Name: בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: למד שיטות לבדיקת רגישות ומועדפות חוש הריח בעכברים מבוגרים באמצעות נייר מסנן עם ריכוזים שונים של ריח. שיטות אלו מספקות כלים אמינים למחקר בתחומי הנוירוביולוגיה והתנהגות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מימון: עבודה זו נתמכה על ידי מפקדת סטיוארט &amp; ויקטוריה אחוות קוואן Predoctoral (RMW), פרס NIH פיוניר (RAS)

כללי הבחינה הבריאות טיפול מקיף יותר של בדיקות בריאות כללית ניתן למצוא משאב phenotyping התנהגות מעולה ז&#39;קלין של קרולי, מה לא בסדר עם העכבר שלי? 1. אנחנו הראשונים להשתמש בסוללה שונה במבחן תצפיתי להעריך את הבריאות הכללית של הנושא. הסוללה כוללת פריטים מתוך פרוטוקול הערכה מקיפה של סמואל ארווין 2 כדי לזהות במהירות בנושאים אלה יהיה מתאים בדיקות נוספות. בקיצור, מזהה את הסוללה שונה חיות כי הם חריגים מבחינה פיזית (למשל קשות מתחת או מעל משקל, המוזנח, כבד נשימה) או תנוחה חריגה התערוכה, תנועה או התנהגויות. כל אלה יכולים להיות ביטויים של מחלה. כל הערכה הראשונית דומה מזהה נושאים בריא מתאים. חשוב גם לציין כי בעלי החיים משמשים אנושי הן במהלך הבחינה בריאות כללית, כמו גם במהלך בדיקות עוקבות. ללא הרדמה או שיכוך כאבים משמש בדיקות אלה אינם כוללים הליכים כואבים בפוטנציה. בדיקת רגישות חוש הריח בדיקה זו נועדה לזהות הבדל ברגישות חוש הריח בין שתי קבוצות של עכברים (סוג למשל פראי קבוצת מוטנטים בעלי חיים). בבדיקה זו, דילולים מרובים של ריח נעשים. בעלי חיים תמימים אז חוקר דילול אחת של ריח זה הזמן גישוש הכולל (תוך 3 דקות) נרשם. דילולים מרובים הריח נוסו על, בנושאים שונים נאיבי והזמן גישוש בסך הכל משמש להפקת בתגובה מנה עקומות עבור כל קבוצה של עכברים. שני חוקרים צריכים להיות מעורבים בדיקות, עם עיוור אחד גנוטיפים נושא ו / או תנאי. חוקר ראשי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג ארבעה כלובים נקיים (8 גובה X 10 W x 18 L, באינצ&#39;ים), ללא כל מצע. הקו עד ארבעה כלובים בממשלה biosafety. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מחיצות בין הזירה כל שימוש בנייר מסנן אטום. מניחים הבריסטול השחור על פני החלוקה הסופית כך את הקווים השחורים בצד את הצד התחתון של הכלוב. מכסים את החלק העליון של הזירה עם חתיכת ברורה של פרספקס כדי לאפשר האור כדי להאיר את הזירה. (א) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_8/figure1new.png" alt="איור 1" /> (ב) <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_9/image15.png" alt="איור 1.5" /> באיור 1. ארנה Set-up. (א) עטוף כהלכה, בזירה ריקה (ב) ארנה בנייר מסנן הנושא ריחניים. </li> <li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין הרגלה הנושאים. הנח את הנושא הראשון בכלוב הראשון הרגלה. לאחר 15 דקות, להעביר את הנושא הראשון לכלוב השני. לנקות את הכלוב הראשון עם שחפת Quatricide. בשלב הבא, המקום הנושא השני בכלוב, תחילה לנקות. המשך בתהליך זה בנושאים הבאים. בסופו של דבר, כל נושא צריך להיות מורגל בכל שלושת הכלובים לפני שיוצבו בזירה (כלוב הרביעי והאחרון) לעוד 15 דקות של התרגלות לפני הבדיקה. </li></ol> העיוור חוקר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את המספר המתאים של 2 אינץ&#39; על 2 אינץ&#39; ריבועים של נייר סינון עבור דגימות ריח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות ריח שנבחרו מראש, בהתאם לדלל אותו. לקבלת דוגמיות הידרופובי כגון חמאת בוטנים, להשתמש בשמן כמו ממס; עבור כל האחרים, יש להשתמש במים מזוקקים. וורטקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מכשיר הקלטת וידאו דיגיטלי בקצה המרוחק של הממשלה biosafety כזה בסוף כלוב כולו בפוקוס. קח וידאו ראשונית על מנת להבטיח פרמטרים נאותים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקלט את הסדר שבו דילולים ייבדקו, מקפיד באופן אקראי את סדר המשפטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נושא שיא של פסולת מספרי זיהוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הנושא כבר מורגל במשך 15 דקות בזירה, להתחיל לקראת במשפט הראשון. פיפטה דילול הראשונים במעלה ובמורד בצינור חרוטי לפני pipetting אותו על ריבוע נייר הסינון. משטח נייר לסנן בצורה אופטימלית צריך להיות מכוסה ~ 85% (כ 0.50-MLS של פתרון). השתמש kimwipe כדי לוודא נייר הסינון אינו רווי יתר על המידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין הקלטת וידאו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את ריבוע נייר לסנן בכלוב בצד הנגדי של המיקום הנוכחי של בעל החיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין תזמון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3 דקות, לעצור את ההקלטה ולהסיר את ריח מדולל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם רק אחד ריח (למשל קינמון) הוא להיבדק, להסיר את הנושא המבחן הראשון מהזירה. חזור על שלבים 6-11 עבור כל חיה, כראוי דילול ריח לכל נושא. אם אחד או יותר של הריח הוא להיבדק, אך לא להסיר את נושא הבדיקה מהזירה. במקום זאת, העיתוי להתחיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמתבקש לדלל את הניחוח הבא בשיטות כמו המפורטות לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי דקה 1, להתחיל בהקלטת וידאו. מניחים את ריבוע נייר פילטר עם דילול של ניחוח הבא בכלוב בצד השני של positio הנוכחי של החיההערה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6-13 עבור כל ריח, וציין את מספר קובץ הווידאו עבור כל ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 6-14 עבור כל נושא. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_10/image2new.png" alt="איור 2" /> איור 2. תוצאות נציג לישיבה של בדיקות רגישות חוש הריח. העכבר כל מקבוצת או שליטה (קבוצה א) או קבוצת הניסוי (קבוצה B) נחשף אחד מחמשת דילולים שונים של תמצית קינמון על נייר לסנן לגבי מושב אחד, שלוש, דקה. סה&quot;כ זמן לחקור את נייר הסינון הוערכה. העכברים בקבוצה A יש רגישות חוש הריח יותר מאשר אלו בקבוצת B. </li></ol> העדפות בדיקת חוש הריח בדיקה זו נועדה לזהות ליקויים זיהוי ספציפי, כלומר את היכולת לחוש ריחות אטרקטיביים או מרתיעה. ההליך הבא לווה בנדיבות מן הפרוטוקול של Kobayakawa, K., et al.3. שוב, שני חוקרים צריכים להיות מעורבים בדיקות, עם עיוור אחד גנוטיפים נושא ו / או מצבו. השעה גישוש בסך הכל נרשם שוב (עם הצגת וידאו) עבור ריחות שונים. ריחות אלה עם פעמים גישוש הכולל יותר מים המיועדים כמו &quot;אטרקטיבי&quot;, בעוד אלה עם פעמים פחות מים מכונים &quot;מרתיעה&quot;. החוקר אז ישקול אם ריחות אותו הם &quot;מושכים&quot; או &quot;מרתיעה&quot; עבור נבדקים שונים. אנא עקוב אחר צעדים 1-3 בסעיף בדיקת רגישות חוש הריח של החוקר הראשי. העיוור חוקר הנוהל לבדיקת העדפה הריח הוא זהה, עם שינויים קלים של שלבים 2 ו 4. אנא עקוב אחר הצעדים 1-15 בסעיף בדיקת רגישות חוש הריח של חוקר העיוור, עם השינויים הבאים: בשלב 2, באמצעות ניחוחות שנבחרו מראש (שילוב של שני ריחות אטרקטיביים מרתיעה), להפוך את פתרונות מדולל כראוי של כל אחד צינורות חרוטי. לקבלת דוגמיות הידרופובי כגון חמאת בוטנים, להשתמש בשמן כמו ממס; עבור כל האחרים, יש להשתמש במים מזוקקים. וורטקס. עבור לשלב 4, במקום להקליט את דילול להיבדק, להקליט את הסדר של ריחות מגוונים כי תיבחן, באופן אקראי, את הסדר של המשפטים. בדיקה זו נועדה לזהות ליקויים זיהוי ספציפי, כלומר את היכולת לחוש ריחות אטרקטיביים או מרתיעה. ההליך הבא לווה בנדיבות מן הפרוטוקול של Kobayakawa, K. et al. 3. שוב, שני חוקרים צריכים להיות מעורבים בדיקות, עם עיוור אחד גנוטיפים נושא ו / או מצבו. השעה גישוש בסך הכל נרשם שוב (עם הצגת וידאו) עבור ריחות שונים. ריחות אלה עם פעמים גישוש הכולל יותר מים המיועדים כמו &quot;אטרקטיבי&quot;, בעוד אלה עם פעמים פחות מים מכונים &quot;מרתיעה&quot;. החוקר אז ישקול אם ריחות אותו הם &quot;מושכים&quot; או &quot;מרתיעה&quot; עבור נבדקים שונים. אנא עקוב אחר צעדים 1-3 בסעיף בדיקת רגישות חוש הריח של החוקר הראשי. העיוור חוקר הנוהל לבדיקת העדפה הריח הוא זהה, עם שינויים קלים של 2 שלבים, 4 ו 13. אנא עקוב אחר הצעדים 1-15 בסעיף בדיקת רגישות חוש הריח של חוקר העיוור, עם השינויים הבאים: בשלב 2, באמצעות ניחוחות שנבחרו מראש (שילוב של שני ריחות אטרקטיביים מרתיעה), להפוך את פתרונות מדולל כראוי של כל אחד צינורות חרוטי. לקבלת דוגמיות הידרופובי כגון חמאת בוטנים, להשתמש בשמן כמו ממס; עבור כל האחרים, יש להשתמש במים מזוקקים. וורטקס. עבור לשלב 4, במקום להקליט את דילול להיבדק, להקליט את הסדר של ריחות מגוונים כי תיבחן, באופן אקראי, את הסדר במשפט אחד. עבור השלב 13, במקום מרובע נייר פילטר עם ניחוח הבא בכלוב בצד הנגדי של המיקום הנוכחי של בעל החיים. <img src="/files/ftp_upload/old/949_2009_1_14_11/image3new.png" alt="איור 3" /> איור 3. תוצאות נציג לישיבה של בדיקות העדפה חוש הריח. העכבר כל נחשף לכל אחד ריחות שונים על נייר לסנן לגבי מושב אחד, שלוש, דקה. סה&quot;כ זמן לחקור את נייר הסינון הוערכה. חמאת בוטנים ווניל הם ריחות אטרקטיביים (ניחוח זמן גישוש&gt; מים בזמן גישוש) ו 2-Methylbutyric חומצה היא מרתיעה (ניחוח זמן גישוש &lt;מים בזמן גישוש). ניקוד של בדיקות חוש הריח לאחר רכישת כל רגישות חוש הריח וסרטי וידאו העדפה, יש צורך לנתח את סה&quot;כ זמן לחקור כל דילול / ריח. האם החוקר עיוור לנתח את כל קטעי וידאו על עקביות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תצוגה מקדימה של vidאיו, וציין את הדברים הבאים: א) כאשר נייר הסינון ממוקם בזירה, ב) כאשר העכבר מתקרב נייר פילטר, ג) כאשר העכבר חוקר את נייר לסנן ד) כאשר שלוש דקות חלפו (מ כאשר המסנן הנייר הונח בזירה). לדעת מתי להתמקד בהתנהגות של העכבר מקלה במדויק הציון סה&quot;כ זמן לחקור לאחר בדיקתה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סקירת וידאו. הערה הזמן כאשר העכבר הראשון חוקר את נייר הסינון (latency). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש זמן, סטופר חקירות כל תוך שלוש דקות של הצבת נייר לסנן בזירה. השעה החקירה מוגדרת עת כאשר nares של העכבר הם &lt;1 מ&quot;מ מהעיתון הסינון. חשוב שלא לכלול כל הזמן כאשר סמן העכבר נמצא בסמיכות נייר הסינון, אך אינו פעיל חוקרת אותו. אין לכלול התקפי ללקק וללעוס את הנייר או התקפי יושב על הנייר בזמן גישוש מוחלט. זה הכרחי כדי לדבוק מקרוב בעקביות כללים אלה במדויק לנתח התנהגות חוש הריח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השהיית זמן שיא, את סך כל הזמן בילה בחקירת נייר לסנן קובץ וידאו מספר. </li></ol>

<ol><li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%26rsquo%3Bs+Wrong+with+my+Mouse%3F+Behavioral+Phenotyping+of+Transgenic+and+Knockout+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">What&rsquo;s Wrong with my Mouse? Behavioral Phenotyping of Transgenic and Knockout Mice.</a> , John Wiley and Sons. 42-60 (2007).</li>
<li>Irwin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+observational+assessment%3A+Ia.+A+systematic%2C+quantitative+procedure+for+assessing+the+behavioral+and+physiologic+state+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacologia%22%5BJournal%5D)">Comprehensive observational assessment: Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse.</a> Psychopharmacologia. 13, 222-257 (1968).</li>
<li>Kobayakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450, 503-508 (2007).</li>
</ol>

הבדיקות הנ&quot;ל מאפשרים הערכה מהירה ואמינה של תפקוד בסיסי חוש הריח. זה לא יהיה להתעלם, עם זאת, כי אמינות זה מחייב את הבחירה הכנה נאותה של נושאים לבדיקה. בעלי חיים חולה או נכה אחרת הם לעתים קרובות הנבדקים מבחן עקבית. כמו כן, הרגלה של נבדקים היא המפתח. מצאנו כי השימוש בכלובים מרובות במהלך תהליך הרגלה מאפשר החיות להיות נוח עם הנסיין טיפול ושינוי הסביבה. מצאנו גם כי זמנים קצרים יותר מאשר אלו הצביעו על הרגלה אינן מספיקות כדי להפחית את החרדה. חיות חרדה גם הם לעתים קרובות הנבדקים מבחן ...

<table><tbody><tr><td>2-Methylbutyric acid</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W269506</td><td>&lt;b&gt;ריכוזים בשימוש:&lt;/b&gt;9.16 x 10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-8&lt;/sup&gt; M (ב-H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>תמצית ונילין טהורה</td><td>ריאגנט</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;ריכוזים בשימוש:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; דילול (ב-H20)</td></tr><tr><td>חמאת בוטנים (Skippy, Extra Crunchy)</td><td>ריאגנט</td><td>Unilever</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;ריכוזים בשימוש:&lt;/b&gt;10% (w/v), בשמן מינרלי</td></tr><tr><td>תמצית קינמון</td><td>ריאגנט</td><td>McCormick &amp;amp; Co.</td><td>n/a</td><td>&lt;b&gt;ריכוזים בשימוש:&lt;/b&gt;10&lt;sup&gt;-1&lt;/sup&gt; &amp;#8211; 10&lt;sup&gt;-5&lt;/sup&gt; דילול (ב-H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;0)</td></tr><tr><td>שמן מינרלי, קליל</td><td>ריאגנט</td><td>Fisher Scientific</td><td>O121-1</td><td>&lt;b&gt;ריכוזים בשימוש:&lt;/b&gt;N/A</td></tr></tbody></table>

בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים

Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse

מערכת ההרחה היא מכרסם של הגדלת עניין למדענים, למד, בין השאר, בביולוגיה מערכות בגלל המעגלים סטריאוטיפית, נגיש עדיין שלה. בנוסף, יכולת ייחודית זו של האזור כדי לייצר נוירונים חדשים לאורך כל החיים של אורגניזם עושה את זה מערכת אטרקטיבי עבור ביולוגים התפתחותיים משובי כאחד. אינטרס כזה מחייב אמצעי להערכה מהירה, אך אמין של תפקוד חוש הריח. בדיקות רבות יכולת ההרחה הם מורכבים, משתנים או לא תוכנן במיוחד עבור עכברים. כמו כן, כמה בדיקות רגישים גירעונות זיכרון, כמו גם ליקויים ביכולות ההרחה, התוצאות שהושגו מבלבלים. כאן אנו מתארים סוללה פשוטה של ​​בדיקות שנועדו לזהות פגמים רגישות חוש הריח העדפה ו. ראשית, ההערכה הראשונית בריאות כללית מאפשרת זיהוי של בעלי חיים מתאים בדיקות נוספות. שנית, עכברים נחשפים דילולים שונים של ריחות על מנת לבדוק אם יש הבדל הסף. שלישית, עכברים מוצגים עם ריחות שונים, הן אטרקטיביות מרתיעה, אשר מאפשרים הערכה של העדפת חוש הריח. מחקרים אלה פשוט צריך לעשות את האפיון הראשוני של התנהגות הריח נגיש עבור מעבדות של משאבים מגוונים ומומחיות.

יסוד, המאפיינים הייחודיים של המערכת עדיין מכרסם הריח הובילו מחקר הגוברת בקרב ביולוגים. הערכה פשוטה יחסית של תפקידה הוא צריך גם אז. כאן אנו מתארים בדיקות רגישות לאפיון של רגישות העכבר העדפה הריח ו.

מערכת הריח של מכרסמים מעוררת עניין גובר בקרב מדענים, ונחקרת, בין היתר, בביולוגיה של מערכות בשל היותה סטריאוטיפית אך נגישה...

מערכת הריח או חוש הריח של חולדה הפכו לתחום מחקר פופולרי יותר ויותר. כדי לבחון רגישות הריחית, מאפשרים לעכבר להתרגל לכלוב ללא מצע, ולאחר מכן חושפים אותו לרכיבים של נייר סינון המכילים ריכוזים עולים של חומר ריח. לאחר מכן נרשם משך הזמן שבו העכבר חוקר את נייר הסינון.בדיקת העדפה ריחית מבוצעת באותה הדרך בדיוק. עם זאת, במקום להעלות את ריכוזי החומר הריחני, נרשם משך הזמן שבו העכבר מבלה בחקירת ריחונות שונים. שלום, אני רושל ויט מהמעבדה של ד"ר רוזלין סיגל במחלקה לנוירוביולוגיה בבית הספר לרפואה של הרווארד.שלום, אני ג'ניפר דנו, גם אני ממעבדת Siegel. היום נראה לכם שני הליכים לבדיקה הופית. אנו משתמשים בהליכים אלה במעבדה שלנו כדי לחקור רגישות הופית והעדפה הופית.אם כן, נתחיל. כדי להתחיל את הליך בדיקת הרגישות הריחית, השג ארבעה כלובים נקיים ללא מצע. מידות הכלובים צריכות להיות 8 אינץ' גובה, 10 אינץ' רוחב ו-18 אינץ' אורך.סדרו את ארבעת הכלובים בתוך קבינה לבטיחות ביולוגית. לאחר מכן, הקימו מחיצות בין כל זירה באמצעות נייר מסנן אטום. לאחר מכן, הניחו לוח קרטון שחור על המחיצה האחרונה כך שיכסה את הדופן ואת התחתית של הכלוב.אפשרו לאור להאיר את הזירה על ידי כיסוי חלקו העליון של הכלוב בפיסת פלקסיגלס שקופה. כעת התחילו בהרגלת הנבדקים לכך. הניחו את הנבדק הראשון בכלוב הראשון.לאחר 15 דקות, העבירו את הנבדק הראשון לכלוב השני. נקו את הכלוב הראשון באמצעות Quatra side tb. לאחר מכן, מקמו את הנבדק השני בתוך הכלוב הראשון שנוקה.המשיכו בתהליך זה עם נבדקים נוספים לפני הבדיקה. מקמו את אחד הנבדקים בכלוב הרביעי והרגילו אותו למשך 15 דקות נוספות. בסופו של דבר, כל אחד משלושת הכלובים הראשונים צריך להכיל נבדק שהורגל אליו.כעת אנו מוכנים להכין את דגימות הריח. יש להכין את דגימות הריח על ידי חוקר אחר, שאינו מודע לזהות הנבדקים, לגנוטיפים ו/או לתנאים. התחילו את הכנת הדגימות על ידי גזירת מספר מתאים של ריבועי נייר סינון בגודל של שני אינץ' על שני אינץ'.לאחר מכן, הכינו את הדילולים המתאימים של הריח שנבחר מראש במבחנות קוניות. שימו לב כי רקעים שונים של עכברים עשויים לדרוש דילולים שונים של הריח כדי להשיג הבחנה יעילה בין קבוצת הביקורת לקבוצת הניסוי. בשל תצפית זו, אנו מוצאים כי מועיל לגזור באופן אמפירי את דילולי הריח המתאימים על נבדקים הדומים לקבוצת הביקורת לפני המעבר לבדיקה ניסויית של עכברים נאיביים. עבור דגימות הידרופוביות, כגון חמאת בוטנים, השתמשו בשמן כממס, ועבור כל השאר השתמשו בממס רגיל.השתמשו בערבול (vortex) עם מים מזוקקים כדי להבטיח שהדילולים מעורבבים כראוי. לאחר מכן, הניחו מכשיר הקלטה של וידאו דיגיטלי בקצה הרחוק של מCב המנדף כך שכל קצה הכלוב יהיה במיקוד. צלמו וידאו ראשוני כדי לוודא שהגדרות המצלמה הולמות.רשמו במחברת מעבדה את הסדר שבו ייבחנו הדילולים, והקפידו להקריב את הסדר באופן אקראי בכל ניסוי. רשמו בנוסף את מספר השגר ומספרי הזיהוי של הנבדק. לאחר שהנבדק הותאם למשך 15 דקות בזירה, התחילו בהכנה לניסוי הראשון.שאוב את הדילול הראשון למעלה ולמטה בתוך האפיקורס (conical tube) לפני העברתו לריבוע של נייר סינון. פני השטח של נייר הסינון צריכים להיות מכוסים באופן אופטימלי בכ-85%. השתמש ב-Kim wipe כדי לוודא שנייר הסינון אינו רווי מדי.כעת, לאחר שנייר המסנן המריח מוכן, אנו מוכנים לבצע את ניסוי הרגישות הריחית הראשון. כדי להתחיל את הניסוי, הפעילו את הקלטת הווידאו. לאחר מכן, הניחו את נייר המסנן המריח בכלוב, בקצה הנגדי למיקומו הנוכחי של בעל החיים.התחילו את התזמון. לאחר שלוש דקות, הפסיקו את ההקלטה והסירו את הריח. לאחר מכן, הפעילו שוב את הטיימר והכינו דגימת ריח שנייה.לאחר דקה אחת, התחילו בהקלטת וידאו. כפי שנעשה קודם לכן, הניחו את דגימת הריח בכלוב בקצה opposite למיקומו הנוכחי של בעל החיים. חזרו על הליך זה עבור כל דילול ריח ועבור כל נסייני, וזכרו לרשום את מספר קובץ הווידאו עבור כל ניסוי.כעת, לאחר שהראינו לכם את בדיקת הרגישות הריחית, המשיכו לבדיקת ההעדפה הריחית. עבור בדיקת ההעדפה הריחית, עקבו אחר אותו הליך שמתואר עבור בדיקת הרגישות הריחית, למעט שני שינויים קלים. ראשון.במקום להכין מספר דילולות של ריח אחד שנבחר מראש, הכינו גם ריח מושך וגם ריח דוחה. שנית, במקום לתעד את הדילול שייבדק, תעדו את סדר הגרסאות שייבדקו תוך הגרלה של הסדר בכל ניסוי. כל שאר השלבים בפרוצדורה זהים לבדיקה הריחית, כולל הרגלת הנבדקים, שימוש בחוקר עיוור, מריחת הריח על נייר סינון והקלטת וידאו מתוזמנת של כל ניסוי.עם השלמת בדיקות ההעדפה הריחית, התקדמו לניקוד הבדיקות הריחיות. לאחר איסוף כל סרטוני הרגישות וההעדפה הריחית, רשמו את סך הזמן שהנושא הקדיש לחקירת כל דילול או ריח לצורך עקביות. הנחו את החוקר, שאינו מודע לזהות הדגימות (blind researcher), לנתח את הסרטונים כדי לבצע ניתוח זה.מומלץ תחילה לצפות בסרטון כמבט מקדימ וلسמן את הנקודות הבאות: מתי נייר הסינון מונח בזירה, מתי העכבר מתקרב לנייר הסינון, מתי העכבר בוחן את נייר הסינון, ומתי חלפו שלוש דקות מרגע הנחת נייר הסינון בזירה. ידיעה מתי להתמקד בהתנהגות העכבר מקלה על דירוג מדויק של סך הזמן שהוקדש לחקירה במהלך הבדיקה. כעת, צפו בסרטון כולו; השתמשו בשעון עצר כדי למדוד את משך כל הבחינות שנערכו בתוך שלוש דקות מהנחת נייר הסינון בזירה.זמן החקירה מוגדר ככל משך זמן שבו אפו של העכבר נמצא במרחק של פחות ממילימטר אחד מנייר המסנן; חשוב שלא לכלול כל זמן שבו העכבר נמצא בקרבה למסנן אך אינו חוקר אותו באופן פעיל. אין לכלול פרקי לעיסה וליקוק של הנייר, כמו כן פרקים שבהם העכבר יושב על הנייר, בחישוב זמן החקירה הכולל. הקפידו על כללים אלה באופן הדוק ועקבי על מנת לנתח במדויק את ההתנהגות הריחית.לאחר צפייה בהקלטת הווידאו ורישום של סך הזמן שהוקדש לבדיקת נייר המסנן, חזור על הניתוח עבור כל הסרטונים. להלן תוצאות מייצגות מבדיקהו של חוש הריח. תרשים ראשון זה מציג את התוצאות עבור סבב של אימון לרגישות ריחית.כל עכבר מקבוצת הניסוי B או מקבוצת הביקורת A נחשף לאחת מחמשה מהדלויות שונות של תמצית קינמון על נייר סינון למשך מפגש אחד של שלושה דקות. הזמן הכולל שהושקע בחקירת נייר הסינון נמדד, ותרשים זה מציג את התוצאות עבור מפגש של בדיקת העדפה ריחית. כל עכבר נחשף לכל אחד מהריחות השונים על נייר סינון למשך מפגש אחד של שלושה דקות.הוערך סך הזמן שהוקדש לחקירת נייר המסנן. הרגע הצגנו בפניכם כיצד לבחון יכולות ריח בעכבר בוגר; בעת שימוש בנהלים אלו, חשוב להשתמש בעכברים נאיביים כדי לבחון במדויק יכולות ריח ולא יכולות אחרות כגון למידה וזיכרון. וזהו זה.תודה לצפייה ובהצלחה בניסויים שלכם.

olfactory-behavioral-testing-in-the-adult-mouse

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ליקוי בתפקוד הריח הוא מאפיין שכיח בהפרעות ניווניות רבות כולל מחלות פרקינסון, אלצהיימר והנטינגטון. במאמר הנוכחי אנו מתארים קבוצה של מבחנים להערכת הבחנה וזיהוי חוש הריח בעכברים שניתן להשתמש בהם כדי למדוד יכולות ריח במודלים של עכברים של מחלות ניווניות.

מבחני חוש הריח למודלי עכבר של ניווניות מחלות

כתב יד זה מתאר פרוטוקול לבחינת מערכת הריח של מכרסמים. מבחן ההתרגלות/אי-השבתה של חוש הריח יאפשר לחוקרים לקבוע אם עכבר מתרגל לריח המוצג שוב ושוב והאם העכבר מפגין חוסר התרגלות כאשר מוצג לו ריח חדש.

בדיקה לריח אפליה והרגלה בעכברים

אנו מציגים מבחן ריח פשוט ובלתי מוטה בעכברים. עם פרוטוקול זה ניתן להעריך אפליה, העדפה, הימנעות ורגישות לריח חדש בהשוואה למים במפגשים התנהגותיים בודדים. שיטה זו מיועדת לנסיין יחיד והניתוח מבוסס על עיבוד וידאו בעזרת מחשב.

פשוט וחוש ריח בדיקה לעכברים בסיוע מחשב

כאן, אנחנו מאמנים עכברים בפעילות associative learning כדי לבדוק את ריח אפליה. פרוטוקול זה מאפשר גם במחקרים על למידה-induced שינויים מבניים במוח.

מבחן אובייקטיבי, לשחזור של למידה חוש הריח ואפליה בעכברים

מאמר זה מספק תיאור מפורט של פרוטוקול הטיית שיפוט עכברים חדשני. כמו כן, מוכחות עדויות לרגישותה של משימת חפירת חוש הריח למצב רגשי, ותועלתה נדונה בתחומי מחקר מגוונים.

הערכה של הטיית שיפוט עכברים באמצעות משימת חפירת חוש הריח

מאמר זה מספק תיאור מפורט של מבחן המזון הקבור וניסוי אפליית ריח חברתי כדי להעריך את ההשפעות של חשיפה למזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים.

חקר ההשפעות של מזהמים סביבתיים בשאיפה על תפקוד חוש הריח בעכברים

פרוטוקול זה מתאר בניית אולפקטומטר לניסויי התנהגות חוש הריח. הוראות שלב אחר שלב, יחד עם תמונות, ניתנות על מנת להבטיח בנייה מוצלחת של האולפקטומטר. מידע לפתרון בעיות שנתקלו בהן במהלך התהליך כלול גם כן.

בניית אולפקטומטר לחקר התנהגות חוש הריח של מכרסמים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של בדיקת העדפת ריח המאפשר להעריך הטיות ריח שליליות כלפי גירוי ריח מעורר תיאבון ומרתיע כאחד במודלים של דיכאון בעכברים.

מבחן העדפת ריח למדידת הטיות הדוניות של חוש הריח במודלים של דיכאון בעכברים

בדיקת רגישות חזותית לטאות באמצעות פרדיגמה התניה אופרנטית המעסיקה וידאו השמעה אקראית של נקודה kinematograms ו ממוחשבת חסרי חוליות.

בדיקת רגישות חזותית על מהירות ועל כיוון התנועה של לטאות

המחקר של התנהגות של תנועה...

וידאו ברזולוציה גבוהה של מעקב אחר תנועה של מבוגרים תסיסנית melanogaster

למד שיטות לבדיקת רגישות ומועדפות חוש הריח בעכברים מבוגרים באמצעות נייר מסנן עם ריכוזים שונים של ריח. שיטות אלו מספקות כלים אמינים למחקר בתחומי הנוירוביולוגיה והתנהגות.

בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים

גלה סרטונים נוספים