Dissezione di Saccharomyces cerevisiae Asci

Sommario

Micromanipolazione di cellule di lievito è necessaria per l'analisi genetica meiotica o per selezionare zigoti diploidi. Queste micromanipolazioni vengono effettuate utilizzando il microago di un microscopio dissezione. Il microago viene utilizzato per trasferire le cellule ed è controllato da un micromanipolatore che sono disponibili con diversi gradi di automazione.

Abstract

Il lievito è un sistema modello altamente trattabile che viene utilizzato per studiare molti processi cellulari diversi. Il ceppo di laboratorio comune

Protocollo

Costruzione di ceppi diploidi
Protocollo per la produzione di diploidi con l'accoppiamento

1. I ceppi iniziale deve essere colpito sulla media YPD, o selettivo, se necessario, per la produzione di singole colonie. I due ceppi aploidi dovrebbe essere di tipo accoppiamento opposto (cioè Mata e MATα).
2. Utilizzando un'ansa sterile inoculazione raccogliere una piccola porzione di una colonia da uno dei due ceppi aploidi. Su una striscia nuova piastra YPD il ciclo una volta in linea retta tutta la piastra. Segnare la direzione della striscia con una freccia sul fondo del piatto.
3. Ripetere l'operazione per il secondo ceppo sulla ....

Discussione

Dissezione lievito è un utile strumento per selezionare nuove varietà con marcatori desiderato. Nel determinare il modello teorico di crescita di quattro ascospore è importante guardare al genotipo della cellula vegetativa. Se un plasmide è presente, si deve sapere se è solo esemplare, alto o basso, come questo influirà che ascospore (s) ricevono il plasmide e influenzerà le previsioni e conclusioni per quanto riguarda i ceppi manipolati.

Alcuni ceppi possono sporulare meglio di altri la pro.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Singer MSM System 200	Microscopio	Singer Instruments	NA
D-sorbitolo	Reagente	BioShop Canada	SOR508
Tris	Reagente	BioShop Canada	TRS001
Zimolasi 100T	Reagente	Seikagaku Corporation	120493
Estratto di lievito	Reagente	BioShop Canada	YEX401
Peptone	Reagente	BioShop Canada	PEP 403
D-glucosio	Reagente	BioShop Canada	GLU501
Base di azoto per lieviti	Reagente	BioShop Canada	YNB406
Bio-triptone	Reagente	BioShop Canada	TRP402
Cloruro di sodio	Reagente	BioShop Canada	SOD002
Acetato di potassio	Reagente	BioShop Canada	POA 301
Agar	Reagente	BioShop Canada	AGR003
Solfato di adenina	Reagente	BioShop Canada	ADS201
L-uracile	Reagente	BioShop Canada	URA 241
L-triptofano	Reagente	BioShop Canada	TRP 100
L-istidina	Reagente	BioShop Canada	HIS 200
L-arginina	Reagente	Amresco	0877-100G
L-metionina	Reagente	BioShop Canada	MET 222
L-tirosina	Reagente	BioShop Canada	TYR 333
L-isoleucina	Reagente	BioShop Canada	ISO 910
L-valina	Reagente	BioShop Canada	VAL 201
L-lisina	Reagente	BioShop Canada	LYS 101
L-fenilalanina	Reagente	BioShop Canada	PHA 302
Acido L-glutammico	Reagente	BioShop Canada	GLU 202
L-treonina	Reagente	BioShop Canada	THR002
L-leucina	Reagente	BioShop Canada	LEU 222