Articolo metodologico

Recupero degli ovociti mouse

DOI:

10.3791/185

⸱

28 aprile 2007

 , 
1Dept. of Biological Chemistry, University of California, Irvine (UCI)

In questo articolo

Sommario

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Questo protocollo illustra la tecnica per l'estrazione di ovociti o di embrioni fecondati in fase iniziale dalla ovidotto di topi. La capacità di identificare i infindibulum e inserire un ago senza punta fine in esso è essenziale per eseguire correttamente la procedura.

Abstract

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Fino ad oggi, solo pochi studi hanno riportato manipolazioni successo dell'embriogenesi Peromyscus o biologia riproduttiva. Insieme con la Borsa di Centro Genetico Peromyscus (http://stkctr.biol.sc.edu), si stanno caratterizzando le differenze salienti necessari per sviluppare questo sistema. Un obiettivo primario è stato quello di ottimizzare ovociti / recupero embrione precoce.

Protocollo

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Embrione / recupero degli ovociti

  1. Almeno due ore prima il recupero degli embrioni / ovociti, KSOM si trova nel 37 º C CO 2 incubatore e FHM devono essere scongelati da -20 °. Un piatto di vetro contenente tre pozzi poco profondi concava viene usato per gocce casa di KSOM nell'incubatrice. Per prevenire la disidratazione, la KSOM piatto e sono posti in un contenitore con coperchio che ha l'acqua sul fondo. Questo apparecchio evita l'evaporazione senza l'uso di olio minerale.

  2. Gli ovidotti da una femmina l'ovulazione sono posti nei media FHM. Per garantire l'orientamento e un infindibulum intatto, una p....

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Discussione

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In questo articolo, dimostriamo il recupero di ovociti da ovulazione indotta (superovulated) Peromyscus. L'uso di superovulazione (al contrario di naturale ciclo estrale) è comune a causa del numero molto maggiore che ne derivano. Tuttavia, bisogna fare attenzione nell'interpretare tali risultati utilizzando ovociti / embrioni, in quanto entrambi gli ormoni usati per indurre l'ovulazione e la coltura può avere effetti.

Quando estrale è stata confermata, le femmine sono euthenized e ovidotti recuperato insieme ad una picc.......

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Ringraziamenti

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Vorrei ringraziare Mike Dewey dal Centro Peromyscus patrimonio genetico per il suo aiuto, la pazienza e la conoscenza.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Ago per lavaggioStrumentoZephyrtronicsZT5-130-L30 G ottuso
Pinzette (2)StrumentoRoboz Surgical Instruments Co.RS-5060
PeromyscusAnimalePeromyscus Genetic Stock Center
ForbiciStrumentoRoboz Surgical Instruments Co.RS-5880
Mezzo FHM tamponato con HEPESReagenteSpecialty MediaMR-025-d
Mezzo di coltura embrionale KSOM (5x 10 mL)ReagenteSpecialty MediaMR-020P-5F
Pipetta oraleStrumentoTirata da capillari di vetro e collegata a tubo di gomma
Piatto per il mantenimento degli ovocitiStrumentoContenitore di vetro con depressioni concave

Ristampe e permessi

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Tag

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