Articolo metodologico

Preparazione delle Culture del cervello di ratto aggregati per Neuron e Studi sullo Sviluppo Glia

DOI:

10.3791/1304

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30 settembre 2009

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1Department of Veterinary Integrative Biosciences, Texas A&M University (TAMU)

In questo articolo

Sommario

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Un protocollo per un sistema embrionale del cervello di ratto cultura globale è descritto. Progenitori multipotenti negli aggregati in grado di sviluppare e differenziarsi in neuroni, astrociti e oligodendrociti.

Abstract

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Un sistema in vitro che ricapitola lo sviluppo e la differenziazione dei progenitori in neuroni maturi e glia nel sistema nervoso centrale (SNC) potrebbe fornire una piattaforma potente per i neuroscienziati di indagare AXO-gliali interazioni, le proprietà e la differenziazione di cellule progenitrici multipotenti, e la progressione della oligodendrogliale cellule lignaggio a livello cellulare e molecolare. Descriviamo qui un aggregato SNC sistema di coltura da forebrains ratto embrionale, che può essere mantenuta in un mezzo privo di siero fino a 3-4 settimane ed è utilizzato nel nostro laboratorio come modello per lo studio dei neuroni-glia l'interazione e la mielinizzazione del SNC. Questo video verrà illustrato come isolare e coltivare queste aggregato SNC culture E16 cervello di ratto. Inoltre, dalla dissezione del cervello stesso, altamente arricchito regolare culture neuronali dissociate possono essere ottenuti facilmente e utilizzati per vari studi sui neuroni del SNC o utilizzato per co-culture con altre cellule.

Protocollo

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Preparazione prima della dissezione

Strumenti chirurgici: sterilizzare tutti forbici e pinze da dissezione autoclave

Coprioggetto pulizia:

  1. Immergere tutti coprioggetto (15 mm di diametro per 24-pozzetti) in 1L bicchiere erba nel 33% di HCl per almeno 24 ore
  2. Lavare con acqua corrente per 10 minuti con scuotere occasionali per rimuovere tutti i residui di HCl
  3. Risciacquare con acqua Millipore
  4. Scaricare l'acqua fuori
  5. Mettere a bagno in coprioggetto 95-98% di etanolo
  6. Coprioggetto trasferimento in un tessuto pulito in un piatto piano ....

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Discussione

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Primi studi riportavano la formazione di sinapsi e mielina maturo in rotazione-mediata culture senza aggregato galleggianti 1. L'aggregato SNC sistema di coltura qui descritto combina senza siero crescita delle cellule progenitrici multipotenti aggregati in tre dimensioni con la comodità di culture tradizionali in 2D per facilitare le analisi dello sviluppo delle cellule, la migrazione e la differenziazione in vitro. Il sistema può essere modificato e utilizzato per precursore neuronali ricerca s.......

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Ringraziamenti

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Questo studio è stato finanziato in parte da fondi di start-up della Texas A & M University

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Riferimenti

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
  2. Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
  3. Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....

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Coltura di progenitori del SNCProencefalo embrionale di rattoDissociazione cellulare enzimaticaProtocollo di formazione di aggregatiVetrini rivestiti di MatrigelSviluppo di neuroni e gliaModello di mielinizzazione del SNCCulture neuronali dissociateTecnica di setacciatura cellulare

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