Automatizzato Microfluidic Lysis protocollo di sangue per l'arricchimento di cellule nucleate circolanti

Sommario

Un dispositivo automatico microfluidi è stato sviluppato per la circolazione di arricchimento delle cellule nucleate del sangue periferico attraverso la lisi degli eritrociti che garantisce l'isolamento del campione di alta qualità senza perdita di cellule.

Abstract

In tale relazione il protocollo per un dispositivo automatico microfluidi lisi del sangue è dettagliata. Circolanti cellule nucleate (CNC), tra leucociti e cellule endoteliali, offrono una piattaforma ideale per lo stato aggiornato sullo stato immunitario di un individuo. Il protocollo consente di microfluidica per l'arricchimento di CNC, senza perdita di cellule selettive e preparazione variabilità del campione a causa di user-mediata passi. In breve, il protocollo prevede fabbricazione del dispositivo, la raccolta dei campioni, l'installazione del dispositivo e l'esecuzione del sangue attraverso la camera di microfluidica. All'interno del dispositivo di sangue intero si sta rapidamente miscelato con acqua deionizzata per circa 10 secondi in un micron 50 x 150 micron canale microfluidica. In questo arco di tempo eritrociti vengono lisati a causa delle condizioni ipotoniche. Strutture a spina di pesce sul fondo del canale garantire completa miscelazione e l'esposizione delle cellule ad un ambiente costante. Cellule rimanenti vengono restituiti alle condizioni isotonica all'uscita del dispositivo, fisso con 2% paraformaldeide, centrifugato per separare i detriti degli eritrociti dal CNC, e sospese in tampone di flusso per la colorazione e analisi mediante citometria a flusso. I risultati mostrano trame citometria a flusso pulito dispersione con popolazioni CNC salvato. Significato di questo dispositivo e il protocollo entra nello studio e nella comprensione della patogenesi della malattia attraverso l'analisi delle popolazioni CNC. Quindi, l'automazione, l'efficacia e la semplicità del protocollo microfluidica sono dimostrati.

Protocollo

Parte 1. Dispositivo di fabbricazione Microfluidic

Uno stampo in silicone maestro del dispositivo lisi microfluidi è stato creato utilizzando le normali tecniche di fotolitografia con l'attrezzatura presso l'Università di Louisville camera bianca [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc., San Rafael, CA) è stato utilizzato per generare una maschera di trasparenza (Fineline Imaging, Colorado Springs, CO) per creare repliche negative dei canali. Il dispositivo lisi microfluidica è stato realizzato dal maestro stampo in silicone morbido utilizzando tecniche litografiche con l'elastomero poliestere (dimetilsiloxano) (PDMS; Dow Corning, Midland, MI). L'elast....

Discussione

Un sistema automatizzato microfluidici protocollo di lisi del sangue è stata riportata. All'interno del protocollo sono passaggi critici degni di nota. Nella sezione P.2.1, è importante per scartare il flaconcino prima sangue raccolto, come il campione contiene sloggiato cellule mature endoteliali in qualità di falsi positivi. Inoltre, assicurarsi di eseguire il campione di sangue entro un'ora dalla raccolta. Priming il dispositivo a microfluidi nella sezione P.2.2, è importante per liberare inizialmente delle b.......