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Articolo metodologico
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30 aprile 2023
Fonte: Sarasija, S. e Norman, K. R. Misurazione dei tassi di consumo di ossigeno in Caenorhabditis elegans intatta. J. Vis. Exp. (2019).
In questo video, mostriamo un metodo per produrre una popolazione sincronizzata con lo sviluppo di C. elegans adulti sterili. Il protocollo di esempio sincronizza i vermi per studiare i tassi di consumo di ossigeno negli animali vivi.
Questo protocollo è un estratto da Sarasija e Norman, Misurazione dei tassi di consumo di ossigeno in Caenorhabditis elegans intatta, J. Vis. Exp. (2019).
1. Crescita e sincronizzazione della popolazione di nematodi
Questi animali raggiungeranno lo stadio larvale L4 dopo ~42 ore. A questo punto, spostare le larve L4 utilizzando un plettro di platino su piastre NGM con semina OP50 contenenti 0,5 mg/mL di 5-fluoro-2'-deossiuridina (FUdR) per evitare che producano progenie.
NOTA Assicurati che all'interno di un esperimento tutte le deformazioni sian....
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Tabella 1: Ricette per piastre NGM, tampone M9 e soluzione di candeggina.
.......| Tampone M9 (1 L) | |||
| dH2O | 1.000 ml | ||
| NaCl | 5 g | ||
| KH2PO4 | 3 g |
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Nessun conflitto di interessi dichiarato.
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 100 mm; piastre Petri da 60 mm | Kord-Valmark Labware Prodotti | 2900; 2901 | |
| 15 mL provette coniche | Corning | 430791 | |
| 50 mL provette coniche | Corning | 430829 | |
| Agar | Fisher Scientifico | BP1423-2 | |
| Bacto peptone | Bd; Bacto | 211677 | |
| Bacto tryptone | Bd; Bacto | 211705 | |
| Bacto estratto di lievito | Bd; Bacto | 212705 | |
| Candeggina | generico | ||
| Cloruro di calcio diidrato (CaCl2·2H2O) | Fisher Scientifico | C79-500 | |
| Colesterolo | Fisher Scientifico | C314-500 | |
| Acqua deionizzata (dH2O) | |||
| Pipette in vetro Pasteur | Krackeler Scientifico | 6-72050-900 | |
| Solfato di magnesio eptaidrato (MgSO4·7H2O) | Fisher Scientifico | BP213-1 | |
| Potassio fosfato bibasico (K2HPO4) | Fisher Scientifico | BP363-1 | |
| Fosfato di potassio monobasico (KH2PO4) | Fisher Scientifico | P285-500 | |
| Cloruro di sodio | Fisher Scientifico | BP358-10 | |
| Idrossido di sodio (NaOH) | Fisher Scientifico | BP359-500 | |
| Sodio fosfato bibasico anidro (Na2HPO4) | Fisher Scientifico | BP332-1 |
