Xenopus embrionale epiteli sono un sistema modello ideale per studiare i comportamenti delle cellule, come lo sviluppo di polarità e cambiare forma durante la morfogenesi epiteliale. Istologia tradizionale di campioni fisso è sempre più integrato da live-cell imaging confocale. Qui mostriamo metodi per isolare i tessuti rana e visualizzare dal vivo le cellule epiteliali e le loro citoscheletro con live-cell microscopia confocale.
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Articolo metodologico
Live-cell imaging e analisi quantitativa della embrionali in cellule epiteliali Xenopus laevis
In questo articolo
Sommario
Abstract
Embrionale cellule epiteliali servire come un modello ideale per studiare la morfogenesi in cui multicellulari tessuti subiscono cambiamenti nella loro geometria, quali i cambiamenti nella zona delle cellule di superficie e altezza della cella, e dove le cellule subiscono mitosi e migrano. Inoltre, le cellule epiteliali possono anche regolare i movimenti morfogenetici nei tessuti adiacenti
Protocollo
Prima di iniziare
- Sintetizzare mRNA ricoperto da un modello di DNA linearizzato codifica per la proteina fluorescente tag e purificare l'mRNA con metodi standard (kit di Trascrizione AmpliCap; Biotecnologie Epicentre, Madison WI). mRNA deve frazionare per l'utilizzo sola volta in provette ml 0,2 centrifuga e conservati a -80 ° C.
- Metodi standard per ottenere le uova, la fecondazione in vitro, e la rimozione del pelo dell'uovo sono state descritte in precedenza 2. Una procedura per ottenere le uova da una rana Xenopus laevis femminile è stato dimostrato in precedenza 3. Fertilizzare gli ovuli ....
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Discussione
Abbiamo presentato protocolli sperimentali usati regolarmente nel nostro laboratorio di citoscheletro immagine che cambiano dinamicamente nella corteccia cellula apicale e oscillante membrane cellulari delle cellule epiteliali in embrioni di Xenopus. Si dovrebbe utilizzare questi protocolli come punto di partenza per il live-imaging delle forme delle cellule epiteliali, ottimizzazione di questo protocollo è essenziale e alcune delle impostazioni cambia a seconda del tipo di sistema microscopio si ha e il tipo d.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da una National Institutes of Health (R01-HD044750), una borsa di studio dalla National Science Foundation, e il supporto della American Heart Association (inizio Grant-in-Aid). Gli autori ringraziano i membri Davidson Lab: HY Kim, M. von Dassow e J. Zhou (per un aiuto con responsabilità di laboratorio tutti i giorni), e Lin Zhang per la sua assistenza nel campo della biologia molecolare e la sintesi di mRNA. Noi riconosciamo gli sforzi sperimentali da tutti i laboratori rana (soprattutto Ray Keller e Doug DeSimone) che hanno contribuito ad una parte di questo protocollo, attraverso lo sviluppo e metodi di prova diversi nel corso degl....
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Riferimenti
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).
- Cross, M. K., Powers, M.
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Ristampe e permessi
