Immunocitochimica e immunoistochimica

L'immunocitochimica o ICC e l'immunoistochimica o IHC sono tecniche di colorazione che utilizzano anticorpi legati agli enzimi per visualizzare e quantificare proteine o antigeni specifici in cellule in coltura o sezioni di tessuto.

Nell'ICC, un singolo strato di cellule bersaglio viene coltivato su un vetrino coprioggetti. Le cellule vengono fissate con un agente reticolante per prevenire la degradazione enzimatica dell'antigene, quindi trattate con un detergente per rendere permeabile la membrana cellulare.

Nell'IHC l'intero tessuto è fissato e incorporato in un blocco di paraffina. Quindi, il campione viene sezionato in fette sottili, che possono essere posizionate su vetrini. Infine, la paraffina viene rimossa per recuperare l'antigene.

Una volta che gli antigeni sono accessibili nel campione, vengono legati da anticorpi primari specifici per il bersaglio legati a enzimi coniugati come la perossidasi di rafano.

L'enzima catalizza l'ossidazione della colorazione DAB in un precipitato marrone consentendo la visualizzazione della proteina di interesse.

Se il segnale rilevato è debole, vengono utilizzati anticorpi secondari con enzimi coniugati per legare un anticorpo primario non