L'accoppiamento e separazione tetrade sono necessari per l'analisi genetica in Chlamydomonas reinhardtii. Qui mostriamo metodi standard per gametogenesi, l'accoppiamento, la germinazione zigote e dissezione tetrade. Questo protocollo consiste in un facile da seguire serie di passi che renderanno approcci genetici suscettibili di scienziati che hanno meno familiarità con Chlamydomonas.
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Articolo metodologico
Accoppiamento e di separazione Tetrade Chlamydomonas reinhardtii Per l'analisi genetica
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'alga verde unicellulare
Protocollo
Parte 1: Preparazione dei ceppi per gametogenesi
Nota: Tutte le manipolazioni devono essere effettuate a temperatura ambiente. Temperature maggiori e minori influenzerà la velocità di germinazione zigote e può influenzare negativamente la vitalità.
Considerazione importante: è essenziale che i ceppi di essere accoppiati sono in crescita robusta e sono privi di contaminanti funghi o batteri. Se le tensioni non sono stati trasferiti regolarmente, passaggio in terreno ricco deve precedere la generazione dei gameti.
- I ceppi di essere accoppiati vengono trasferite su piastre TAP (100 × 15 mm), 1-2 ceppi per piastra. Le cellul....
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Discussione
L'analisi genetica è semplice in Chlamydomonas, ma richiede particolari tecniche per generare gameti e progenie tetrade separati. Con ceppi sani, le tecniche sono facilmente acquisite. Con alcuni ceppi mutanti, diventa più un'arte, e si rimanda Volume 1 del Sourcebook, recentemente pubblicato Chlamydomonas per le note storiche e consigli pratici. Inoltre, va notato che ci sono molte variazioni sul tema di base sopra descritte, che vanno dal metodo per indurre gametogenesi, per il model.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da dichiarare.
Ringraziamenti
Questo protocollo si basa su tecniche apprese nel laboratorio di Francesco-André Wollman presso l'Institut de Biologie fisico-Chimique, Parigi, Francia. Gli autori hanno un debito di gratitudine a Jacqueline Girard-Bascou, che ha originariamente introdotto DBS alle tecniche di Chlamydomonas genetica. Chlamydomonas di ricerca in laboratorio degli autori 'è supportato da premio della National Science Foundation MCB-0646350.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Stirpe di tipo di accoppiamento plus | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Stirpe di tipo di accoppiamento minus | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Mezzo di crescita | |||
| N10 | Mezzo di crescita | |||
| Difco agar | Reagente | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Strumenti | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Strumenti | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Strumenti | Fisher Scientific | 08-920A |
Riferimenti
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 2nd Edition, Academic Press. San Diego, CA. Volume 1 119-273 (2005).
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Ristampe e permessi
