Quantitativa real-time PCR (QRT-PCR) è un efficace strumento per diagnosticare i livelli di mRNA nei tessuti degli insetti diversi e fasi di sviluppo. In questo rapporto si mostra l'uso di qRT-PCR per accertare i livelli di mRNA in diversi tessuti larvali e gli stadi di sviluppo delle specie di insetti invasivi, smeraldo piralide cenere.
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Articolo metodologico
Analisi dell'espressione genica in Borer Emerald Ash ( Agrilus planipennis) Utilizzando quantitativa Real Time-PCR
In questo articolo
Sommario
Abstract
Emerald cenere piralide (EAB,
Protocollo
Il protocollo completo di diversi passaggi è raffigurato nel diagramma di flusso nella Figura 1. Singole fasi che costituiscono la dissezione, l'estrazione di RNA, la sintesi Strand Prima cDNA e qRT-PCR sono descritti di seguito.
I. larvali Dissection
- Prima dell'inizio di questa procedura, posto piralide cenere Smeraldo, o EAB, larve su una carta assorbente umida fino dissezioni vengono eseguite. Mantenere fresco preparato 1X tampone fosfato salino, o PBS, sul ghiaccio per mantenere il freddo del buffer durante la dissezione.
- Per iniziare, fissare le larve EAB sul piatto dissezione con perni dissezione fine. Quindi, a....
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Discussione
I cicli soglia (Ct) il valore si ottiene per ogni campione in qRT-PCR piatto. Per fare la curva standard, il valore Ct ottenuti per ogni diluizione è stato in funzione del log della sua concentrazione. I valori Ct per i campioni sperimentali sono stati poi riportati su questa curva standard di diluizione della serie. Quantità obiettivo sono stati calcolati da separare le curve standard generato per ogni tessuto cioè esperimento e l'espressione dello sviluppo. I valori di espressione relativa (giri) sono stati poi de.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Riconosciamo l'aiuto fornito da Lourdes Delta Arrueta Antequera (Dipartimento di Entomologia, Ohio State University / OARDC, Wooster, OH) nella configurazione degli esperimenti. Ringraziamo il Dott. Teresa Polonia (USDA, Servizi forestali, NRS) per inviare i campioni EAB larvale. Aiuto fornito dal Dr. Luis A Canas e Nuris M Acosta con la configurazione microscopio è apprezzato. Il finanziamento per questo progetto è stato fornito da fondi statali e federali assegnare alle agricola dell'Ohio Centro Ricerca e Sviluppo, The Ohio State University.
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Riferimenti
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola dest....
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Ristampe e permessi
