בדיקה התנהגותית חוש הריח של העכבר למבוגרים

מערכת הריח או חוש הריח של חולדה הפכו לתחום מחקר פופולרי יותר ויותר. כדי לבחון רגישות הריחית, מאפשרים לעכבר להתרגל לכלוב ללא מצע, ולאחר מכן חושפים אותו לרכיבים של נייר סינון המכילים ריכוזים עולים של חומר ריח. לאחר מכן נרשם משך הזמן שבו העכבר חוקר את נייר הסינון.

בדיקת העדפה ריחית מבוצעת באותה הדרך בדיוק. עם זאת, במקום להעלות את ריכוזי החומר הריחני, נרשם משך הזמן שבו העכבר מבלה בחקירת ריחונות שונים. שלום, אני רושל ויט מהמעבדה של ד"ר רוזלין סיגל במחלקה לנוירוביולוגיה בבית הספר לרפואה של הרווארד.

שלום, אני ג'ניפר דנו, גם אני ממעבדת Siegel. היום נראה לכם שני הליכים לבדיקה הופית. אנו משתמשים בהליכים אלה במעבדה שלנו כדי לחקור רגישות הופית והעדפה הופית.

אם כן, נתחיל. כדי להתחיל את הליך בדיקת הרגישות הריחית, השג ארבעה כלובים נקיים ללא מצע. מידות הכלובים צריכות להיות 8 אינץ' גובה, 10 אינץ' רוחב ו-18 אינץ' אורך.

סדרו את ארבעת הכלובים בתוך קבינה לבטיחות ביולוגית. לאחר מכן, הקימו מחיצות בין כל זירה באמצעות נייר מסנן אטום. לאחר מכן, הניחו לוח קרטון שחור על המחיצה האחרונה כך שיכסה את הדופן ואת התחתית של הכלוב.

אפשרו לאור להאיר את הזירה על ידי כיסוי חלקו העליון של הכלוב בפיסת פלקסיגלס שקופה. כעת התחילו בהרגלת הנבדקים לכך. הניחו את הנבדק הראשון בכלוב הראשון.

לאחר 15 דקות, העבירו את הנבדק הראשון לכלוב השני. נקו את הכלוב הראשון באמצעות Quatra side tb. לאחר מכן, מקמו את הנבדק השני בתוך הכלוב הראשון שנוקה.

המשיכו בתהליך זה עם נבדקים נוספים לפני הבדיקה. מקמו את אחד הנבדקים בכלוב הרביעי והרגילו אותו למשך 15 דקות נוספות. בסופו של דבר, כל אחד משלושת הכלובים הראשונים צריך להכיל נבדק שהורגל אליו.

כעת אנו מוכנים להכין את דגימות הריח. יש להכין את דגימות הריח על ידי חוקר אחר, שאינו מודע לזהות הנבדקים, לגנוטיפים ו/או לתנאים. התחילו את הכנת הדגימות על ידי גזירת מספר מתאים של ריבועי נייר סינון בגודל של שני אינץ' על שני אינץ'.

לאחר מכן, הכינו את הדילולים המתאימים של הריח שנבחר מראש במבחנות קוניות. שימו לב כי רקעים שונים של עכברים עשויים לדרוש דילולים שונים של הריח כדי להשיג הבחנה יעילה בין קבוצת הביקורת לקבוצת הניסוי. בשל תצפית זו, אנו מוצאים כי מועיל לגזור באופן אמפירי את דילולי הריח המתאימים על נבדקים הדומים לקבוצת הביקורת לפני המעבר לבדיקה ניסויית של עכברים נאיביים. עבור דגימות הידרופוביות, כגון חמאת בוטנים, השתמשו בשמן כממס, ועבור כל השאר השתמשו בממס רגיל.

השתמשו בערבול (vortex) עם מים מזוקקים כדי להבטיח שהדילולים מעורבבים כראוי. לאחר מכן, הניחו מכשיר הקלטה של וידאו דיגיטלי בקצה הרחוק של מCב המנדף כך שכל קצה הכלוב יהיה במיקוד. צלמו וידאו ראשוני כדי לוודא שהגדרות המצלמה הולמות.

רשמו במחברת מעבדה את הסדר שבו ייבחנו הדילולים, והקפידו להקריב את הסדר באופן אקראי בכל ניסוי. רשמו בנוסף את מספר השגר ומספרי הזיהוי של הנבדק. לאחר שהנבדק הותאם למשך 15 דקות בזירה, התחילו בהכנה לניסוי הראשון.

שאוב את הדילול הראשון למעלה ולמטה בתוך האפיקורס (conical tube) לפני העברתו לריבוע של נייר סינון. פני השטח של נייר הסינון צריכים להיות מכוסים באופן אופטימלי בכ-85%. השתמש ב-Kim wipe כדי לוודא שנייר הסינון אינו רווי מדי.

כעת, לאחר שנייר המסנן המריח מוכן, אנו מוכנים לבצע את ניסוי הרגישות הריחית הראשון. כדי להתחיל את הניסוי, הפעילו את הקלטת הווידאו. לאחר מכן, הניחו את נייר המסנן המריח בכלוב, בקצה הנגדי למיקומו הנוכחי של בעל החיים.

התחילו את התזמון. לאחר שלוש דקות, הפסיקו את ההקלטה והסירו את הריח. לאחר מכן, הפעילו שוב את הטיימר והכינו דגימת ריח שנייה.

לאחר דקה אחת, התחילו בהקלטת וידאו. כפי שנעשה קודם לכן, הניחו את דגימת הריח בכלוב בקצה opposite למיקומו הנוכחי של בעל החיים. חזרו על הליך זה עבור כל דילול ריח ועבור כל נסייני, וזכרו לרשום את מספר קובץ הווידאו עבור כל ניסוי.

כעת, לאחר שהראינו לכם את בדיקת הרגישות הריחית, המשיכו לבדיקת ההעדפה הריחית. עבור בדיקת ההעדפה הריחית, עקבו אחר אותו הליך שמתואר עבור בדיקת הרגישות הריחית, למעט שני שינויים קלים. ראשון.

במקום להכין מספר דילולות של ריח אחד שנבחר מראש, הכינו גם ריח מושך וגם ריח דוחה. שנית, במקום לתעד את הדילול שייבדק, תעדו את סדר הגרסאות שייבדקו תוך הגרלה של הסדר בכל ניסוי. כל שאר השלבים בפרוצדורה זהים לבדיקה הריחית, כולל הרגלת הנבדקים, שימוש בחוקר עיוור, מריחת הריח על נייר סינון והקלטת וידאו מתוזמנת של כל ניסוי.

עם השלמת בדיקות ההעדפה הריחית, התקדמו לניקוד הבדיקות הריחיות. לאחר איסוף כל סרטוני הרגישות וההעדפה הריחית, רשמו את סך הזמן שהנושא הקדיש לחקירת כל דילול או ריח לצורך עקביות. הנחו את החוקר, שאינו מודע לזהות הדגימות (blind researcher), לנתח את הסרטונים כדי לבצע ניתוח זה.

מומלץ תחילה לצפות בסרטון כמבט מקדימ וلسמן את הנקודות הבאות: מתי נייר הסינון מונח בזירה, מתי העכבר מתקרב לנייר הסינון, מתי העכבר בוחן את נייר הסינון, ומתי חלפו שלוש דקות מרגע הנחת נייר הסינון בזירה. ידיעה מתי להתמקד בהתנהגות העכבר מקלה על דירוג מדויק של סך הזמן שהוקדש לחקירה במהלך הבדיקה. כעת, צפו בסרטון כולו; השתמשו בשעון עצר כדי למדוד את משך כל הבחינות שנערכו בתוך שלוש דקות מהנחת נייר הסינון בזירה.

זמן החקירה מוגדר ככל משך זמן שבו אפו של העכבר נמצא במרחק של פחות ממילימטר אחד מנייר המסנן; חשוב שלא לכלול כל זמן שבו העכבר נמצא בקרבה למסנן אך אינו חוקר אותו באופן פעיל. אין לכלול פרקי לעיסה וליקוק של הנייר, כמו כן פרקים שבהם העכבר יושב על הנייר, בחישוב זמן החקירה הכולל. הקפידו על כללים אלה באופן הדוק ועקבי על מנת לנתח במדויק את ההתנהגות הריחית.

לאחר צפייה בהקלטת הווידאו ורישום של סך הזמן שהוקדש לבדיקת נייר המסנן, חזור על הניתוח עבור כל הסרטונים. להלן תוצאות מייצגות מבדיקהו של חוש הריח. תרשים ראשון זה מציג את התוצאות עבור סבב של אימון לרגישות ריחית.

כל עכבר מקבוצת הניסוי B או מקבוצת הביקורת A נחשף לאחת מחמשה מהדלויות שונות של תמצית קינמון על נייר סינון למשך מפגש אחד של שלושה דקות. הזמן הכולל שהושקע בחקירת נייר הסינון נמדד, ותרשים זה מציג את התוצאות עבור מפגש של בדיקת העדפה ריחית. כל עכבר נחשף לכל אחד מהריחות השונים על נייר סינון למשך מפגש אחד של שלושה דקות.

הוערך סך הזמן שהוקדש לחקירת נייר המסנן. הרגע הצגנו בפניכם כיצד לבחון יכולות ריח בעכבר בוגר; בעת שימוש בנהלים אלו, חשוב להשתמש בעכברים נאיביים כדי לבחון במדויק יכולות ריח ולא יכולות אחרות כגון למידה וזיכרון. וזהו זה.

תודה לצפייה ובהצלחה בניסויים שלכם.