Questo protocollo descrive un microfluidica co-coltura modello per la cultura contemporanea e localizzato delle cellule epiteliali e batteri. Questo modello può essere utilizzato per indagare il ruolo dei diversi segnali solubili molecolare sulla patogenesi e schermo l'efficacia del putativo ceppi batterici probiotici.
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Articolo metodologico
Microfluidica Co-coltura di cellule epiteliali e batteri per le indagini solubile del segnale mediato da Interazioni
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'essere umano gastrointestinale (GI) è un ambiente unico in cui cellule epiteliali intestinali e non patogeni (commensale) batteri coesistono. E 'stato proposto che il microambiente che il patogeno incontra nello strato commensali è importante per determinare l'entità della colonizzazione. Metodi di coltura per lo studio attuale colonizzazione dei patogeni non sono adatti per indagare questa ipotesi in quanto non consentono di co-coltura di batteri e cellule epiteliali in un modo che simula il microambiente del tratto gastrointestinale. Qui descriviamo una microfluidica co-coltura modello che consente la cultura indipendente delle cellule eucariotiche e batteri, e testare l'effetto del microambiente commensale sulla colonizzazione dei patogeni. La co-coltura modello è dimostrato attraverso lo sviluppo di un commensale
Protocollo
1. Fabbricazione di maestri silicio utilizzando le normali SU-8 fotolitografia 1 (non mostrato in questo video).
- Uso standard SU-8 metodi di fotolitografia per creare un SU-8 "maestri" (SU-8 2050, MicroChem, Newton, MA) per la realizzazione delle diverse componenti (membrane PDMS di diverso spessore, co-coltura da camera) in una camera sterile. Stampi maestro tale può essere fabbricato in qualunque impianto di microfabbricazione (ad esempio, Stanford Microfluidica Fonderia; http://thebigone.stanford.edu/foundry/ ).
- Prima della replica PDMS, esporre il SU-8 maestri fluorosila....
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Discussione
Test convenzionale per attaccamento patogeno e la colonizzazione utilizzare un monostrato di cellule eucariote in piastre di coltura dei tessuti in cui vengono aggiunti gli agenti patogeni. Questi modelli non sono fisiologicamente rilevanti in quanto non contengono un commensale biofilm batterici sviluppato su cellule eucariotiche. Semplice aggiunta di un pre-cresciuta coltura batterica alle cellule eucariotiche è improbabile che possa portare a questa conformazione come biofilm sono altamente organizzate strutture che .......
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Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto in parte dalla National Science Foundation (cbet 0.846.453) e il National Institutes of Health (1R01GM089999).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | MicroChem Corp. | ||
| maschera per fotolitografia ad alta risoluzione (16.256 dpi) | Fineline-Imaging Inc, CO | ||
| Tricloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctil)silano | Sigma-Aldrich | 77279 | |
| PDMS | Dow Corning | 184 SIL ELAST KIT 0,5KG | |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH30002.02 | |
| centrifuga programmabile per rivestimenti | Laurell Tech Corp | WS0650S | |
| allineatore di maschere | Neurotronix | Q4000 | |
| incisore al plasma di ossigeno | March Plasma System, CA | CS-1701 | |
| pompa per siringa | Harvard Apparatus | ||
| Kit Live/Dead per vitalità/citotossicità | Invitrogen | L-3224 |
Riferimenti
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Jeon, N. L. Design and fabrication of integrated passive valves....
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Ristampe e permessi
