ביצוע Patch ו-pipettes אלקטרודות שארפ עם פולר לתכנות

פיפטות נימי זכוכית הפכו נפוצות בכל מקום במעבדות למגוון רחב של טכניקות, כגון אלקטרופורציה של תא בודד, מיקרו-הזרקת DNA ואלקטרופיזיולוגיה של מהדק תיקון להכנת אלקטרודות מהדק תיקון נימי זכוכית להקלטות או זכוכית סיליקט נמשכת על קוטבי הניתן לתכנות. קצות האלקטרודות מצופים בשעווה, ואז הקצוות מלוטשים באש ומאוחסנים לשימוש עתידי. היי, אני מרים גודמן מהמחלקה לפיזיולוגיה מולקולרית ותאית באוניברסיטת סטנפורד.

בסרטון זה, אדגים כיצד להכין פיפטות מהדק תיקון ואלקטרודות חדות לאלקטרופיזיולוגיה. מיקרו אלקטרודות זכוכית, הנקראות גם פיפטות, היו סוס עבודה של אלקטרופיזיולוגיה במשך עשרות שנים. כיום, פיפטות אלו עשויות מנימי זכוכית באמצעות משיכה הניתנת לתכנות.

אז בואו נתחיל. כדי להכין פיפטות מהדק תיקון, אנו משתמשים במשי חזיר סאטר בנימים נקיים ונטולי אבק, ואנו משתמשים בחולץ המיקרו אלקטרודות Sutter P nine seven flaming ground. ספר הבישול של פיפטה של סאטר הוא התייחסות מצוינת לפיתוח תוכניות משיכה מתאימות.

כדי להתחיל, הרם את מכסה האבק על המושך. ואז קח צינור נימי זכוכית אחד מהקופסה. הקפד להחליף את המכסה כדי למזער את הצטברות האבק.

לאחר מכן, ביד אחת, החלק את הנימים לתוך החריץ בצד אחד של הנימה, הדק מעט את המהדק. בשלב זה, המהדק צריך להיות הדוק מספיק כדי למנוע את נפילת הצינור, אך רופף מספיק כדי שתוכל להחליק אותו לתוך החריץ. כעת, שחרר את עצירת המתכת הקפיצית באותו צד.

לאחר מכן עם האגודל והאצבע המורה אוחזים בלשוניות המתכת המחוברות לתחתית שני המנשאים. שחרר את מעצור המתכת הקפיץ השני. משוך את המנשאים זה לזה עד שהם יגיעו והחזק במקומם ביד אחת.

לאחר מכן, החלק את הצינור דרך בית הנימה לתוך חריץ המנשא בצד השני. הימנע מדחיפת הזכוכית לתוך חוט החימום. הדק את המהדקים משני הצדדים.

הם צריכים להיות הדוקים מספיק כדי להחזיק את המנשאים במקומם, אך לא כל כך הדוקים עד שהזכוכית נמעכת. כעת, סגור את מכסה האבק ולחץ על הכפתור הירוק. פיפטות מוט מסומנות להקלטות מהדק תיקון נוצרות באמצעות תוכנית סקרים בת חמישה שלבים עם חום ומהירות יורדים בכל שלב ומוט קטן בשלב האחרון.

תוכנית זו משתמשת בחום ובכוח הכבידה. הליך ייצור האלקטרודות החדות דומה מאוד, אך במקרה זה, אנו משתמשים בנימי הזכוכית הדקים של וורנר אינסטרומנטס שקוטרו החיצוני של מילימטר אחד וקוטר פנימי של 0.78 מילימטרים. אנו מיישמים גם תוכנית משיכה המשתמשת במנוע בנוסף לחום וכוח הכבידה כאשר תוכניות המשיכה מסתיימות.

הרם את מכסה האבק, שחרר את שני המהדקים והסר את הפיפטה המוגמרת. ואז הכניסו את הפיפטות לקופסת עבודה. ניתן להכין את הקופסה על ידי הדבקת רצועת קצף למתלה של קופסת קצה פיפטה מפלסטיק, ולאחר מכן חיתוך שישה עד שמונה חריצים בקצף.

הכנס את הפיפטות לחריצים. לאחר שהקופסה מלאה בפיפטות משוכות, המשך לשלב ליטוש האש כדי ללטש את הפיפטות. הגדר מתקן מיקרו זיוף עם חוט חימום פלטינה הנשלט על ידי דוושת רגל לפני תחילת ליטוש האש.

ראשית מצפים את הפיפטה בשעווה דנטלית כדי להפחית את הקיבול ולשפר את מאפייני הרעש. לשם כך, שמור אספקה קטנה של שעווה מותכת בקרבת מקום. הפעל לחץ אוויר על גב הפיפטה כדי למנוע כניסת שעווה לקצה.

ואז טובלים את הקצה לזמן קצר בשעווה הנוזלית. והסר עכשיו. הנח את הפיפטה במנגנון הליטוש והביא את הקצה כ -50 מיקרון מהחוט.

זכור כי החוט יתרחב כאשר הוא מחומם. הפעל דופק חום קצר של שנייה או שתיים כדי להסיר את השעווה מקצה הפיפטה ולהחליק את הזכוכית. בדוק את קצות הפיפטה תחת מיקרוסקופ כדי לקבוע את קוטר הפתיחה והחלקות.

עבור הקלטות מהדק תיקון סטנדרטיות, פתחי הקצה צריכים להיות בקוטר של 1 עד 3 מיקרון, להשליך, טיפים מחוספסים, לא אחידים או לא סדירים. הניחו את הפיפטה המוגמרת בקופסת עבודה, הקפידו לסגור את המכסה כדי להגן על הפיפטות מפני אבק חזרו על 10 פיפטות מוצלחות. זה עתה הראיתי לך כיצד להכין פיפטות מהדק תיקון ואלקטרו חדים באמצעות מושך הניתן לתכנות.

ניתן להשתמש באותו הליך לייצור מגוון כלי זכוכית, כולל מחטי הזרקה לתוצאות מהדק תיקון מיטביות. חשוב לזכור לשלוף פיפטות חדשות נטולות אבק באותו יום של הניסוי וללטש אותן תוך שעה מהניסוי. כמו כן, ודא בבדיקה שהפיפטות חלקות ומלוטשות.

הקפד לצפות בסרטון השני שלנו, המדגים כיצד לבצע הקלטת מהדק תיקון של תעלות יונים המתבטאות בביציות אופוס. אוקיי, זהו זה. עכשיו אתה מומחה לפיפטות ובהצלחה בניסויים שלך.