Articolo metodologico
* These authors contributed equally
Questo video illustra un metodo per analizzare e cultura neuroni commissurali dalla E13 del midollo spinale dorsale di ratto. Dissociato neuroni commissurali sono utili per studiare i meccanismi cellulari e molecolari della crescita degli assoni e di orientamento.
Commissurali neuroni sono stati ampiamente utilizzati per studiare i meccanismi alla base di guida degli assoni durante lo sviluppo embrionale del midollo spinale. I corpi cellulari di questi neuroni si trovano nel midollo spinale dorsale e la loro assoni seguire traiettorie stereotipati durante lo sviluppo embrionale. Assoni commissurali inizialmente progetto ventralmente verso il fondello. Dopo aver attraversato la linea mediana, questi assoni svolta anteriormente e verso il progetto del cervello. Ognuno di questi passi è regolata dall'azione di spunti di guida diversi. Culture altamente arricchito nei neuroni commissurali sono ideali per molti esperimenti affrontare i meccanismi di pathfinding assone, tra cui saggi di tornitura, immunochimica e biochimica. Qui, descriviamo un metodo per analizzare e cultura neuroni commissurali dalla E13 del midollo spinale dorsale di ratto. In primo luogo, il midollo spinale è isolato e strisce dorsali sono sezionati fuori. Il tessuto dorsale è poi dissociata in una sospensione cellulare da tripsinizzazione e distruzione meccanica. I neuroni sono placcati su poli-L-lisina rivestite coprioggetto di vetro o dei tessuti-cultura piatti. Dopo 30 ore
1. Dissezione del cavo embrionale dorsale spinale di ratto
Raccomandazioni generali
Tenere L-15 di media su ghiaccio e cambiare spesso il medium nel piatto dissezione per mantenere gli embrioni freschi. Questo aiuta a preservare l'integrità dei tessuti. Tutti i passaggi vengono eseguiti con due paia di pinzette Dumont # 5, a meno indicato. Per evitare la contaminazione, spruzzare tutti gli strumenti e le superfici di lavoro con il 70% di etanolo e mantenere medie bottiglia dissezione chiuso. Per trasferire embrioni tra piatti, usare una pipetta di plastica tagliata o un mestolo forato. E 'fondamentale non danneggia....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Abbiamo descritto un metodo per analizzare e cultura neuroni commissurali dal midollo spinale di ratto embrionale. Questa procedura è stata utilizzata di routine nel nostro laboratorio per la preparazione affidabile neuroni per studiare i meccanismi cellulari e molecolari di orientamento degli assoni. Per la biologia cellulare e gli esperimenti immunochimica, dissezione di una cucciolata produce i neuroni sufficienti. Quando le cellule sono più necessari, come in molti esperimenti di biochimica, la dissezione di due cuc.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR), il Peter Lougheed Medical Research Foundation, il programma di McGill in Neuroingegneria, Fonds de la Recherche en Santé du Québec (FRSQ), e la Fondazione canadese per l'innovazione (CFI ). D. Sébastien Langlois è stato sostenuto dal Premio La formazione di un Master presso il Fonds de la Recherche en Santé du Québec (FRSQ) e da un Frederick Banting e Charles Premio per la Migliore Canada Laurea Borse di Studio del Maestro dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR). Siamo grati a Jessica MT Pham per l'assistenza con figure.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dissezione del cavo embrionale dorsale spinale di ratto (vedi anche tabella I)
Commissurali neurone cultura (vedi anche tabella I)
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Richiedi il permesso di riutilizzare il testo o le figure di questo articolo JoVE
Richiedi permesso