Sezioni di plastica mantenere morfologia vero tessuto in sezioni sottili di tessuto che può essere immunoistochimica con anticorpi secondari fluorescenti, rendendo questo metodo più utile di sezioni in paraffina o congelati per molti tipi di tessuto. Il metodo per la colorazione, di inclusione, e sezionamento è dimostrato in questo video.
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Articolo metodologico
Incorporare plastica e Sezionamento embrioni di Xenopus laevis
In questo articolo
Sommario
Protocollo
Fissazione
- Trasferimento degli embrioni intero o sezionato in espianti MEMFA o 3,7% FA + PBS in una piccola fiala di vetro scintillazione (cat Fisher # 03-339-25B). Incubare fiala sul nutator a temperatura ambiente, solo per 2 ore, e non di più. Non lasciare l'embrione in FA per più di 2 ore. Più a lungo di incubazione in FA renderà più difficile il tessuto embrionale e determinare una scarsa penetrazione di anticorpi nel processo di rilevamento.
- Aspirare la maggior parte delle FA e aggiungere fissativo Dent fino alla cima del flaconcino (~ 4,5 ml). Capovolgere delicatamente il flaconcino per un paio di volte per l....
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Materiali
Anticorpo primario contro il tuo antigene o tag epitopo: Effettuare una diluizione appropriata in PBT. Biotina coniugato anticorpo secondario: vari fornitori vendono biotina-anticorpi coniugati.
Ristampe e permessi
