Il raggiungimento di alta qualità e la quantità appropriata di isole umane è uno dei presupposti importanti per il trapianto di isole pancreatiche di successo. In questo video, si descrive passo dopo passo le procedure per l'isolamento delle isole pancreatiche umane (parte II: la purificazione e la cultura di isole umane) utilizzando un metodo modificato automatizzato.
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Articolo metodologico
Isolamento del pancreas umano Islet: Parte II: La purificazione e la cultura di isole umane
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gestione del diabete di tipo 1 è onerosa, sia per l'individuo e la società, che costano oltre 100 miliardi di dollari all'anno. Nonostante l'uso diffuso di monitoraggio della glicemia e insulina formulazioni nuove, molte persone ancora sviluppare devastanti complicanze secondarie. Trapianto di isole pancreatiche in grado di ripristinare nei pressi di controllo normale del glucosio in pazienti diabetici
Protocollo
1. Purificazione di isolotti
- Per avviare la procedura di purificazione isolotto, caricare la borsa COBE, morsetto tutti i tubi, tranne il tubo verde, e impostare la velocità di 1.500 e il super fuori a 0.
- Nel cofano impostare la pompa e bicchieri gradiente e collegare il tubo di raccolta al tubo verde.
- Ora il caricamento del Ficoll 1,100 può iniziare: spingere "spin", quindi aggiungere 110 ml di Ficoll 1,100 al bicchiere davanti, e avviare la pompa per caricare il sacchetto COBE. Mentre il Ficoll è caricato, premere super-out, fermare la pompa, sbloccaggio la testa della pompa e impostare la super velocità verso 100.
- Quando il....
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Discussione
Nonostante significativi progressi nelle tecniche di isolamento delle isole umana, resa isolotto rimangono estremamente variabile e imprevedibile. Purificazione del tessuto pancreatico digerito è fondamentale per recuperare una sufficiente massa isola dopo il successo digestione enzimatica per il trapianto. Il metodo di purificazione UIC è raccomandato farlo poiché un recupero superiore di isole umane ad alta purezza è stato dimostrato utilizzando questo metodo. Inoltre, fino a 50 ml di tessuto digerito possono essere c.......
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Ringraziamenti
Supportato da fondazione presso la University of Illinois a Chicago, nonché delle cellule insulari Resource Center NIH di sovvenzione (RFA-RR 05-003), la Fondazione Cristoforo, la Fondazione Efroymson, e la Fondazione Tellabs.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Centrifuga | attrezzatura | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Cobe 2991 Cell Processor | attrezzatura | Gambro. BCT | 2556 | purificazione delle isole |
| Microscopio invertito MZ6 TLBD4.1 | attrezzatura | Leica Microsystems | 4103 | |
| Piastra per colture cellulari con griglia da 2 mm | attrezzatura | Nalge Nunc international | 174926 | conteggio delle isole |
| Digital Sight DS L1 | attrezzatura | Nikon Instruments | 217267 | |
| Sacca COBE | attrezzatura monouso | O.R. Solution | 66707003 | |
| Flacone da coltura T175 | attrezzatura monouso | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| Soluzione dell'Università del Wisconsin (UW) | reagente | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Soluzione salina tampone di Hank’s (HBSS) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | reagente | Bichrom AG | L6155 | |
| Mezzo M199 (soluzione di lavaggio) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Mezzo finale di lavaggio/coltura | reagente | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Ditizione | reagente | Sigma-Aldrich | D5130 |
Riferimenti
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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Ristampe e permessi
