Tipi di cromatografia su colonna

La filtrazione su gel, lo scambio ionico e la cromatografia di affinità sono i tipi comuni di cromatografia su colonna utilizzati per estrarre composti puri da una miscela, come una sospensione proteica.

La cromatografia con filtrazione su gel utilizza una matrice inerte di perle di gel polimerico per creare pori di dimensioni specifiche.

Nel caso di una sospensione proteica, le proteine più grandi della dimensione dei pori eluiscono per prime, mentre quelle più piccole sono intrappolate nelle perle di gel. Queste proteine intrappolate possono quindi essere eluite con più lavaggi con solvente.

Al contrario, una colonna a scambio ionico è impacchettata con perle di matrice rivestite con acidi o basi deboli che conferiscono loro una carica netta positiva o negativa a un certo pH.

Questo aiuta a separare le proteine in base alla loro carica superficiale formando legami ionici con le proteine con carica opposta.

Infine, la cromatografia di affinità utilizza una matrice marcata con ligandi, come gli anticorpi, per estrarre una proteina bersaglio da una miscela in base a specifiche interazioni di legame.

Nella cromatografia di affinità e a scambio ionico, la proteina bersaglio viene infine eluita aggiungendo un solvente di eluizione che indebolisce le interazioni colonna-proteina a causa di un cambiamento in condizioni come il pH, la forza ionica o l'introduzione di una molecola competitiva.