצד לקבל ולהכין ביצים מנקבות Xenopus laevis לשימוש ניסויי. הפרוטוקול כולל הזרקת הורמונים, איסוף ביצים ומיון להסרת פגומים. שיטה זו חיונית למחקר בתאית ופיתוח.

קבלת ביצים Xenopus laevis נקבות

גלה סרטונים נוספים