4.10: Legame proteina-farmaco: metodi di determinazione

La determinazione del legame proteina-farmaco può essere ottenuta tramite metodi indiretti e diretti, ciascuno dei quali fornisce delle preziose informazioni sull'interazione tra le proteine ​​e i farmaci.

I metodi indiretti comportano l'isolamento del farmaco legato dalla sua forma libera in campioni biologici come il sangue, il siero o il plasma. Queste tecniche mirano a misurare la percentuale di farmaci legati alle proteine. La dialisi all'equilibrio è un metodo comunemente utilizzato in cui la concentrazione del farmaco libero all'equilibrio viene misurata separando il farmaco legato e quello non legato usando una membrana semipermeabile. La dialisi dinamica, d'altro canto, valuta il movimento del farmaco attraverso una membrana per comprenderne le caratteristiche di legame.

Vengono impiegate varie tecniche per separare il farmaco legato alle proteine ​​dalla sua forma libera. L'ultrafiltrazione comporta l'utilizzo di un filtro di taglio del peso molecolare definito per separare il farmaco legato e non legato. L'ultracentrifugazione usa la centrifugazione ad alta velocità per separare il farmaco legato alle proteine ​​dal farmaco libero nel campione. La cromatografia a filtrazione su gel è un'altra tecnica che separa le molecole in base alle loro dimensioni e al peso molecolare.

Al contrario, i metodi diretti stimano le caratteristiche dei siti di legame in soluzioni proteiche pure senza separare la forma del farmaco legato. La spettroscopia UV e la fluorescenza sono comunemente utilizzate in questi metodi per determinare la concentrazione dei farmaci legati alle proteine. I ricercatori possono ottenere delle informazioni sulle caratteristiche di legame misurando le proprietà di assorbanza o fluorescenza del complesso farmaco-proteina. Gli elettrodi ione-selettivi vengono usati anche per misurare il legame ione-proteina e per comprendere le interazioni tra farmaci e ioni specifici.

Il legame proteina-farmaco è determinato attraverso metodi indiretti e diretti.

I metodi indiretti prevedono l'isolamento del farmaco legato dalla sua forma libera in campioni biologici come sangue, siero o plasma per determinare la percentuale di legame.

Queste tecniche includono la dialisi all'equilibrio per misurare la concentrazione libera del farmaco all'equilibrio e la dialisi dinamica per valutare il movimento del farmaco attraverso una membrana semipermeabile.

L'ultrafiltrazione, l'ultracentrifugazione e la filtrazione su gel possono separare efficacemente il farmaco legato alle proteine dalla sua forma libera.

Al contrario, i metodi diretti non richiedono la separazione della forma del farmaco legato, ma stimano le caratteristiche dei siti di legame in soluzioni proteiche pure.

Questi metodi includono la spettroscopia UV e di fluorescenza per determinare la concentrazione di farmaci legati alle proteine ed elettrodi iono-selettivi per misurare il legame ione-proteina.

Vari grafici, vale a dire il grafico diretto, il grafico di Scatchard, il diagramma di Klotz o Lineweaver-Burk e il diagramma di Hitchcock, vengono utilizzati per analizzare i dati di legatura.

Questi metodi forniscono collettivamente preziose informazioni sull'interazione proteina-farmaco.