Induzione neurale è il primo passo nella formazione del cervello. Si tratta di un meccanismo attraverso il quale nodo di Hensen (organizzatore), istruisce tessuti adiacenti ad adottare un destino neurale, cioè di dare origine al sistema nervoso. Questo video dimostra un test per l'induzione neurale in embrione di pollo.
Articolo metodologico
Test di induzione neurale nell'embrione Chick
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'embrione di pollo è uno strumento prezioso per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. La sua trasparenza, accessibilità e facilità di manipolazione, lo rendono uno strumento ideale per studiare la formazione ed il modello iniziale del sistema nervoso. Questo video mostra come tessuto organizzatore innesto in un ospite, un metodo attraverso il quale nodo di Hensen s (l'organizzatore in embrione di pollo) si innesta in un ectoderma competente del paese ospitante. L'innesto organizzatore istruisce sovrastante na ve tessuto di adottare un destino neurale inducendo tramite segnali neurali. Questo meccanismo viene definito come l'induzione neurale, e costituisce il primo passo nella formazione del cervello e del midollo spinale in amnioti. Questo metodo è utilizzato essenzialmente per la caratterizzazione di molecole putativo neurale inducendo in pulcino. Questo video mostra le varie fasi del test per l'induzione neurale; In primo luogo, l'embrione è donnor espiantati e appuntato su un piatto. Poi, l'embrione host è pronto per la cultura Nuovo. L'innesto viene asportato e trapiantato nella zona pellucida margine ospite. L'host è in coltura per 18-22 ore. L'assemblea è fisso e trattati per le applicazioni più (ad esempio di ibridazione in situ). Questo metodo è stato originariamente ideato da Waddington
Protocollo
I. Panoramica schematica:
Questo video mostra le varie fasi di analisi per l'induzione neurale in embrione di pollo. In primo luogo, l'embrione host è espiantati nella cultura New [NI1]. Poi, l'embrione è donnor espiantati in soluzione salina e nodo di Hensen (l '"organizzatore" in pulcino) è marcato con colorante fluorescente Dii [NI2]. Nodo di Hensen è asportato dall'embrione donnor [NI3] e trapiantati per l'embrione host [NI4, NI5]. L'embri....
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Discussione
Questo video mostra le varie fasi di esecuzione di un test per l'induzione neurale; Questo test è essenzialmente utilizzato per la caratterizzazione di molecole che inducono putativo neurali in pulcino, e quindi possono essere utilizzati per una vasta gamma di applicazioni, che vanno dalla micromanipolazioni embriologica 1-4; da 6 a svelare nuove cascate di segnalazione 7,8, tutti volti alla comprensione del primo passo nella formazione del cervello e del restante sistema nervoso.
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Ringraziamenti
DP è destinatario del Premio Ruth Kirschstein DA021977 1F32-01A1 dal National Institute on Drug Abuse. Questo lavoro è stato sostenuto dal M. Margaret Alkek Fondazione RHF.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Uova | Animale | Charles River Laboratories | Fertile Premium | Fecondate, HH3+ (14 ore) |
| Stereomicroscopio | Microscopio | Leica Microsystems | MZ9.5 o simili | |
| Incubatore per ibridazione | Attrezzatura | Robbins Scientific, SciGene | M1000 | Utilizzare con piastra di Petri Pyrex capovolta e 500 ml di ddH₂O2Il becher |
| Incubatrice automatica Marsh | Attrezzatura | Lione | RX | |
| pirofila Pyrex | ||||
| Orafo’vetro di 50 mm | Strumento | VWR international | 66112-060 | |
| Anelli di vetro | Strumento | Struttura fisica dell'impianto | tagliare sezioni di tubo di vetro spesse 4 mm (diametro esterno 27 mm, diametro interno 25 mm). Non lucidare finemente. | |
| Pinze curve (1) | Strumento | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Pinze (2) | Strumento | Fine Science Tools | 11002-13 | a estremità smussata utilizzando una pietra levigante e 100 µl di olio minerale |
| Forbici fini | Strumento | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Piatti di plastica | Strumento | Falcon BD | 353001 | |
| Pompetta di gomma | Strumento | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| DiI | Reagente | Invitrogen | D-282 | |
| Assemblaggio del tubo dell'aspiratore | Strumento | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| Micr–elettrodo puller | Attrezzatura | Sutter Instrument Co. | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipetta | |
| Pipetta capillare di Pasteur | Strumento | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | bordo arrotondato sotto la fiamma |
| Camera di coltura | Strumento | Pioneer Plastics | 030C | |
| Tubo microcapillare | Strumento | Sigma-Aldrich | P1049-1PAK | |
| Lama per microdissezione | Strumento | Fine Science Tools | 10056-12 | Utilizzare per forare le cavità prima dell'ibridazione in situ |
| Puntine da dissetamento di 0,2 mm di diametro | Strumento | Fine Science Tools | 26002-20 | Mescolare 1 parte di agente indurente con 9 parti di base; incubare ON a 37 °C |
| Diethylpirocarbonato (DEPC) | Reagente | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Agente indurente e base per elastomero siliconico Sylgard 184 | Dow Corning | 0001986475 | Mescolare 1 parte di agente indurente con 9 parti di base; incubare ON a 37 °C | |
| Diethylpirocarbonato (DEPC) | Acros Organics | 10025025 | Aggiungere 1 ml di DEPC a 1 l di PBS; agitare; autoclavare | |
| 16% PFA | Electron Microscopy Sciences | 15710 |
Riferimenti
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol
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