Risposte elettrofisiologiche dei neuroni sensoriali olfattivi di odori può essere misurata in insetti utilizzando registrazioni sensillum singolo. In questo articolo il video ci mostrerà come eseguire registrazioni sensillum singolo nelle antenne del moscerino della frutta ( Drosophila melanogaster) E la palpi mascellari della zanzara della malaria ( Anopheles gambiae).
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Articolo metodologico
Registrazioni Sensillum singolo in Insetti Drosophila melanogaster E Anopheles gambiae
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'olfatto è essenziale per gli insetti di trovare cibo, compagni, predatori e siti di deposizione delle uova 3. Insetti neuroni olfattivi sensoriali (OSNs) sono racchiusi in peli sensoriali chiamati sensilli, che coprono la superficie degli organi olfattivi. La superficie di ogni sensillum è coperta di minuscoli pori, attraverso i quali passano odoranti e si dissolvono in un liquido chiamato linfa sensillum, che bagna i dendriti sensoriali della OSNs ospitato in un sensillum dato. I dendriti OSN esprimere recettore odorizzante (OR) proteine, che in funzione di insetti come odore canali ionici 4, 5. L'interazione di odoranti con OR aumenta o diminuisce la velocità basale cottura della OSN. Questa attività neuronale, sotto forma di potenziali d'azione rappresenta la prima rappresentazione della qualità, intensità e caratteristiche temporali del odorizzante 6, 7.
Dato il facile accesso a questi peli sensoriali, è possibile effettuare registrazioni extracellulari da OSNs singolo con l'introduzione di un elettrodo di registrazione nella linfa sensillum, mentre l'elettrodo di riferimento si trova nella linfa degli occhi o del corpo dell'insetto. In Drosophila, sensilli casa da uno a quattro OSNs, ma ogni OSN mostra tipicamente un caratteristico picco di ampiezza. Tecniche di ordinamento Spike permettono di assegnare le risposte spiking a OSNs individuali. Questo singolo registrazione sensillum (SSR) tecnica controlla la differenza di potenziale tra la linfa sensillum e l'elettrodo di riferimento come picchi elettrici che vengono generati dall'attività recettore sulla OSNs 1, 2, 8. Cambiamenti nel numero di picchi in risposta alla odorizzante rappresentare la base cellulare di odore di codifica negli insetti. Qui, descriviamo il metodo di preparazione attualmente in uso nel nostro laboratorio per eseguire SSR sulla Drosophila melanogaster e Anopheles gambiae, e mostrano tracce di rappresentanza indotta dalla odoranti in un sensillum specifico modo.
Protocollo
1. Odore diluizioni
- La maggior parte dei odoranti sono solubili in olio di paraffina. Tuttavia, DMSO o l'etanolo può essere utilizzato anche come solventi alternativi per gli odori particolari. Preparare diluizioni appropriate (ad esempio 1:10 del volume: volume, v: v) da odoranti puro in flaconcini di vetro. La maggior parte degli odori diluizioni sono stabili a temperatura ambiente, ma per i composti altamente volatili è meglio fare diluizioni di lavoro su base settimanale. Ogni sensillum risponde a diversi odori all'interno di un range di concentrazione diversa. Per Drosophila, un utile look-up table per concentrazioni adeguate per l'utilizzo c....
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Discussione
Stimoli olfattivi vengono utilizzati dagli organismi di identificare fonti di cibo, potenziali compagni, e predatori. Neuroni sensoriali olfattivi (OSNs) sono al centro primo relè tra stimoli esterni e centri superiori del cervello dove le informazioni vengono successivamente trattati. In Drosophila melanogaster e Anopheles gambiae, OSNs sono facilmente accessibili e la loro attività elettrica possono essere monitorati, mentre stimolato da sbuffi odore.
Il singolo di regist.......
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Olio di paraffina | Odori | Fluka | 76235 | |
| Odori ad alta purezza (>98%) | Odori | Sigma-Aldrich | Acetato di metile #296996 1-octen-3-olo #74950 | |
| Strisce di carta filtro | Odori | Fisher Scientific | 05-714-1 | Carta da cromatografia |
| Connettori | Odori | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16x1/8" |
| Flaconi in vetro | Odori | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
| Tubatura in plastica per linea d'aria | Consegna odore | Python Products | 500PAL | |
| 1 pipetta serologica | Consegna odore | Corning | 4101 | 10 mL |
| Tubatura in plastica | Consegna odore | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0,050"x0,090"OD |
| Pipette Pasteur in vetro borosilicato monouso | Consegna odore | Fisher Scientific | 13-678-20A | 5-3/4 pollici |
| Controllore stimolo programmabile | Consegna odore | Syntech | CS-55 | |
| Tavolo antivibrazioni | Attrezzatura elettrofisiologica | TMC | 63533 | 36”Lx30”Px29”A |
| Gabbia di Faraday | Attrezzatura elettrofisiologica | TMC | MI8133303 | |
| Microscopio invertito | Attrezzatura elettrofisiologica | Nikon Instruments | E600FN ECLIPSE | Microscopio per registrazione |
| Ottiche da 10x e 100x | Attrezzatura elettrofisiologica | Nikon Instruments | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
| Microscopio stereoscopico | Attrezzatura elettrofisiologica | Nikon Instruments | EZ645 | Microscopio per affilatura elettrodi/preparazione insetti |
| Supporti magnetici | Attrezzatura elettrofisiologica | Newport Corp. | MODEL 150 | |
| IDAC | Attrezzatura elettrofisiologica | Syntech | IDAC-4 | |
| Software di acquisizione | Attrezzatura elettrofisiologica | Syntech | Autospike | |
| 1 macromanipolatore | Attrezzatura elettrofisiologica | Narishige International | MN-151 | Manipolatore a joystick Utilizzato per posizionare l'elettrodo di riferimento |
| 1 micromanipolatore | Attrezzatura elettrofisiologica | EXFO | PCS-6000 | Utilizzato per posizionare l'elettrodo di registrazione |
| Morsetto a coccodrillo | Attrezzatura elettrofisiologica | Pomona | AL-B-12-0 | |
| Cavo elettrico | Attrezzatura elettrofisiologica | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
| 2 supporti per elettrodi | Attrezzatura elettrofisiologica | Syntech | N/A | Supporti per elettrodi (set di 2) per elettrodo in filo di tungsteno |
| Prova AC | Attrezzatura elettrofisiologica | Syntech | N/A | Prova universale singola (10xAC) |
| Elettrodi in tungsteno | Attrezzatura elettrofisiologica | Microprobes | M210 | barre di tungsteno dritte, 0,005x3 |
| Idrossido di potassio | Attrezzatura elettrofisiologica | Sigma-Aldrich | 221473 | |
| Siringa | Attrezzatura elettrofisiologica | BD Biosciences | 301625 | 20 mL |
| Alimentatore | Attrezzatura elettrofisiologica | Wild Heerbrugg | ad es. MTR32 | |
| Trattore verticale | Preparazione insetti | Narishige International | PB-7 | |
| Lama da rasoio | Preparazione insetti | VWR international | 55411-050 | |
| Cera da dentista | Preparazione insetti | Patterson | 091-1503 | |
| Vetrino per microscopio | Preparazione insetti | Fisher Scientific | 12-550A | |
| Vetro coprioggetto | Preparazione insetti | Fisher Scientific | 12-541A | 18X18 #1,5 |
| Rete in polipropilene | Preparazione insetti | Small Parts, Inc. | CMP-0500-B | |
| Elettrodo in vetro | Preparazione insetti | Frederick Haer and Co. | 27-32-0-075 | Tubatura capillare in vetro borosilicato 1,5 mm OD x 1,12 mm ID x 75 mm |
| Nastro adesivo doppio (3M) | Preparazione insetti | 3M | MMM6652P3436 | Nastro adesivo doppio (3M) |
| Pinze | Preparazione insetti | Fine Science Tools | 021x0053 | Pinze Dumont #5 finitura specchio |
| Bicchierino in plastica piccolo | Preparazione insetti | VWR international | 89009-662 | 7 x 5,7 (23/4 x 21/4) |
| Aspiratore elettrico | Preparazione insetti | Gempler’s | RHM200 |
Riferimenti
- Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
- Schneider, D., Hecker, E.
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Ristampe e permessi
