Questo articolo descrive una tecnica ad alta risoluzione temporale e spaziale a otticamente movimento immagine del potenziale d'azione sulla superficie del Langendorff-cuore perfuso di ratto utilizzando un colorante potenziometrica (di-8-ANEPPS).
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Articolo metodologico
Mappatura ottica di Langendorff-perfusi Hearts Rat
In questo articolo
Sommario
Abstract
Mappatura ottica della superficie cardiaca con coloranti fluorescenti voltaggio-sensibile è diventato un importante strumento per indagare l'eccitazione elettrica in modelli sperimentali che vanno in scala da colture di cellule di interi organi
Protocollo
Parte 1: Preparare le soluzioni e il sistema isolato cuore perfuso
- La mattina del dell'esperimento, 4,0 L di Krebs-Henseleit soluzione viene preparata come descritto in precedenza [5, 6].
- 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime (BDM) è sciolto in 1,0 L di Krebs-Henseleit soluzione decantata dal perfusato preparato al punto 1.1.
- Altri 150 ml di Krebs-Henseleit viene rimosso dal perfusato preparato al passo 1.1 e mescolato con 5 mol / l di-8-ANEPPS (diluito da un mMol / L 10 magazzino sciolto in dimetilsolfossido (DMSO)).
- Queste tre soluzioni sono trasferiti ad acqua con camicia in vetro serbatoi (Radnóti) dove sono pre-....
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Discussione
L'asportazione del cuore di ratti anestetizzati deve essere eseguita rapidamente per evitare di ischemia miocardica. Se la perfusione ischemia coronarica o insufficiente si verifica, il cuore probabilmente sviluppare aritmie e può diventare infartuata. Inoltre, questi cuori si dimostrano insufficienti emissione di fluorescenza per le registrazioni informative e le analisi successive. Prima di caricare il colorante, le cellule del miocardio devono essere adeguatamente perfusi con soluzione Krebs-Henseleit di stabilir.......
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Dichiarazioni
Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso in bambini Hospital di Boston.
Ringraziamenti
Questo lavoro è sostenuto da borse di ricerca dal National Institutes of Health (HL068915; HL088206) e contributi al Fondo di conduzione cardiaca presso il Children Hospital di Boston.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| CardioCMOS-SM128f | Attrezzatura | RedShirtImaging, LLC | ||
| Software CardioPlex | Attrezzatura | RedShirtImaging, LLC | ||
| Sorgente luminosa LED LUXEON 460-490 nm | Attrezzatura | Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA | LXHL-PB02 | |
| Amplificatore ECG Tipo 689 Hugo Sachs Elektronik | Attrezzatura | Harvard Apparatus | 730149 | |
| Specchio Dicroico 505 nm | Attrezzatura | Semrock | FF505-SDi01-25x36 | |
| Filtro di Emissione Passa-Alto a 605 nm | Attrezzatura | SciMedia | ||
| THT Sideways | Attrezzatura | SciMedia | 25 BM-8 | |
| Porta Giunto Sferico Mini | Attrezzatura | Harvard Apparatus | BS4 73-0177 | |
| Set di Elettrodi di Stimolazione Piccoli | Attrezzatura | Harvard Apparatus | BS4 73-0160 | |
| Piattaforma BM-6 per Isolamento dalle Vibrazioni da Banco | Attrezzatura | Technology Inc., Inglewood, CA 90301 | 25 BM-6 | |
| Elettrodo Monopolare per ECG | Attrezzatura | Harvard Apparatus | BS4 73-0200 | |
| Pompa a Rulli SCI 400 | Attrezzatura | Watson-Marlow Pumps Group | 401U/D1 | |
| Pompa a Rulli MasterFlex Easy Load II | Attrezzatura | Cole-Parmer | Modello 77201-60 | |
| Tubazione Marprene #14 | Attrezzatura | Watson-Marlow Pumps Group | 902.0016.016 | |
| Tubazione MasterFlex | Attrezzatura | PharMed, Westlake, OH 44145 USA | 06485-25 | |
| Stimolatore ad Impulsi Quadrati S48 | Attrezzatura | Grass Technologies | Modello S48 | |
| Unità di Isolamento con Trasformatore RF SIU5 | Attrezzatura | Grass Technologies | Modello SIU5 | |
| Reservoir da 5 Litri con Giacca d'Acqua | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-5 | |
| Reservoir da 2 Litri con Giacca d'Acqua | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-2 | |
| Reservoir da 0,5 Litri con Giacca d'Acqua | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-0 | |
| Reservoir da 0,25 Litri con Giacca d'Acqua | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-025 | |
| Bobina Riscaldante da 10 ml | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 158822 | |
| Trappola per Bolle di Compatibilità | Attrezzatura | Radnoti Glass Technology Inc. | 130149 | |
| Cannula con Sconnessione Luer | Attrezzatura | Harvard Apparatus | 72-1444 | |
| Rubinetto a Tre Vie, FLL a MLT, Senza Coperchi per Porta | Attrezzatura | Harvard Apparatus | BS4 72-2630 | |
| Termometro a Termocoppia | Attrezzatura | Cole-Parmer | WU-91100-40 | |
| Microsonda Flessibile Ultrafine Serie IT | Attrezzatura | PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA | IT-24P | |
| Oscilloscopio Tektronix TDS 1002 | Attrezzatura | Tektronix, Inc. | TDS 1002B | |
| Monossima di 2,3-butanedione | Reagente | Sigma-Aldrich | B0753 | |
| Cloridrato di Ketamina | Reagente | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Xilazina | Reagente | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| E-TOXA-CLEAN® | Reagente | Sigma-Aldrich | E9029 | |
| Di-8-ANEPPS | Reagente | Invitrogen | D-3167 |
Riferimenti
- Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
- Hucker, W. J. Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction. Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).
- Entcheva, E., Bi....
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Ristampe e permessi
