In questo articolo vengono descritte le procedure di un test metastasi sperimentale che viene utilizzato per determinare il potenziale metastatico di linee cellulari tumorali umane.
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Articolo metodologico
Metastasi di analisi sperimentale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Per capire il meccanismo di metastasi, un test sperimentale metastasi è stata stabilita utilizzando topi immunodeficienti. Questo articolo delinea le procedure coinvolte in questo test, compresa la preparazione del campione, l'iniezione endovenosa, coltura e le cellule di metastasi polmonari. In breve, un pre-determinato numero di cellule tumorali umane sono state preparate
Protocollo
1. Preparazione del campione
- Crescere le cellule a confluenti ~ 70% nelle loro supporto specifico con fattori di crescita o FBS (ad esempio, con DMEM 10% FBS per MC-1 le cellule). Aspirare multimediali da piastra e lavare delicatamente più volte con 1 x PBS (8 g / L di NaCl, 0,2 g / L di KCl, 1,15 g / L di Na 2 HPO 4 0,7 H 2 O, 0,2 g / L di KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Aspirare il PBS e aggiungere 2 ml di tripsina 0,05% a versene (0,014 g / L di rosso fenolo e 0,2 g / L di EDTA-Na in 1 x PBS, pH 7,2). Scuotere delicatamente piastra per facilitare il distacco delle cellule dalla piastra. Osservare le c....
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Discussione
Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Si tratta di quattro fasi principali: il distacco delle cellule tumorali dal loro loci primaria, la loro entrata in circolazione (intravasation), la loro uscita dalla circolazione (stravaso), e la sopravvivenza e la crescita in un organo lontano. Metastasi in umano è considerato un processo lento e spesso si manifesta dopo anni di latenza. Per studiare la sua progressione in modo tempestivo, quanto sopra relativamente rapido test sperimentale è stato stab.......
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Ringraziamenti
Questo protocollo è stato testato e ottimizzato inizialmente in laboratorio del Dr. Richard Hynes (MIT). Il finanziamento è fornito dalla PREMIO IDEA NYSTEM (a LX) e Ruth L. Kirschstein Premio Nazionale Research Service (a LX).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Rosso fenolo | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Blu di tripano | Invitrogen | 15250-061 | |
| Tripsina 2,5% | Invitrogen | 15090-046 | |
| Etilene | Ultrapuro | 200-CSGP | |
| Provetta Falcon da 50 ml | VWR international | 89039-656 | |
| Provette per microcentrifuga | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Filtro cellulare Falcon da 70μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Provetta per coltura Falcon da 5 ml | VWR international | 60818-576 | |
| Emocitometro | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| Siringa da 1 ml | BD Biosciences | 329650 | |
| Ago da 30 ½ gauge | BD Biosciences | 305106 | |
| Dispositivo di contenimento per topo | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Forbici chirurgiche | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pinzette | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Microscopio stereoscopico | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Centrifuga da banco | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Riferimenti
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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Ristampe e permessi
